免疫学测定的灵敏度增强方法或避免血红蛋白影响的方法技术

本发明专利技术提供免疫学测定方法中的增强测定灵敏度的技术以及避免血红蛋白影响的技术。所述免疫学测定中的增强测定灵敏度的方法以及避免血红蛋白影响的方法，是应用抗原抗体反应测定生物体试样中的测定对象物质的免疫学测定方法，其特征在于，在杯芳烃类等大环化合物的存在下进行反应。

【技术实现步骤摘要】
【专利说明】免疫学测定的灵敏度増强方法或避免血红蛋白影响的方法 本申请是中国申请号为200980125714. 2的专利技术专利申请的分案申请（原申请的 专利技术名称为""，原申请的申请日 为2009年7月3日）。
本专利技术涉及以及用于 这些方法的试剂。
技术介绍
近年，为了测定生物体试样中的微量物质，广泛应用了利用免疫反应的测定方法。 作为免疫学测定方法，有RIA法、EIA法、免疫比浊法、胶乳凝集法、金属胶体凝集法、免疫色 谱法等多种方法。其中，胶乳凝集法、金属胶体凝集法因为不进行反应液的分离、清洗，所以 适合于自动化而被通用。对于免疫学测定，通常，根据测定的生物体试样中的被测定物质浓 度而采用不同方法。胶乳凝集法、金属胶体凝集法与免疫比浊法相比，能够进行微量物质的 测定，但是不能够如RIA法、EIA法那样进行微量物质的测定。对于任何免疫学测定方法都 希望反应体系的微量化、测定时间的缩短，所以使测定灵敏度增强是重要的课题。 作为增强测定灵敏度的技术，已知有将聚乙二醇或葡聚糖等水溶性多糖类添加到 反应体系中的技术（专利文献1和2)。但是，这些添加剂因为有分子量分布、不是单一化合 物，所以存在得不到稳定的灵敏度增强效果等缺点。 另外，对于任何免疫学测定方法都存在如下问题，即，除目的抗原抗体反应以外， 由于与试样中的各种夹杂物质发生非特异反应而发生凝集、吸附，测定精度下降。尤其是使 用血浆等来自生物体的试样，当该试样中含有来自红血球的血红蛋白时，有时血红蛋白对 免疫学测定的测定值产生影响。但是，溶血的程度随检测物而不同，所以不能得到正确的测 定值，因此需要谋求避免其影响的方法。 以往，作为避免血红蛋白的影响的方法，提出了添加表面活性剂的方法（专利文 献3)等。但是，在免疫学测定方法中，添加表面活性剂的方法存在测定灵敏度下降、不能精 度良好地测定对象物质的问题。 另外，专利文献4中记载了，在使用抗人CRP兔血清对人血清中的CRP进行免疫学 测定的方法中，通过添加多元酚，可以抑制因补体成分所致的非特异反应，作为具体例，记 载了通过添加5mM硫酸杯芳烃能够抑制因补体等所导致的非特异反应。但是，在该专 利文献4中，仅记载了将人血清作为试样、使用抗人CRP兔血清测定CRP时杯芳烃类对补体 影响的作用，但是对于杯芳烃类对灵敏度起怎样的作用、还有对血红蛋白影响的效果完全 没有记载。而且，对于使用对抗原的抗体、或抗体的抗原进行了敏化的不溶性载体（例如胶 乳粒子）测定作为测定对象的该抗原或该抗体的方法，没有任何记载。 现有技术文献 专利文献 专利文献1:日本特开昭58-047256号公报 专利文献2:日本特开昭59-220646号公报 专利文献3:日本特开昭60-168050号公报 专利文献4:日本特开2000-329764号公报
技术实现思路
本专利技术的课题在于提供对测定对象进行免疫学测定中的灵敏度增强方法以及灵 敏度得到增强的免疫学测定用试剂。另外，本专利技术的课题在于提供在使用免疫学测定法测定血浆等来自生物体的试样 中的测定对象物质的体系中避免血红蛋白影响的方法。 因此，本专利技术人等对免疫反应中的增强测定灵敏度的方法进行了研宄，结果完全 意外地发现了，在反应体系中添加杯芳烃类等大环化合物时，如果反应体系中的最终浓度 为5mM则空白试剂值变得异常，尽管没有观察到测定对象物质的浓度依赖性的测定灵敏度 增强，但是当反应体系中的最终浓度为0. 005?4mM这样的低浓度时，观察到测定灵敏度的 增强，因此即使使用测定对象物质浓度是低浓度的试样，也能够正确地进行测定。另外发现 了，当向反应体系中添加大环化合物时，可以避免试样中的血红蛋白的影响，即使测定对象 物质浓度是低浓度也能够正确地测定。 即，本专利技术提供一种， 其是应用抗原抗体反应测定生物体试样中的测定对象物质的免疫学测定方法，其特征在 于，在大环化合物的存在下进行反应。 另外，本专利技术提供一种免疫学测定用试剂，其在应用抗原抗体反应测定试样中的 测定对象物质的免疫学测定方法中使用，其特征在于，含有以大环化合物为主成分的灵敏 度增强剂或血红蛋白影响避免剂。 依照本专利技术的方法，因为增强了测定对象物质的测定灵敏度，所以即使使用测定 对象物质浓度低的试样也可以进行正确的测定。另外，依照本专利技术的免疫学测定方法，因为 可以避免来自生物体的试样中的血红蛋白的影响，所以即使该试样含有血红蛋白，也可以 进行正确的测定。另外，因为上述大环化合物（例如杯芳烃类或环糊精等）可以以单一化 合物而获得，所以可得到没有批间差异的、稳定的测定精度提高效果。【具体实施方式】 本专利技术的方法中的试样，优选生物体试样，特别优选可能存在红血球或来自红血 球的血红蛋白的来自生物体的试样。例如，可举出脊髓液、泪液、组织液、血液、血浆、以及血 清等。其中，来自血液的试样，即血液、血浆、以及血清等，大多含有血红蛋白，特别有用。 在本专利技术中，作为免疫学测定方法，只要是应用测定对象物质和能够与该对象物 质发生抗原抗体反应的物质的抗原抗体反应的免疫学测定方法就没有特别限制。例如，可 举出免疫扩撒法（SRID法）、免疫比浊法、红血球凝集法、胶乳凝集法或金属胶体凝集法、 RIA法、EIA法。其中，胶乳凝集法或金属胶体凝集法，测定灵敏度高、适合于通用的自动分 析装置等、也适合自动化，因此优选。特别地，更优选使用对抗体进行了敏化的不溶性载体 的方法。 作为该不溶性载体，可举出有机高分子粒子、无机物质粒子、红血球等。作为有机 高分子粒子，可举出不溶性琼脂糖、纤维素、不溶性葡聚糖等粒子，优选胶乳粒子。作为该胶 乳粒子，例如可举出聚苯乙烯、苯乙烯-甲基丙烯酸共聚物、苯乙烯_(甲基）丙烯酸缩水甘 油酯共聚物、苯乙烯-苯乙烯磺酸盐共聚物、甲基丙烯酸聚合物、丙烯酸聚合物、丙烯腈丁 二烯苯乙烯共聚物、氯乙烯-丙烯酸酯共聚物、聚乙酸乙烯酯丙烯酸酯等粒子。另外，也可 以根据需要使用各种改性胶乳（例如，羧酸改性胶乳）等。使用的胶乳粒子的平均粒径，通 过测定机器等适当选择0. 05?0. 50ym。作为无机物质粒子可举出二氧化娃、氧化错等。 作为本专利技术的方法中的测定对象物质，只要是免疫学测定方法中测定的物质则没 有特别限定，可举出各种物质，例如抗原、半抗原、抗体、激素、药物等。其中，优选将抗原作 为测定对象物质，更优选蛋白抗原。具体地说，例如可举出CRP、纤维蛋白和纤维蛋白原分 解物、D二聚体、可溶性纤维蛋白（SF)、脂蛋白（a)(Lp(a))、基质金属蛋白酶3(MMP-3)、前列 腺特异抗原（PSA)、IgG、IgA、IgM、IgE、IgD、抗链球菌溶血素0、类风湿因子、转铁蛋白、结合 珠蛋白、a1-抗胰蛋白酶、a1-酸性糖蛋白、a2-巨球蛋白、血液结合素、抗凝血酶-III、 a-甲胎蛋白、CEA(癌胚抗原）、铁蛋白、HBs-Ag(B型肝炎表面抗原）、Anti-HBs(抗B型肝 炎表面抗体）、fffie-Ag(B型肝炎e抗原）、Anti-HBe(抗B型肝炎e抗体）、Anti-HBc(抗B 型肝炎核心抗体）等。其中，优选CRP、纤维蛋白和纤维蛋白原分解物、D二聚体、SF、Lp(a)、 MMP-3、PSA等。但是，并不限定于这些。 作为能和上述测定对象物质发本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种免疫学测定的灵敏度增强方法，其是采用抗原抗体反应测定生物体试样中的测定对象物质的胶乳凝集法或金属胶体凝集法，其特征在于，在大环化合物的存在下进行反应，大环化合物是杯芳烃类，杯芳烃类在反应体系中的最终浓度是0.005mM～4mM。

【技术特征摘要】
...

【专利技术属性】
技术研发人员：山本光章，铃木明子，
申请(专利权)人：积水医疗株式会社，
类型：发明
国别省市：日本;JP