一种制备鲍鱼硫酸多糖的方法技术

本发明专利技术公开了一种由鲍鱼内脏或性腺制备硫酸多糖的方法，步骤为：1、以鲍鱼内脏或性腺为原料，碱法或酶法提取，提取液离心；2、上清液经离子交换树脂吸附，水冲洗至流出液澄清后，两种不同浓度氯化钠溶液依次洗脱，收集流出液；3、可用超滤方法除盐和浓缩，然后醇沉；4、依次采用碱法和酶法再次解离蛋白；5、调酸除蛋白，氧化脱色，醇沉，沉淀溶解后膜过滤法除盐，收集膜内部分，经冷冻干燥后获得鲍鱼硫酸多糖。本发明专利技术所提供的方法获得的硫酸多糖纯度高，蛋白含量低于10％，制备条件温和，对鲍鱼硫酸多糖结构破坏小，产品品质好。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及从海洋动物的加工副产物中制备多糖的
，更具体，涉及从鲍鱼的性腺或脏器中制备硫酸多糖的

技术介绍
鲍鱼是中国传统的名贵食材，位居四大海味之首。鲍鱼的脏器，包括性腺，是鲍鱼加工的副产物，目前多作为低值饲料处理甚至被丢弃，造成了生物资源的浪费和环境的污染。朱蓓薇等人的研宄发现，鲍鱼脏器中的硫酸多糖具有抗氧化、抗凝血、免疫调节等作用，非常具有开发价值。通过检索，发现如下三篇与本专利申请相关的公开专利文献:1.朱蓓薇等公开了鲍鱼多糖的提取方法(CN200510047409.X)，是将鲍鱼去壳取肉(包括内脏)，用组织捣碎机破壁，加水混合均匀于20?80°C浸提2?6h，离心分离，不溶物再次加水重复提取I?2次，上清液合并。浓缩提取液至含糖1.5?3.0%，加3?4倍体积的95%乙醇，O?4°C下醇沉12?16h，离心后真空法或喷雾法干燥得产品。提取还可以用加碱提取、超声波提取、酶提取。酶提取可以用单一酶、双酶、复合酶、自溶酶和复合法提取。酶为胃蛋白酶、胰蛋白酶等。2.陈锦权等公开了一种鲍鱼多糖的制备工艺(CN 201110123164.X),它包括以下步骤:①将洗净的鲍鱼肉或脏器打浆得到鲍鱼预处理液，常温下采用高压脉冲电场处理；②采用壳聚糖对PEF处理后的鲍鱼料液进行絮凝除去粗蛋白，以提高多糖纯度采用电渗析技术对预处理液进行处理，有效脱去重金属；④采用乙醇沉淀制备鲍鱼多糖。3.集美大学翁武银公开了一种鲍鱼多糖、脂质和蛋白肽的联产制备方法(CN 201310142151.6)，技术工艺包括以鲍鱼内脏为原料，通过复合酶解、膜分离、醇沉、离心分离、冷冻结晶、脱色、干燥等手段提取制备鲍鱼多糖、脂质和蛋白肽。通过比对，上述公开专利的技术方案和目标产品与本专利申请有本质的不同，本专利申请具有新颖性。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种从鲍鱼内脏或性腺中制备鲍鱼硫酸多糖的方法，该方法工艺成本低，适用于工业化生产，产品纯度高、品质好，可用于医药、保健品行业等。为了达到上述目的，本专利技术制备鲍鱼硫酸多糖的方法，包括以下步骤:S1、以鲍鱼内脏或性腺为原料，粉碎后，碱法或酶法使多糖与蛋白解离，提取出粗多糖，提取液静置冷却后离心，取上清液；S2、所述上清液经离子交换树脂吸附，水冲洗至流出液澄清后，分别用两种浓度氯化钠溶液依次洗脱，收集流出液；所述离子交换树脂为大孔径强碱性阴离子交换树脂，所述两种浓度氯化钠溶液是指体积为离子交换树脂3?5倍的1.4mol/L氯化钠溶液和体积为离子交换树脂2?4倍的3mol/L氯化钠溶液；S3、所述流出液加入1.2?3倍体积的95%乙醇，静置8h以上，收集沉淀部分；S4、得到沉淀部分加入水或O?4%氯化钠水溶解后，采用碱法解离蛋白后，静置冷却后离心，取上清液，酶法解离蛋白；S5、调酸除蛋白，氧化脱色，醇沉，沉淀溶解后膜法除盐，收集膜内部分，经冷冻干燥后获得鲍鱼硫酸多糖。步骤SI中，所述碱法提取为加入2?4 %氯化钠水溶液，氢氧化钠溶液调pH8?9,50 ~ 60°C加热搅拌L 5?3h。步骤SI中，所述酶法提取为加入pH8.0Tris-醋酸缓冲液，加入原料干重2%胰蛋白酶35?45°C振摇3?5h，加入原料干重2%木瓜蛋白酶45?60°C振摇3?5h，90?100 °C加热搅拌5?10分钟。步骤S4所述碱法解离蛋白，具体为用氢氧化钠溶液调pH 8?9，50?60 °C恒温搅拌I?3h。步骤S4所述酶法解离蛋白，具体为加入沉淀干重0.1?0.5%胰蛋白酶，35?45°C搅拌4?6h。步骤S5中:所述调酸除蛋白，具体为加入0.2?2%亚硫酸氢钠作保护剂，盐酸调pH 1.5?2.0，低温离心，收集上清液；所述氧化脱色，具体为加入体积比I %过氧化氢，调PH8.5，室温放置I日后，盐酸调pH 6.5?7.0 ;所述醇沉，具体为加入1.2?3倍95%乙醇，静置8h以上。在步骤S3，醇沉之前，为节约醇沉时乙醇的用量，流出液可采用超滤方法浓缩，并可起到除盐效果，然后醇沉。整合上述步骤，本专利技术一种最优的方式，鲍鱼硫酸多糖的制备方法，包括以下步骤:Step 1、以鲍鱼内脏或性腺为原料，粉碎后，碱法提取或酶法提取，提取液静置冷却后离心，取上清液；Step 2、Step I得到的上清液反复流经大孔径强碱性阴离子交换树脂，使硫酸多糖吸附于所述离子交换树脂，用水冲洗所述离子交换树脂，至流出液澄清无色，然后用3?5倍树脂体积的1.4mol/L氯化钠溶液循环流经所述离子交换树脂，收集流出液；2?4倍树脂体积的3mol/L氯化钠溶液循环流经所述离子交换树脂，收集流出液；合并两种流出液；Step 3,Step 2得到的流出液若体积过大，可用超滤方法除盐和浓缩；加入L 2?3倍体积的95%乙醇，静置8h以上，收集沉淀部分；Step 4、Step 3得到沉淀部分用O?4%氯化钠溶解，用氢氧化钠溶液调pH 8?9，50?60°C恒温搅拌I?3h，静置冷却后离心，取上清液，加入沉淀干重0.1?0.5%胰蛋白酶，35?45°C搅拌4?6h ;Step 5,Step 4后的溶液，冷却后加入0.2?2%亚硫酸氢钠作保护剂，盐酸调pH1.5?2.0，迅速低温离心，上清液加入I % (v/v)过氧化氢，调pH8.5，室温放置I日后，盐酸调pH 6.5?7.0，加入1.2?3倍95%乙醇，静置8h以上，沉淀部分用水溶解后，膜法除盐，收集膜内部分，经冷冻干燥后获得鲍鱼硫酸多糖。其中，Step I所述碱法提取为加入2?4%氯化钠水溶液，氢氧化钠溶液调pH8?9，50?60°0加热搅拌1.5?3h ;所述酶法提取为加入pH8.0Tris-醋酸缓冲液，加入原料干重2%胰蛋白酶35?45°C振摇3?5h，加入原料干重2%木瓜蛋白酶45?60°C振摇3?5h，90?100°C加热搅拌5?1mino本专利技术具有以下优点和效果:以本专利技术所提供的方法获得的硫酸多糖纯度高，蛋白含量低于10%，制备条件温和，对硫酸多糖功能基团破坏小，硫酸基含量大于5%。本专利技术使用强碱性阴离子离子交换树脂，能够特异性的富集硫酸多糖，避免了蛋白、中性多糖等杂质的引入，保证了产品的品质。而且与其它工艺方法相比，使用树脂富集的方法能够减少醇沉时的乙醇用量，降低成本和能耗。本专利技术使用的离子交换树脂、膜分离等市场上均有供工业化生产的材料和设备，易于建立工艺生产线。本专利技术使用的原料为鲍鱼性腺和内脏，它们是鲍鱼加工的副产物，而且是鲍鱼主要含硫酸多糖的部位，以它们为原料生产硫酸多糖，得率高，而且成本低，实现了对海洋生物资源的综合利用。【附图说明】图1是实施例1所得的鲍鱼硫酸多糖的核磁共振氢谱和碳谱；图2是实施例1所得的鲍鱼硫酸多糖的碳谱；<当前第1页1 2 本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种制备鲍鱼硫酸多糖的方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、以鲍鱼内脏或性腺为原料，粉碎后，碱法或酶法使多糖与蛋白解离，提取出粗多糖，提取液静置冷却后离心，取上清液；S2、所述上清液经离子交换树脂吸附，水冲洗至流出液澄清后，分别用两种浓度氯化钠溶液依次洗脱，收集流出液；所述离子交换树脂为大孔径强碱性阴离子交换树脂，所述两种浓度氯化钠溶液是指体积为离子交换树脂3～5倍的1.4mol/L氯化钠溶液和体积为离子交换树脂2～4倍的3mol/L氯化钠溶液；S3、所述流出液加入1.2～3倍体积的95％乙醇，静置8h以上，收集沉淀部分；S4、得到沉淀部分加入水或0～4％氯化钠水溶解后，采用碱法解离蛋白后，静置冷却后离心，取上清液，酶法解离蛋白；S5、调酸除蛋白，氧化脱色，醇沉，沉淀溶解后膜法除盐，收集膜内部分，经冷冻干燥后获得鲍鱼硫酸多糖。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：宋爽，黄璐，温成荣，王风雅，程沙沙，李德阳，朱蓓薇，
申请(专利权)人：大连工业大学，
类型：发明
国别省市：辽宁;21