一种具有灭螺活性的菠萝泛菌及其应用制造技术

技术编号:11329440 阅读:143 留言:0更新日期:2015-04-22 20:01
本发明专利技术公开了一种具有灭螺活性的菠萝泛菌(Pantoea ananatis Z1)及其应用,其生物保藏号为CCTCC NO:M2014105,该细菌CCTCC NO:M2014105为泛菌属细菌,是从竹子叶片中筛选获得的,能够快速有效地杀灭钉螺;本发明专利技术的有益效果为:提供了一种可以杀灭钉螺的新细菌,可以直接作为生物灭螺剂使用,用该细菌CCTCC NO:M2014105制备的生物灭螺剂与传统化学灭螺剂相比,制备方法简单,成本低,对环境友好。

【技术实现步骤摘要】
一种具有灭螺活性的菠萝泛菌及其应用
本专利技术涉及的是一种微生物领域,尤其涉及的是一种具有灭螺活性的菠萝泛菌及其应用。
技术介绍
钉螺作为血吸虫唯一的中间宿主,其繁衍和分布与血吸虫病的流行传播密切相关,所以抑螺灭螺被认为是阻止血吸虫病传播的重要途径。目前主要的灭螺剂是化学药物类,这类药物容易对环境造成不可逆破坏。近年来植物内微生物群落结构得到广泛的关注和研究,国内外学者经过研究发现植物体内存在大量的微生物,这些微生物在动物的生长、发育、健康等方面都起到重要作用,因此,本专利技术将研究的方向对准了植物内的微生物群落,希望能找到一种选择性强、对环境影响较小的生物灭螺剂,以替代传统化学灭螺剂,保护环境。
技术实现思路
本专利技术的目的在于克服现有技术的不足,提供了一种具有灭螺活性的菠萝泛菌及其应用,以提供一种选择性强、对环境影响较小的新的生物灭螺剂。本专利技术是通过以下技术方案实现的:一种具有灭螺活性的菠萝泛菌,PantoeaananatisZ1,为泛菌属细菌,该细菌于2014年3月26日保藏于中国典型培养物保藏中心(简称CCTCC;地址:中国武汉,武汉大学;邮编:430072),其生物保藏号为CCTCCNO:M2014105,分类命名为:PantoeaananatisZ1。所述细菌CCTCCNO:M2014105是从竹子叶片中筛选获得的,其生物学特征如下:(1)形态学特征:该细菌革兰氏染色为阴性,在光学显微镜16×100油镜下观察该细菌呈直杆状,周生鞭毛。(2)培养特征:在YEB固体培养基中生长良好,菌落圆润,呈淡黄色,边缘整齐,透明,易挑起,在YEB液体培养基中培养时随着培养时间延长,培养液由透明的浅黄色变为浑浊的黄色。所述细菌CCTCCNO:M2014105的16SrRNA序列如SEQIDNO.1所示,其中所述16SrRNA序列有487个碱基,将序列输入GenBank数据库中进行BLAST比对处理,结果发现,该16SrRNA序列与菠萝泛菌MDM-02(Pantoeaananatis,MDM-02)的16SrRNA序列(GenBank登录号:HE716901.1)同源性为99%,结合形态学特征和培养特征鉴定该细菌CCTCCNO:M2014105为泛菌属的菠萝泛菌(Pantoeaananatis)。本专利技术还提供了上述细菌CCTCCNO:M2014105在制备生物灭螺剂中的应用,所述细菌CCTCCNO:M2014105的发酵液作为生物灭螺剂杀灭钉螺。本专利技术相比现有技术具有以下优点:本专利技术提供了一种具有灭螺活性的菠萝泛菌及其应用,该细菌CCTCCNO:M2014105能够作为生物灭螺剂快速有效地杀灭钉螺,可直接作为生物灭螺剂使用,用该细菌CCTCCNO:M2014105制备的生物灭螺剂与传统化学灭螺剂相比,制备方法简单,成本低,对环境友好。具体实施方式下面对本专利技术的实施例作详细说明,本实施例在以本专利技术技术方案为前提下进行实施,给出了详细的实施方式和具体的操作过程,但本专利技术的保护范围不限于下述的实施例。实施例1本实施例的一种具有灭螺活性的菠萝泛菌CCTCCNO:M2014105菌株的筛选,包括以下步骤:1、培养基的配制:1)YEB液体培养基:牛肉浸膏为5.0g/L,酵母膏为1.0g/L,蛋白胨为5.0g/L,MgSO4·7H2O为4g/L,蔗糖为5.0g/L,pH7.0~7.5;2)YEB固体培养基:将上述YEB液体培养基中加入15g/L的琼脂,获得YEB固体培养基。2、筛选步骤:1)在无菌条件下,取新鲜竹叶,用体积分数为75%的酒精浸泡1分钟,0.1%升汞浸泡12分钟,无菌生理盐水冲洗3遍后,将竹叶研磨,获得组织碎末;2)将步骤1)的组织碎末接种到100mL的YEB液体培养基中,37℃培养12~16小时,培养的转速为180rpm,获得培养液;3)按体积计,将步骤2)的培养液用无菌生理盐水依次稀释为10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6和10-7,获得稀释液;4)将步骤3)的稀释液涂于YEB固体培养基上,37℃培养12~16小时,挑取单菌落进行纯化,即获得所述细菌CCTCCNO:M2014105。3、分子鉴定:将上述纯化后的细菌CCTCCNO:M2014105接种到YEB固体培养基上,37℃培养12~16小时,挑取单菌落进行菌落PCR,所述菌落PCR的引物为细菌16SrRNA通用引物27F和R518,所述引物的序列为:SEQNO.2:27F:AGAGTTTGATCCTGGCTCAGSEQNO.3:R518:ATTACCGCGGCTGCTGG所述菌落PCR的扩增程序为:94℃预变性3分钟,94℃变性30秒,55℃退火30秒,72℃延伸1分钟,循环30次,72℃继续延伸7分钟,获得PCR扩增产物;将PCR扩增产物用质量分数为1.2%的琼脂糖凝胶电泳检测,用PCR纯化试剂盒进行纯化,获得细菌CCTCCNO:M2014105的16SrRNA,将16SrRNA送至测序公司测序,结果如SEQIDNO.1所示,将16SrRNA序列输入GenBank数据库,用BLAST软件进行比对处理,结果发现,该16SrRNA序列与菠萝泛菌MDM-02(Pantoeaananatis,MDM-02)的16SrRNA序列(GenBank登录号:HE716901.1)同源性为99%,结合形态学特征和培养特征鉴定该细菌CCTCCNO:M2014105为泛菌属的菠萝泛菌。实施例2本实施例为所述细菌CCTCCNO:M2014105灭螺活性的测定:1、灭螺剂的制备:将细菌CCTCCNO:M2014105接种于100mL的YEB液体培养基中,37℃下培养24小时,培养的转速为180rpm,得到种子液,将1mL种子液转移到100mL的YEB液体培养基中,37℃培养12~16小时,培养的转速为180rpm,获得发酵液,即为生物灭螺剂。2、灭螺剂稀释液的配制:将灭螺剂用去氯水配制成体积分数为10%的溶液,即为灭螺剂稀释液。3、灭螺活性的测定:将野外采集的钉螺在25℃下培养3天后,选择活力好的钉螺用去氯水冲洗3遍,将钉螺分成三组,每组三袋,每袋20只钉螺,每组选择一袋置于配置好的灭螺剂稀释液中分别浸泡2天,3天,4天,取出后用去氯水冲洗干净,室温恢复饲养3天,清水浸泡2小时,取出观察钉螺有无软体伸出,若有软体伸出则为活钉螺,无软体伸出的用敲击法敲击钉螺壳体,判断死活,同时设置去氯水为阴性对照组。4、结果:细菌CCTCCNO:M2014105的灭螺活性测定结果如下表1所示:表1:细菌CCTCCNO:M2014105的灭螺活性测定结果表从表1中可以看出,该细菌CCTCCNO:M2014105杀灭钉螺的效率随着时间的增加而增加,在处理2天的情况下,钉螺的平均死亡率为53.33%,在处理3天的情况下,钉螺的平均死亡率达到了90%,在处理4天的情况下,钉螺的平均死亡率达到了98.33%,可以看出,该细菌CCTCCNO:M2014105具有很好的杀灭钉螺的效果,其杀灭钉螺的效率随着时间的延长而增加。本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种具有灭螺活性的菠萝泛菌,Pantoea ananatis Z1,其特征在于,所述菠萝泛菌的生物保藏号为CCTCC NO:M2014105。

【技术特征摘要】
1.一种具有灭螺活性的菠萝泛菌,PantoeaananatisZ1,其特征在于,所述菠萝泛菌的生物保藏号为CCTCCNO:M2014105。2.根据权利要求1所述的一种具有灭螺活性的菠萝泛菌,其特征在于,所述菠萝泛菌的16SrRNA序...

【专利技术属性】
技术研发人员:叶爱华郭小双何金铃黄世霞刘学诗张仪
申请(专利权)人:安徽农业大学
类型:发明
国别省市:安徽;34

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