本发明专利技术公开了一种用于鉴定小麦籽粒过氧化物酶活性的分子标记及其应用。本发明专利技术的分子标记由如下(1)和(2)所示的引物对组成：(1)为由SEQ ID No.1所示的单链DNA和SEQ ID No.2所示的单链DNA组成的引物对1；(2)为由SEQ ID No.3所示的单链DNA和SEQ ID No.4所示的单链DNA组成的引物对2。通过实验证明：本发明专利技术的分子标记能快速鉴定TaPod-D1a和TaPod-D1b等位变异及其与小麦POD活性的相关关系，并筛选出具有较高POD活性的小麦品种，不仅加速了优质小麦新品种的育成步伐，而且对利用分子标记辅助选择高POD活性小麦品种具有重要的理论意义和经济价值。
【技术实现步骤摘要】
一种用于鉴定小麦籽粒过氧化物酶活性的分子标记及其应用
本专利技术属于生物
，具体涉及一种用于鉴定小麦籽粒过氧化物酶活性的分子标记及其应用。
技术介绍
面粉及其制品颜色是小麦品质遗传改良的重要内容，颜色已成为制约我国面粉及其制品品质的重要因素。过氧化物酶(Peroxidase，POD)活性是影响面制品颜色和加工品质的主要因素，在小麦制品加工和贮存期间引起面粉和面制品失色、变白。POD主要通过催化含有羧基、酮基的化合物与酚类、芳香族等不饱和双键释放出分子氧，释放出的分子氧能将面粉及面制品中色素分子的共轭双键氧化为单键，从而对面粉颜色起到漂白作用。因此，通过现代分子生物学手段研究小麦籽粒POD活性基因的遗传基础、克隆POD基因、发掘优异等位变异、开发其功能标记并培育POD活性高的小麦品种对我国小麦品质改良具有重要意义。POD活性主要受基因型影响,小麦籽粒POD活性主效QTL还不明确。虽然环境因素对POD活性有一定影响，但主要受遗传因素影响。在禾本科作物中，普通小麦具有最高的POD活性，其活性分别是燕麦、水稻和玉米的3倍、6倍和7倍。研究表明，普通小麦POD活性显著高于(P<0.05)硬粒小麦。在普通小麦的不同品种间POD活性可相差3-10倍。因此通过遗传和常规育种途径改良POD活性，并利用分子标记辅助选择快速改良我国小麦面制品颜色、提高小麦附加值具有重要的理论意义和经济价值。
技术实现思路
本专利技术的一个目的是提供一种鉴定小麦籽粒过氧化物酶活性的成套引物。本专利技术提供的鉴定小麦籽粒过氧化物酶活性的成套引物由如下(1)和(2)所示的引物对组成：(1)为由SEQIDNo.1所示的单链DNA和SEQIDNo.2所示的单链DNA组成的引物对1；(2)为由SEQIDNo.3所示的单链DNA和SEQIDNo.4所示的单链DNA组成的引物对2。本专利技术的另一个目的是提供一种鉴定小麦籽粒过氧化物酶活性的PCR试剂。本专利技术提供的鉴定小麦籽粒过氧化物酶活性的PCR试剂由PCR试剂1和PCR试剂2组成。上述PCR试剂中，所述PCR试剂1包括上述成套引物中的引物对1；所述PCR试剂2包括上述成套引物中的引物对2。上述PCR试剂中，所述成套引物中各个引物对独立包装，各条引物独立包装。上述PCR试剂中，所述引物对1和所述引物对2的各条引物在其对应的所述PCR试剂中的终浓度均为10-7mol/L。本专利技术还有一个目的是提供含有上述成套引物或上述PCR试剂的试剂盒。上述的成套引物或上述的PCR试剂或上述的试剂盒在检测或辅助检测小麦籽粒的POD活性高低中的应用也属于本专利技术的保护范围。上述的成套引物或上述的PCR试剂或上述的试剂盒在检测或辅助检测待测小麦为高POD活性小麦或低POD活性小麦中的应用也属于本专利技术的保护范围。上述应用中，所述高POD活性小麦中的POD活性小于等于506.5Umin-1g-1；所述低POD活性小麦中的POD活性大于等于518.5Umin-1g-1，小麦的POD活性通过检测小麦籽粒的POD活性体现。上述的成套引物或上述的PCR试剂或上述的试剂盒在如下(1)-(7)中至少一种中的应用也属于本专利技术的保护范围。(1)鉴定或辅助鉴定待测小麦POD活性高低中的应用；(2)鉴定或辅助鉴定低POD活性小麦品种；(3)鉴定或辅助鉴定高POD活性小麦品种；(4)比较或辅助比较不同待测小麦品种的POD活性；(5)鉴定或辅助鉴定待测小麦含有TaPod-D1a基因还是TaPod-D1b基因；(6)鉴定或辅助鉴定含有TaPod-D1a基因的小麦品种；(7)鉴定或辅助鉴定含有TaPod-D1b基因的小麦品种。本专利技术还有一个目的是提供一种检测或辅助检测待测小麦为高POD活性小麦还是低POD活性小麦的方法。本专利技术提供的检测或辅助检测待测小麦为高POD活性小麦还是低POD活性小麦的方法包括如下步骤：用上述成套引物中的引物对1和引物对2分别对待测小麦的基因组DNA进行PCR扩增，得到各自引物对对应的PCR扩增产物；检测所述PCR扩增产物；若所述引物对1的PCR扩增产物含有大小为291bp的片段，且所述引物对2的PCR扩增产物不含有大小为766bp的片段，则所述待测小麦为或候选为低POD活性小麦；若所述引物对2的PCR扩增产物含有大小为766bp的片段，且所述引物对1的PCR扩增产物不含有大小为291bp的片段，则所述待测小麦为或侯选为高POD活性小麦。上述方法中，所述高POD活性小麦中的POD活性小于等于506.5Umin-1g-1；所述低POD活性小麦中的POD活性大于等于518.5Umin-1g-1。上述方法中，所述PCR扩增的退火温度为59℃。本专利技术还有一个目的是提供一种检测或辅助检测待测小麦含有TaPod-D1a基因还是TaPod-D1b基因的方法。本专利技术提供的检测或辅助检测待测小麦含有TaPod-D1a基因还是TaPod-D1b基因的方法包括如下步骤：用上述成套引物中的引物对1和引物对2分别对待测小麦的基因组DNA进行PCR扩增，得到各自引物对对应的PCR扩增产物；检测所述PCR扩增产物；若所述引物对1的PCR扩增产物含有大小为291bp的片段，且所述引物对2的PCR扩增产物不含有大小为766bp的片段，则待测小麦品种含有或候选含有TaPod-D1a基因；若所述引物对2的PCR扩增产物含有大小为766bp的片段，且所述引物对1的PCR扩增产物不含有大小为291bp的片段，则待测小麦品种含有或候选含有TaPod-D1b基因。本专利技术还有一个目的是提供一种培育低POD活性小麦的方法。本专利技术提供的培育低POD活性小麦的方法包括如下步骤：以小麦A为亲本进行育种；所述小麦A满足如下条件的小麦：用上述成套引物中的引物对1和引物对2分别对所述小麦A的基因组DNA进行PCR扩增，所述引物对1的PCR扩增产物含有大小为291bp的片段，且所述引物对2的PCR扩增产物不含有大小为766bp的片段；所述低POD活性小麦中的POD活性大于等于518.5Umin-1g-1。本专利技术的最后一个目的是提供一种培育高POD活性小麦的方法。本专利技术提供的培育高POD活性小麦的方法包括如下步骤：以小麦A为亲本进行育种；所述小麦A满足如下条件的小麦：用上述成套引物中的引物对1和引物对2分别对所述小麦A的基因组DNA进行PCR扩增，所述引物对2的PCR扩增产物含有大小为766bp的片段，且所述引物对1的PCR扩增产物不含有大小为291bp的片段；所述高POD活性小麦中的POD活性小于等于506.5Umin-1g-1。上文中，所述待测小麦具体可为表1中的至少一种小麦。通过实验证明：本专利技术的分子标记可以快速鉴定出TaPod-D1a和TaPod-D1b等位变异情况及其POD活性的高低，运用于本专利技术的分子标记能快速筛选出具有较高POD活性的小麦品种(材料)，不仅加速优质小麦新品种的育成步伐，而且对利用分子标记辅助选择高POD活性小麦品种具有重要的理论意义和经济价值。附图说明图1为部分样本的电泳图。具体实施方式下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。实施例1、鉴定小麦籽粒过氧化物酶(Peroxidase，PO本文档来自技高网...
【技术保护点】
鉴定小麦籽粒过氧化物酶活性的成套引物，由如下(1)和(2)所示的引物对组成：(1)为由SEQ ID No.1所示的单链DNA和SEQ ID No.2所示的单链DNA组成的引物对1；(2)为由SEQ ID No.3所示的单链DNA和SEQ ID No.4所示的单链DNA组成的引物对2。
【技术特征摘要】
1.鉴定小麦籽粒过氧化物酶活性的成套引物，由如下(1)和(2)所示的引物对组成：(1)为由SEQIDNo.1所示的单链DNA和SEQIDNo.2所示的单链DNA组成的引物对1；(2)为由SEQIDNo.3所示的单链DNA和SEQIDNo.4所示的单链DNA组成的引物对2。2.鉴定小麦籽粒过氧化物酶活性的PCR试剂，由PCR试剂1和PCR试剂2组成；所述PCR试剂1包括权利要求1所述成套引物中的引物对1；所述PCR试剂2包括权利要求1所述成套引物中的引物对2。3.根据权利要求2所述的PCR试剂，其特征在于：所述引物对1和所述引物对2的各条引物在其对应的所述PCR试剂中的终浓度均为10-7mol/L。4.含有权利要求1所述的成套引物或权利要求2或3所述的PCR试剂的试剂盒。5.权利要求1所述的成套引物或权利要求2或3所述的PCR试剂或权利要求4所述的试剂盒在检测或辅助检测小麦籽粒的POD活性高低中的应用；或权利要求1所述的成套引物或权利要求2或3所述的PCR试剂或权利要求4所述的试剂盒在检测或辅助检测待测小麦为高POD活性小麦或低POD活性小麦中的应用；所述高POD活性小麦中的POD活性小于等于506.5Umin-1g-1；所述低POD活性小麦中的POD活性大于等于518.5Umin-1g-1。6.权利要求1所述的成套引物或权利要求2或3所述的PCR试剂或权利要求4所述的试剂盒在如下(1)-(7)中至少一种中的应用：(1)鉴定或辅助鉴定待测小麦POD活性高低中的应用；(2)鉴定或辅助鉴定低POD活性小麦品种；(3)鉴定或辅助鉴定高POD活性小麦品种；(4)比较或辅助比较不同待测小麦品种的POD活性；(5)鉴定或辅助鉴定待测小麦含有TaPod-D1a基因还是TaPod-D1b基因；(6)鉴定或辅助鉴定含有TaPod-D1a基因的小麦品种；(7)鉴定或辅助鉴定含有TaPod-D1b基因的小麦品种。7.一种检测或辅助检测待测小麦为高POD活性小麦还是低POD活性小麦的方法，包括如下步骤：用权利要求1所述的成套引物中的引物对1和引物对2分别对待测小麦的基因组DNA进行PCR扩增，得到各自引物对对应的PCR扩增产物...
【专利技术属性】
技术研发人员：耿洪伟，夏先春，何中虎，魏景欣，
申请(专利权)人：新疆农业大学，中国农业科学院作物科学研究所，
类型：发明
国别省市：新疆;65
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