斑马鱼卵黄原蛋白免疫印迹试剂盒及其检测方法与应用技术

斑马鱼卵黄原蛋白免疫印迹试剂盒及其检测方法与应用。该试剂盒含有斑马鱼卵黄原蛋白纯品与兔抗斑马鱼卵黄原蛋白多克隆抗体。制备时，首先利用17β-雌二醇诱导斑马鱼产生卵黄原蛋白，通过两步层析与超滤相结合的方法纯化出卵黄原蛋白，然后免疫新西兰大白兔制备兔抗斑马鱼卵黄原蛋白多克隆抗血清，并利用硫酸铵沉淀与Hitrap Protein G层析纯化获得兔抗斑马鱼卵黄原蛋白多克隆抗体。本试剂盒可以用于环境雌激素类物质的筛选，能够灵敏、方便的定性检测斑马鱼血液、整体匀浆液、肝脏组织及肝细胞培养液中的卵黄原蛋白，最低检测限为60ng mL-1，为斑马鱼在内分泌干扰物检测领域的应用提供了重要工具。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种检测斑马鱼卵黄原蛋白的免疫印迹试剂盒，包括一个盒体，该盒体内装有：1)PVDF膜2张；2)辣根过氧化物酶标记的羊抗兔二抗1支；3)封闭液、洗涤液、显色液各1支，所述的洗涤液为TBST；封闭液为含5％脱脂奶粉的TBST；显色液为含0.06％(m/V)3’‑二氨基联苯胺的10mM Tris‑HCl；其特征在于该盒体还装有：斑马鱼卵黄原蛋白纯品1支，兔抗斑马鱼卵黄原蛋白多克隆抗体1支。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：汝少国，王军，王蔚，田华，
申请(专利权)人：中国海洋大学，
类型：发明
国别省市：山东;37