一种肝素生产过程中蛋白质去除的方法，步骤如下：澄清剂的配制、酶解液的预处理、除蛋白、板框过滤，得到澄清液。本发明专利技术的优点和有益效果为：1、能够有效去除蛋白质等大分子络合而共沉的物质，一步清除率在95%以上，最大限度地保留肝素的有效成份；2、可代替乙醇使得传统的醇沉工艺得到简化，并能大大缩短生产周期，降低生产成本；3、方便快捷,不用添加特殊设备,在现有工艺中直接添加，对原液的分子结构不会造成任何方式的破坏，工艺流程短。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物医药领域，尤其涉及。
技术介绍
肝素首先从肝脏发现而得名，天然存在于肥大细胞，现在主要从牛、猪肺或猪小肠 黏膜提取，是一种由葡萄糖胺，L-艾杜糖醛苷、N-乙酰葡萄糖胺和D-葡萄糖醛酸交替组成 的黏多糖硫酸脂。无论在体内还是体外，肝素的抗凝作用都很强，故临床把它作为抗凝剂广 泛使用，抑制血小板，增加血管壁的通透性，并可调控血管新生，具有调血脂的作用，可作用 于补体系统的多个环节，以抑制系统过度激活。与此相关，肝素还具有抗炎、抗过敏的作用。 目前，国内生产肝素的方法，主要是盐解法和酶解法，比如公开号为 CN101735340A、CN101649008A、CN101519459A等等的中国专利技术申请，这两种方法都是采用猪 小肠粘膜为原料，在碱性条件下通过盐解、酶解，通过乙醇反复沉淀，去除部分蛋白质后，通 过三甲胺季铵性强碱性阳离子交换树脂吸附剂洗脱，在洗脱液中加以乙醇沉淀既得肝素钠 初级原料出售，其缺点是生产周期长达48h，反应温度为95-100°C，能源消耗大，水解不完 全，收率低，生产1亿国际单位（IU)肝素粗品需2800-3000根猪小肠粘膜，所得产品纯度低， 粗品含肝素至多为80效价/毫克；并产生大量的肥肠渣和废水，污染环境；且生产过程中 树脂再生困难，这种制备方法由于生产周期长，水解不完全、不彻底，制得的肝素钠纯度低、 收率低、效价低，很难进行规模性生产，且不能满足市场的大量需求。
技术实现思路
本专利技术的目的在于克服现有技术的不足之处，提供一种高效去除蛋白质，不影响 有效成分，可节约大量乙醇，免去了使用乙醇的费用及浓缩药液与回收乙醇的能源消耗， 其除杂工艺的成本只有乙醇法的六分之一，可缩短生产周期，降低生产成本，可用于工业化 生产。 本专利技术实现目的的技术方案如下：，其特 征在于：步骤如下：（1)澄清剂的配制：A组份配成10%的溶液，先用少量的水搅成糊状，然 后加入需要量的水，溶胀24h，备用；B组份配成10%的醋酸溶液，先用少量水搅成糊状，然后 加入需要量的水，最后加入10%的醋酸，溶胀24h，备用；（2)酶解液的预处理：将酶解液的 pH值调至10-12,升温至60?70°C，灭酶30?60min，降温至30?40°C ;(3)除蛋白：按 酶解液重量的〇. 01%?〇. 05%，计算出所需要的澄清剂的用量，取步骤（1)中配制的澄清剂， 加入酶解液中并升温至90?95°C，保温4?6h，降至常温，板框过滤，得到澄清液。 所述的，其特征在于：所述步骤（2)中调 pH用的碱浓度为1%?3%。 所述的，其特征在于：所述步骤（2)中调 pH用的碱为氢氧化钠、氨水、碳酸钠中的一种。 所述的，其特征在于：所述步骤（3)中加 入澄清剂时需稀释3?5倍缓慢加入酶解液中。 本专利技术的优点和有益效果为：1、能够有效去除蛋白质等大分子络合而共沉的物 质，一步清除率在95%以上，最大限度地保留肝素的有效成份；2、可代替乙醇使得传统的醇 沉工艺得到简化，并能大大缩短生产周期，降低生产成本；3、方便快捷，不用添加特殊设 备，在现有工艺中直接添加，对原液的分子结构不会造成任何方式的破坏，工艺流程短。 采用考马斯亮蓝法，检测去除前后，酶解液中蛋白质含量的变化，结果见表1。【主权项】1. ，其特征在于：步骤如下：（1)澄清剂的配 制：A组份配成10%的溶液，先用少量的水搅成糊状，然后加入需要量的水，溶胀24h，备用； B组份配成10%的醋酸溶液，先用少量水搅成糊状，然后加入需要量的水，最后加入10%的醋 酸，溶胀24h，备用；（2)酶解液的预处理：将酶解液的pH值调至10-12,升温至60?70°C， 灭酶30?60min，降温至30?40°C ; (3)除蛋白：按酶解液重量的0. 01%?0. 05%，计算出 所需要的澄清剂的用量，取步骤（1)中配制的澄清剂，加入酶解液中并升温至90?95°C，保 温4?6h，降至常温，板框过滤，得到澄清液。2. 根据权利要求1所述的，其特征在于：所述 步骤（2)中调pH用的碱浓度为1%?3%。3. 根据权利要求1所述的，其特征在于：所述 步骤（2)中调pH用的碱为氢氧化钠、氨水、碳酸钠中的一种。4. 根据权利要求1所述的，其特征在于：所述 步骤（3)中加入澄清剂时需稀释3?5倍缓慢加入酶解液中。【专利摘要】，步骤如下：澄清剂的配制、酶解液的预处理、除蛋白、板框过滤，得到澄清液。本专利技术的优点和有益效果为：1、能够有效去除蛋白质等大分子络合而共沉的物质，步清除率在95%以上，最大限度地保留肝素的有效成份；2、可代替乙醇使得传统的醇沉工艺得到简化，并能大大缩短生产周期，降低生产成本；3、方便快捷,不用添加特殊设备,在现有工艺中直接添加，对原液的分子结构不会造成任何方式的破坏，工艺流程短。【IPC分类】C08B37-10【公开号】CN104558249【申请号】CN201510040270【专利技术人】徐宾朋, 郭庆, 赵厚发 【申请人】安徽科宝生物工程有限公司【公开日】2015年4月29日【申请日】2015年1月27日本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种肝素生产过程中蛋白质去除的方法，其特征在于：步骤如下：（1）澄清剂的配制：A组份配成10%的溶液，先用少量的水搅成糊状，然后加入需要量的水，溶胀24h，备用；B组份配成10%的醋酸溶液，先用少量水搅成糊状，然后加入需要量的水，最后加入10%的醋酸，溶胀24h，备用；（2）酶解液的预处理：将酶解液的pH值调至10‑12，升温至60～70℃，灭酶30～60min，降温至30～40℃；（3）除蛋白：按酶解液重量的0.01%～0.05%，计算出所需要的澄清剂的用量，取步骤（1）中配制的澄清剂，加入酶解液中并升温至90～95℃，保温4～6h，降至常温，板框过滤，得到澄清液。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：徐宾朋，郭庆，赵厚发，
申请(专利权)人：安徽科宝生物工程有限公司，
类型：发明
国别省市：安徽;34
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