鉴定或辅助鉴定H6N1亚型禽流感病毒的成套试剂及其应用制造技术

本发明专利技术公开了鉴定或辅助鉴定H6N1亚型禽流感病毒的成套试剂及其应用。本发明专利技术所提供的鉴定或辅助鉴定H6N1亚型禽流感病毒的成套试剂，由成套DNAH6-T和成套DNAN1-T组成；H6-T由PCR引物对H6和探针H6-P组成；H6由序列表中SEQ ID No.1和SEQ ID No.2所示的两条单链DNA组成；H6-P为序列表中SEQ ID No.3所示的单链DNA；N1-T由PCR引物对N1和探针N1-P组成；N1由序列表中SEQ ID No.4和SEQ ID No.5所示的两条单链DNA组成；N1-P为序列表中SEQ ID No.6所示的单链DNA。

【技术实现步骤摘要】
鉴定或辅助鉴定H6N1亚型禽流感病毒的成套试剂及其应用
本专利技术涉及生物
中鉴定或辅助鉴定H6N1亚型禽流感病毒的成套试剂及其应用。
技术介绍
禽流感病毒(AvianInfluenzaVirus,AIV)根据表面糖蛋白(Hemagglutinin,HA)和神经氨酸酶(Neuraminidase,NA)抗原性差异分为不同的亚型，目前已发现有16种HA亚型(H1-H16)和9种NA亚型(N1-N9)，HA和NA的组合可产生至少135种亚型，其中，H5和H7亚型中的部分组合(H5N1、H7N7和H7N9等)称为高致病性AIV，可感染人类并致死。低致病性AIV感染虽然无任何症状或表现温和的、轻微的不典型症状，对畜禽和人类的健康不具威胁性，但当不同亚型的低致病性AIV毒株混合感染畜禽时，可以在动物体内互相交换基因，从而产生无法预测致病性和传染性的新变异株，这将对禽类和人类健康存在很大的威胁。H6亚型AIV属于低致病性AIV，但有报道表明1997年在香港爆发感染人的高致病性H5N1病毒，除HA基因外，其余7个基因片段都与A/teal/HongKong/W312/97(H6N1)病毒高度相似，因此H6亚型AIV很可能成为高致病性H5亚型AIV的基因供体。2013年6月，台湾发现了第一例人感染型H6N1亚型AIV，是一种低致病性禽流感病毒，其HA基因由台湾H6亚型AIV支内进化而来。雁形目(鸭子、鹅、天鹅)和鸻形目(岸禽类鸟、鸥、燕鸥、海雀)是AIV潜伏的主要自然宿主，其中特别是水禽，是所有亚型AIV的储存库，并经粪便排毒污染水系，通过直接传播或候鸟的南北迁徙将病毒进一步散播开来，感染其它禽类和哺乳动物，因此水禽被认为是流感病毒的天然储存库和新毒株的重要来源，在流感病毒的遗传进化和生态分布中具有重要作用。低致病性AIV在健康鸭群中潜伏、繁殖和排毒，也可通过基因重排导致高致病性禽流感的爆发，危害养禽业的安全，亦可能进化为可突破种间屏障的人禽流感病毒，危害人类健康。目前，H6亚型AIV受到广泛地关注，对养禽业和公共卫生有重要的影响。病毒分离与鉴定是经典的流感检测方法，即先将样品接种SPF鸡胚增殖病毒2-5天，再收集鸡胚尿囊液进行血凝试验和血凝抑制试验，结果准确可靠，但存在检测周期长的缺点。酶联免疫吸附试验虽可检测禽流感病毒的抗原，但需要特定的标准阳性血清。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是如何鉴定H6N1亚型禽流感病毒，即确定HA亚型是否为H6亚型及其NA亚型是否为N1亚型。为解决上述技术问题，本专利技术首先提供了鉴定或辅助鉴定H6亚型和/或N1亚型禽流感病毒的成套试剂。本专利技术所提供的鉴定或辅助鉴定H6亚型和/或N1亚型禽流感病毒的成套试剂，由名称为H6-T的成套DNA和名称为N1-T的成套DNA组成；所述H6-T由名称为H6的PCR引物对和名称为H6-P的探针组成；所述H6由序列表中SEQIDNo.1所示的单链DNA(H6-F)和SEQIDNo.2所示的单链DNA(H6-R)组成；所述H6-P为序列表中SEQIDNo.3所示的单链DNA；所述N1-T由名称为N1的PCR引物对和名称为N1-P的探针组成；所述N1由序列表中SEQIDNo.4所示的单链DNA(N1-F)和SEQIDNo.5所示的单链DNA(N1-R)组成；所述N1-P为序列表中SEQIDNo.6所示的单链DNA。为解决上述技术问题，本专利技术还提供了成套DNA。本专利技术所提供的成套DNA，为鉴定或辅助鉴定H6亚型禽流感病毒的成套DNA或鉴定或辅助鉴定N1亚型禽流感病毒的成套DNA；所述鉴定或辅助鉴定H6亚型禽流感病毒的成套DNA为所述成套DNAH6-T；所述鉴定或辅助鉴定N1亚型禽流感病毒的成套DNA为所述成套DNAN1-T。为解决上述技术问题，本专利技术还提供了鉴定或辅助鉴定H6亚型和/或N1亚型禽流感病毒的成套引物。本专利技术所提供的鉴定或辅助鉴定H6亚型和/或N1亚型禽流感病毒的成套引物，由所述PCR引物对H6和所述PCR引物对N1组成。为解决上述技术问题，本专利技术还提供了PCR引物对。本专利技术所提供的PCR引物对，为鉴定或辅助鉴定H6亚型禽流感病毒的引物对或鉴定或辅助鉴定N1亚型禽流感病毒的引物对；所述鉴定或辅助鉴定H6亚型禽流感病毒的引物对为所述H6；所述鉴定或辅助鉴定N1亚型禽流感病毒的引物对为所述N1。为解决上述技术问题，本专利技术还提供了鉴定或辅助鉴定H6亚型和/或N1亚型禽流感病毒的系统。本专利技术所提供的鉴定或辅助鉴定H6亚型和/或N1亚型禽流感病毒的系统(产品和/或设备)，为下述H-M中的任一种：H、含有所述成套试剂的系统；I、含有所述H6-T的系统；J、含有所述N1-T的系统；K、含有所述成套引物的系统；L、含有所述PCR引物对H6的系统；M、含有所述PCR引物对N1的系统。上述系统中，所述探针可标记有荧光染料。所述标记有荧光染料具体可为FAM和/或Eclipse和/或ROX。在本专利技术的一个实施例中，所述H6-P的5’端标记有报告荧光染料FAM，3’端标记有淬灭荧光染料Eclipse；所述N1-P的5’端标记有报告荧光染料ROX，3’端标记有淬灭荧光染料Eclipse。上述系统，还可包括荧光PCR所需的试剂和仪器。具体来说，所述系统可包括所述成套试剂、所述H6-T、所述N1-T、所述成套引物、所述PCR引物对H6或所述PCR引物对N1以及荧光PCR所需要的其它试剂和仪器。上述系统还可仅包括所述成套试剂、所述成套DNAH6-T、所述成套DNAN1-T、所述成套引物、所述PCR引物对H6或所述PCR引物对N1。所述成套试剂、所述成套DNAH6-T、所述成套DNAN1-T、所述成套引物、所述PCR引物对H6或所述PCR引物对N1以及荧光PCR所需要的其它试剂均可独立包装。所述成套试剂、所述成套DNAH6-T、所述成套DNAN1-T、所述成套引物、所述PCR引物对H6和所述PCR引物对N1中的各引物对和/或各引物对的两条单链DNA和/或探针均可独立包装。荧光PCR所需要的其它试剂可包括DNA聚合酶和/或PCR缓冲液和/或dATP、dTTP、dCTP和dGTP的dNTP的混合物和/或MgCl2。所述DNA聚合酶具体可为Taq聚合酶。上述系统中，所述H还包括记载有下述内容的载体：在同一个PCR反应体系中，以待测生物样品的核酸(DNA或RNA或cDNA)为模板，用所述成套试剂进行荧光PCR；FAM通道和ROX通道的结果均呈阳性(即扩增曲线为S型曲线)，所述待测样品含有H6N1亚型禽流感病毒；FAM通道的结果呈阴性(即扩增曲线为直线)、ROX通道的结果呈阳性(即扩增曲线为S型曲线)，所述待测样品含有HxN1(x≠6)亚型禽流感病毒；FAM通道的结果呈阳性(即扩增曲线为S型曲线)、ROX通道的结果呈阴性(即扩增曲线为直线)，所述待测样品含有H6Nx(x≠1)亚型禽流感病毒；FAM通道和ROX通道的结果均呈阴性(即扩增曲线为直线)，所述待测样品含有HxNy亚型禽流感病毒(x≠6，y≠1)或所述待测样品不含禽流感病毒。上述系统中，每20μLPCR反应体系可含有：所述PCR引物对H6(H6的每条引物在反应体系中的终浓度均为0.4μM)，所述探针H6-P(H6-P在本文档来自技高网...

【技术保护点】
鉴定或辅助鉴定H6亚型和/或N1亚型禽流感病毒的成套试剂，由名称为H6‑T的成套DNA和名称为N1‑T的成套DNA组成；所述H6‑T由名称为H6的PCR引物对和名称为H6‑P的探针组成；所述H6由序列表中SEQ ID No.1和SEQ ID No.2所示的两条单链DNA组成；所述H6‑P为序列表中SEQ ID No.3所示的单链DNA；所述N1‑T由名称为N1的PCR引物对和名称为N1‑P的探针组成；所述N1由序列表中SEQ ID No.4和SEQ ID No.5所示的两条单链DNA组成；所述N1‑P为序列表中SEQ ID No.6所示的单链DNA。

【技术特征摘要】
1.鉴定或辅助鉴定H6亚型和N1亚型禽流感病毒的成套试剂，由名称为H6-T的成套DNA和名称为N1-T的成套DNA组成；所述H6-T由名称为H6的PCR引物对和名称为H6-P的探针组成；所述H6由序列表中SEQIDNo.1和SEQIDNo.2所示的两条单链DNA组成；所述H6-P为序列表中SEQIDNo.3所示的单链DNA；所述N1-T由名称为N1的PCR引物对和名称为N1-P的探针组成；所述N1由序列表中SEQIDNo.4和SEQIDNo.5所示的两条单链DNA组成；所述N1-P为序列表中SEQIDNo.6所示的单链DNA。2.鉴定或辅助鉴定H6亚型和N1亚型禽流感病毒的成套引物，由权利要求1所述的PCR引物对H6和权利要求1所述的PCR引物对N1组成。3.鉴定或辅助鉴定H6亚型和N1亚型禽流感...

【专利技术属性】
技术研发人员：谢芝勋，罗思思，谢志勤，邓显文，刘加波，谢丽基，黄莉，黄娇玲，曾婷婷，
申请(专利权)人：广西壮族自治区兽医研究所，
类型：发明
国别省市：广西;45