本发明专利技术公开了一种果蔬中四氯虫酰胺残留的LC-MS/MS测定方法，用乙腈或含1%乙酸的乙腈溶液均质提取样品中残留的四氯虫酰胺，提取液经乙二胺-N-丙基硅烷（PSA）和十八烷基硅烷键合相（C18）基质分散净化后，液相色谱串联质谱（LC-MS/MS）检测，采用不含待测农药的空白基质溶液建立校正的标准曲线，外标法定量。本方法平均回收率为88.3%～92.1%，平均相对标准偏差（RSD）为3.6%～5.3%，检出限低于0.73μg/kg，具有操作简便、快速、灵敏度高、重复性好、定性定量准确的优点。能满足0.01mg/kg残留限量的“一律标准”技术要求，为保障我国人民食品安全、对外出口贸易健康发展提供有力的技术支撑。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种果蔬中四氯虫酰胺残留的LC-MS/MS测定方法，更具体地说是采 用液相色谱串联质谱（LC-MS/MS)定性定量测定蔬菜和水果中残留的四氯虫酰胺含量的方 法，属于农药残留量的测定
技术介绍
双酰胺类杀虫剂是近年来全球热门的杀虫剂产品，可广泛应用于水稻、蔬菜、棉花 等作物的害虫控制，具有低毒、环境安全、高活性等优点，包括氯虫苯甲酰胺、氰虫酰胺、氟 虫双酰胺等品种，四氯虫酰胺（SYP-9080)是由中化集团下属沈阳化工研究院研发、中化农 化有限公司经营的新产品，我国首个具有自主知识产权的双酰胺类杀虫剂，已获得国家农 业部的临时登记。 四氯虫酰胺（SYP-9080)属于鱼尼丁受体激活剂类杀虫剂，其通过与害虫体内鱼 尼丁受体结合，打开钙离子通道，使储存在细胞内的钙离子持续释放到肌浆中，钙离子和肌 浆中基质蛋白结合，引起肌肉持续收缩。昆虫体症状表现为抽搐、拒食，最终死亡。四氯虫 酰胺为低毒、广谱杀虫剂，对鳞翅目害虫均具有很好的活性。防治对象包括稻纵卷叶螟、二 化螟、小菜蛾、甜菜夜蛾、玉米螟、甘蔗螟、小卷蛾、食心虫等。 随着四氯虫酰胺的登记、推广和使用，有关四氯虫酰胺残留消解动态及最终残留 量等环境行为的研究势必增加，同时，作为我国主要出口市场的欧盟、日本等国家规定若田 间使用农药没有在该国家登记，没有制定相应的残留限量标准时，出口至其国家的食品农 产品包括畜禽肉等动物源性食品中残留限量均实行0. 〇lmg/L的"一律标准"。 迄今为止，未见国内外有关于食品农产品中四氯虫酰胺残留量检测方法的报道， 使用LC-MS/MS测定食品农产品中农药残留具有快速、简便、灵敏度高等优点，因此建立简 便、快速、准确、耐用、能准确定性和定量分析蔬菜和水果中四氯虫酰胺残留量的LC-MS/MS 检测方法具有重要意义。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种果蔬中四氯虫酰胺残留的LC-MS/MS测定方法。 为实现以上目的，本专利技术所采用的技术方案是：一种果蔬中四氯虫酰胺残留的 LC-MS/MS测定方法，包括如下步骤： (1)提取 称取样品于具塞离心管中，加入乙腈或含1 %乙酸的乙腈溶液均质提取lmin，加入氯 化纳或乙fe纳中的一种和无水硫fe缓，振汤后尚心。 (2)净化 移取样品提取液上清液于离心管中，加入基质分散固相萃取剂，涡旋振荡离心，过膜 后，待液相色谱串联质谱（LC-MS/MS)检测； ⑶标准工作溶液的配制 将不含四氯虫酰胺的同种类基质空白样品按上述步骤（1)、（2)处理，得样品提取净化 液，用空白提取净化液配制成至少3个浓度的四氯虫酰胺系列混合标准工作液； ⑷液相色谱串联质谱法（LC-MS/MS)测定 将步骤（3)中的各浓度梯度的标准工作液进行LC-MS/MS测定，以标准工作液的色谱 峰面积对其相应浓度进行回归分析，得到标准工作曲线；在相同条件下将步骤（2)中净化 后的样品液注入LC-MS/MS进行测定，测得样品液中四氯虫酰胺的色谱峰面积，代入标准曲 线，得到样品液中四氯虫酰胺含量，然后根据样品液所代表试样的质量计算得到样品中四 氯虫酰胺残留量。 步骤（1)中样品若为脱水蔬菜和水果，需降低称样量，并加适量水充分浸润。 步骤（1)中采用乙腈提取时加入氯化钠盐析，采用含1 %乙酸的乙腈溶液提取时 加入乙酸钠盐析；含水量较少的样品盐析时需加入一定量的水。 步骤（2)中基质分散固相萃取剂由无水硫酸镁、C18和PSA组成，每体积提取液中 无水硫酸镁、C18和PSA加入量分别为150mg、50mg和25mg。 步骤⑷中液相色谱的流动相为：含5mmol/L乙酸铵的水溶液和乙腈，流速 0. 2-0. 4mL/min，进样量 5iiL。 步骤（4)中液相色谱使用梯度洗脱的方法，梯度洗脱程序为：【主权项】1. 一种果蔬中四氯虫酰胺残留的LC-MS/MS测定方法，其特征在于，所述方法包括以下 步骤： (1) 提取 称取蔬菜和水果样品于具塞离心管中，加入乙腈或含1 %乙酸的乙腈溶液均质提取 Imin，加入氣化纳或乙酸纳中的一种和无水硫酸缓振汤后尚心； (2) 净化 移取样品提取液上清液于离心管中，加入基质分散固相萃取剂，涡旋振荡离心，过膜 后，待液相色谱串联质谱（LC-MS/MS)检测； (3) 标准工作溶液的配制 将不含四氯虫酰胺的同种类基质空白样品按上述步骤（1)、（2)处理，得样品提取净化 液，用空白提取净化液配制成至少3个浓度的四氯虫酰胺系列混合标准工作液； (4) 测定和结果计算 将步骤（3)中的各浓度梯度的标准工作液进行LC-MS/MS测定，以标准工作液的色谱峰 面积对其相应浓度进行回归分析，得到基质标准工作曲线；在相同条件下将步骤（2)中净 化后的样品液注入LC-MS/MS进行测定，测得样品液中四氯虫酰胺的色谱峰面积，代入基质 标准曲线，得到样品液中四氯虫酰胺含量，然后根据样品液所代表试样的质量计算得到样 品中四氯虫酰胺残留量。2. 根据权利要求1所述的一种果蔬中四氯虫酰胺残留的LC-MS/MS测定方法，其特征在 于，步骤（1)中蔬菜和水果样品若为脱水样品，需降低称样量，并加适量水充分浸润。3. 根据权利要求1所述的一种果蔬中四氯虫酰胺残留的LC-MS/MS测定方法，其特征在 于，步骤（1)中采用乙腈提取时需加入氯化钠盐析，采用含1%乙酸的乙腈溶液提取时需加 入乙酸钠盐析。4. 根据权利要求1所述的一种果蔬中四氯虫酰胺残留的LC-MS/MS测定方法，其特征在 于，步骤（2)中基质分散固相萃取剂由无水硫酸镁、C 18和PSA组成，每体积提取液中无水硫 酸镁、C18和PSA加入量分别为150mg、50mg和25mg。5. 根据权利要求1所述的一种果蔬中四氯虫酰胺残留的LC-MS/MS测定方法，其特征在 于，步骤（4)中LC-MS/MS的液相色谱分析条件为：填料为C 18的色谱柱，柱温为30°C ;进样 体积为5 μ L· ;流动相为：含5mmol/L乙酸铵的水溶液和乙腈，梯度洗脱；梯度洗脱程序为:质谱条件为：电喷雾质谱检测；电喷雾电压为-3500至-4500V ;雾化气压力为 275. 9kPa ;干燥气为氮气；干燥气温度为350°C ;干燥气流速为10. OL/min ;多反应监测 (MRM)负离子扫描模式；四氯虫酰胺的母离子为535. 3?536. 3,子离子分别为499. 2? 502. 2 和 201. 4 ?202. 4。【专利摘要】本专利技术公开了一种果蔬中四氯虫酰胺残留的LC-MS/MS测定方法，用乙腈或含1%乙酸的乙腈溶液均质提取样品中残留的四氯虫酰胺，提取液经乙二胺-N-丙基硅烷（PSA）和十八烷基硅烷键合相（C18）基质分散净化后，液相色谱串联质谱（LC-MS/MS）检测，采用不含待测农药的空白基质溶液建立校正的标准曲线，外标法定量。本方法平均回收率为88.3%～92.1%，平均相对标准偏差（RSD）为3.6%～5.3%，检出限低于0.73μg/kg，具有操作简便、快速、灵敏度高、重复性好、定性定量准确的优点。能满足0.01mg/kg残留限量的“一律标准”技术要求，为保障我国人民食品安全、对外出口贸易健康发展提供有力的技术支撑。【IPC分类】G01N30-02本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种果蔬中四氯虫酰胺残留的LC‑MS/MS测定方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：(1)提取称取蔬菜和水果样品于具塞离心管中，加入乙腈或含1％乙酸的乙腈溶液均质提取1min，加入氯化钠或乙酸钠中的一种和无水硫酸镁振荡后离心；(2)净化移取样品提取液上清液于离心管中，加入基质分散固相萃取剂，涡旋振荡离心，过膜后，待液相色谱串联质谱(LC‑MS/MS)检测；(3)标准工作溶液的配制将不含四氯虫酰胺的同种类基质空白样品按上述步骤(1)、(2)处理，得样品提取净化液，用空白提取净化液配制成至少3个浓度的四氯虫酰胺系列混合标准工作液；(4)测定和结果计算将步骤(3)中的各浓度梯度的标准工作液进行LC‑MS/MS测定，以标准工作液的色谱峰面积对其相应浓度进行回归分析，得到基质标准工作曲线；在相同条件下将步骤(2)中净化后的样品液注入LC‑MS/MS进行测定，测得样品液中四氯虫酰胺的色谱峰面积，代入基质标准曲线，得到样品液中四氯虫酰胺含量，然后根据样品液所代表试样的质量计算得到样品中四氯虫酰胺残留量。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：崔淑华，程刚，刘润珠，赵峰，
申请(专利权)人：山东出入境检验检疫局检验检疫技术中心，
类型：发明
国别省市：山东;37
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