本发明专利技术公开了水溶性聚合物特别是多唾液酸(PSA)或改性PSA(mPSA)，通过使氧化的碳水化合物部分与水溶性聚合物接触，缀合到非凝血蛋白的糖蛋白的氧化的碳水化合物部分，或缀合至神经节苷脂，或缀合至药物传递系统，其中所述水溶性聚合物包含氨氧基以及在氧化的碳水化合物部分和水溶性聚合物上的氨氧基之间形成肟键，或其中所述水溶性聚合物包含酰肼基以及在氧化的碳水化合物部分和水溶性聚合物的酰肼基之间形成腙键。由此得到氨氧-水溶性聚合物或酰肼-水溶性聚合物例如PSA和mPSA的缀合物，其中PSA和mPSA通过碳水化合物部分连接。
【技术实现步骤摘要】
【专利说明】 相关申请 本申请的原申请是专利技术专利申请日为2010年7月26日，申请号为 201080042343. 4,专利技术名称为《非凝血蛋白的糖基多唾液酸化》的分案申请，原申请要求申 请日为2009年7月27日的美国申请61/228,828,以及申请日为2010年5月21日的美国 申请61/347, 136的优先权。
本专利技术涉及用于将水溶性聚合物特别是多唾液酸，与含碳水化合物的化合物特别 是非凝血蛋白的糖蛋白缀合的材料和方法，以及得到的缀合物。
技术介绍
例如通过聚乙二醇化或多唾液酸化（polysialylation)缀合的多肽药物防止该 药物在血液循环中降解，并由此提高其药效学和药代动力学性质（Harris和Chess, Nat Rev Drug Discov. 2003 ;2:214-21 ;S. Jain, D. Hreczuk-Hirst,Ρ· Laing 和 G. Gregoriadis, Drug Delivery Systems and Sciences (药物传递系统和科学），4(No 1):3-9, 2004·)。聚乙二 醇化方法把乙二醇重复单元（聚乙二醇（PEG))连接到多肽药物上。PEG分子具有大的流体 力学体积（为球状蛋白质尺寸的5-10倍），其水溶性高、高度水合、无毒、无免疫原性并且能 够快速从体内清除。分子的聚乙二醇化可导致药物对酶降解的抵抗性提高、体内半衰期延 长、给药频率减少、免疫原性降低、物理和热稳定性增加、溶解性增加、液体稳定性增加及聚 集性减少。FDA在二十世纪九十年代初批准了第一批聚乙二醇化药物。从那时起，FDA已经 批准了几批用于口服、可注射和局部给予的聚乙二醇化药物。 已发现唾液酸（也称N-乙酰基神经氨酸）和多唾液酸广泛分布于动物组织内，较 少程度地分布于从植物和真菌至酵母和细菌的其它物种内，大部分分布在糖蛋白和神经节 苷脂内。 本文所使用的缩写"PSA"指术语"多唾液酸"。同样地，本文所使用的缩写"mPSA" 指术语"改性多唾液酸"。 PSA由N-乙酰基神经氨酸的聚合物（通常为均聚物）构成。仲氨基一般具有乙酰 基，但它可具有乙醇酰基来代替乙酰基。羟基上可能的取代基包括乙酰基、乳酰基、乙基、硫 酸基和磷酸基。【主权项】1. 一种将多唾液酸（PSA)或改性PSA (mPSA)与包含碳水化合物基团的非凝血蛋白的糖 蛋白的氧化的碳水化合物部分缀合的方法，所述方法包括在能够缀合的条件下使所述氧化 的碳水化合物部分与PSA或mPSA接触，其中所述PSA或mPSA包含酰肼基，以及在所述氧化 的碳水化合物部分与所述PSA或mPSA的酰肼基之间形成腙键。2. 根据权利要求1所述的方法，其中所述PSA或mPSA为多聚乙酰神经氨糖酸或改性多 聚乙酰神经氨糖酸。3. 根据权利要求1或2所述的方法，其中所述PSA或mPSA包含2-500个唾液酸单元。4. 根据权利要求1或2所述的方法，其中所述糖蛋白选自细胞因子、集落刺激因子、植 物蛋白、肿瘤坏死因子、白细胞介素受体、生长因子、激素、免疫球蛋白、半乳糖苷酶、DNA酶、 它们的片段，以及包含任何上述蛋白或其片段的融合蛋白。5. 根据权利要求1或2所述的方法，其中所述糖蛋白选自白细胞间介素、a -干扰素、 3 -干扰素以及Y -干扰素、粒细胞集落刺激因子、成纤维细胞生长因子、血小板源性生长 因子、磷脂酶激活蛋白（PUP)、胰岛素、凝集素和蓖麻毒素、肿瘤坏死因子、可溶型肿瘤坏死 因子受体、可溶型白细胞介素受体、组织生长因子、转化生长因子、表皮生长因子、生长调节 素、色素激素、下丘脑释放因子、抗利尿激素、催乳素、绒膜促性腺激素、促卵泡激素、促甲状 腺素、组织型纤溶酶原激活剂、IgG、IgE、IgM、IgA、IgD、单克隆抗体、促红细胞生成素（EPO)、 a _半乳糖苷酶、0 -半乳糖苷酶、胎球蛋白、它们的片段，以及包含任何上述蛋白或其片段 的融合蛋白。6. 根据权利要求1或2所述的方法，其中在所述糖蛋白选自TGF a、TGFP或它们的片 段，以及包含任何上述蛋白或其片段的融合蛋白。7. 根据权利要求1或2所述的方法，其包括通过用高碘酸钠（NaI04)与糖蛋白温育来 氧化所述碳水化合物部分。8. 根据权利要求1或2所述的方法，其包括氧化PSA或mPSA以在PSA或mPSA的末端 单元上形成醛基，并使所述氧化的PSA或mPSA与酰肼连接剂反应。9. 根据权利要求8所述的方法，其包括用NalO 4氧化PSA或mPSA。10. 根据权利要求1或2所述的方法，其包括使所述氧化的碳水化合物部分在含有选自 苯胺和苯胺衍生物的亲核催化剂的缓冲液中与PSA或mPSA接触。11. 根据权利要求10所述的方法，所述酰肼基通过氧化的PSA或mPSA与酰肼连接剂反 应形成。12. 根据权利要求1或2所述的方法，进一步包括在还原性化合物存在下，通过进行温 育来还原缀合的糖蛋白中的腙键。13. 根据权利要求12所述的方法，其中所述还原性化合物为氰基硼氢化钠（NaCNBH3) 或抗坏血酸（维生素C)。14. 可通过权利要求1-13中任一项所述的方法得到的缀合糖蛋白。15. -种非凝血蛋白的缀合糖蛋白，其包括： (a) 所述糖蛋白；以及 (b) 与（a)中的糖蛋白结合的至少一种酰肼-PSA或酰肼-mPSA，其中所述酰肼-PSA或 酰肼-mPSA通过一个或多个碳水化合物部分连接到所述糖蛋白上。【专利摘要】本专利技术公开了水溶性聚合物特别是多唾液酸(PSA)或改性PSA(mPSA)，通过使氧化的碳水化合物部分与水溶性聚合物接触，缀合到非凝血蛋白的糖蛋白的氧化的碳水化合物部分，或缀合至神经节苷脂，或缀合至药物传递系统，其中所述水溶性聚合物包含氨氧基以及在氧化的碳水化合物部分和水溶性聚合物上的氨氧基之间形成肟键，或其中所述水溶性聚合物包含酰肼基以及在氧化的碳水化合物部分和水溶性聚合物的酰肼基之间形成腙键。由此得到氨氧-水溶性聚合物或酰肼-水溶性聚合物例如PSA和mPSA的缀合物，其中PSA和mPSA通过碳水化合物部分连接。【IPC分类】A61K47-48, C12N9-96, C07K1-107【公开号】CN104530182【申请号】CN201410737723【专利技术人】S·杰因, G·格利戈里亚迪斯, A·德维伟迪, S·纳什, J·思科曼, S·海德, H·罗顿斯坦纳, P·图利克 【申请人】利普森技术有限公司, 巴克斯特国际公司, 巴克斯特医疗保健股份有限公司【公开日】2015年4月22日【申请日】2010年7月26日本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种将多唾液酸(PSA)或改性PSA(mPSA)与包含碳水化合物基团的非凝血蛋白的糖蛋白的氧化的碳水化合物部分缀合的方法，所述方法包括在能够缀合的条件下使所述氧化的碳水化合物部分与PSA或mPSA接触，其中所述PSA或mPSA包含酰肼基，以及在所述氧化的碳水化合物部分与所述PSA或mPSA的酰肼基之间形成腙键。
【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：S·杰因，G·格利戈里亚迪斯，A·德维伟迪，S·纳什，J·思科曼，S·海德，H·罗顿斯坦纳，P·图利克，
申请(专利权)人：利普森技术有限公司，巴克斯特国际公司，巴克斯特医疗保健股份有限公司，
类型：发明
国别省市：英国;GB
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