本发明专利技术涉及对人组蛋白甲基转移酶EZH2的野生型和某些突变形式的抑制，所述EZH2是PRC2复合物的催化亚基，所述PRC2复合物催化组蛋白H3上赖氨酸27(H3-K27)的单-至三-甲基化。在一个实施方式中，所述抑制对于所述EZH2的突变形式是选择性的，从而抑制与某些癌症相关的H3-K27的三甲基化。可以使用所述方法来治疗癌症，包括滤泡性淋巴瘤和弥散性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)。本发明专利技术还提供用于鉴定EZH2突变形式的小分子选择性抑制剂的方法，以及用于测定对象内对EZH2抑制剂响应性的方法。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】【专利说明】 相关引用 本申请要求2012年3月12日提交的美国专利申请号13/418,242的优先权，其全 文通过引用纳入本文。
本专利技术涉及人组蛋白甲基转移酶EZH2的野生型和某些突变形式的抑制，所述 EZH2是PRC2复合物的催化亚基，其催化在组蛋白H3上第27位赖氨酸（H3-K27)的单-至 三-甲基化，还涉及用于治疗癌症的方法，所述癌症包括滤泡性淋巴瘤和弥散性大B细胞淋 巴瘤（DLBCL)，以及用于测定对象中对EZH2抑制剂响应性的方法。 背景 在真核细胞中，DNA与组蛋白包装形成染色质。约150碱基对的DNA在组蛋白的 八聚体（组蛋白2A、2B、3和4各两个）上缠绕两圈形成核小体一一染色质的基本单位。染 色质有序结构的变化能引起关联基因转录中的改变。该过程高度受控，因为基因表达模式 的改变深度影响基础细胞过程，诸如分化、增殖和凋亡。通过共价修饰组蛋白，最显著是其 N端尾部来介导对染色质结构（并因而对转录）变化的控制。这些修饰通常称为表观遗传 学修饰，因为它们能造成基因表达中的可遗传改变，但不影响所述DNA本身的序列。氨基酸 侧链的共价修饰（例如，甲基化、乙酰化、磷酸化和泛素化）是酶促介导的。 向组蛋白上的特定氨基酸位点选择性添加甲基基团受到被称为组蛋白甲基转移 酶（HMT)的独特酶家族作用的控制。具体基因的表达水平受相关的组蛋白位点处一个或多 个甲基基团的存在与否影响。具体组蛋白位点处的甲基基团的特定作用持续直至所述甲基 基团被组蛋白去甲基化酶移除，或持续直至所述修饰的组蛋白通过核小体转换被替代。以 类似的方式，其它酶类能够用其它化学物质修饰DNA和组蛋白，并且其它酶也能移除这些 物质来控制基因表达。 必须严格控制转录调节幕后的生化系统有序体系，从而最优化地进行细胞生长和 分化。当这些控制被负责DNA和组蛋白修饰的酶的异常表达和/或活性干扰时，产生疾病 状态。例如，在人癌症中，越来越多的证据提示表观遗传酶活性失调导致癌症相关的细胞增 殖失控及其它癌症相关表型，例如增强的细胞迀移和入侵（invasion)。除了癌症外，有越来 越多的证据显示表观遗传酶在众多其它人疾病中的作用，包括代谢疾病（例如糖尿病）、炎 性疾病（例如克罗恩氏病（Crohn'sdisease))、神经退行性疾病（例如阿尔茨海默病）和 心血管疾病。因此，选择性调节表观遗传酶的异常作用就一定范围疾病的治疗而言具有广 泛前景。组蛋白甲基转務酶EZH2 已知多梳组（PcG)和三胸组（trxG)蛋白是细胞记忆系统的部分。Francis 等?（2001)NatRevMolCellBiol2:409-21;Simon等?（2002)CurrOpinGenet Devl2:210-8.这两组蛋白都涉及保持同源异形框（Hox)基因表达的空间模式，其在胚胎发 育早期由瞬时表达的分节基因建立。一般而言，PcG蛋白是保持"关闭状态"的转录抑制子， 而trxG蛋白是保持"启动状态"的转录激活子。因为PcG和trxG蛋白的成员包含固有的 组蛋白甲基转移酶（HMTase)活性，所以PcG和trxG蛋白可通过核心组蛋白的甲基化来参 与细胞记忆。Beisel等?（2002)Nature419:857-62;Cao等?（2002)Science298:1039-43 ; Czermin等? （2002)Celllll:185-96;Kuzmichev等? （2002)GenesDev16:2893-905; Milne等.（2002)M〇1Cell10:1107-17;Muller等.（2002)Celllll:197-208;Nakamura 等?（2002)MolCelllO:1119-28. 生化和基因研宄提供证据显示果幡（Drosophila)PcG蛋白在至少两个不同蛋白 复合物中起作用，所述蛋白复合物为多梳抑制复合物1(PRC1)和ESC-E(Z)复合物（也称作 多梳抑制复合物2(PRC2))，尽管所述复合物的组成可为动态。Otte等.（2003)CurrOpin GenetDev13:448-54?果幡（Drosophila)中的研宄（Czermin等?（同上）；Muller等?（同 上））和哺乳动物细胞中的研宄（Cao等.（同上）；Kuzmichev等.（同上））证明，ESC-E(Z)/ EED-EZH2(即PRC2)复合物具有固有的组蛋白甲基转移酶活性。尽管由不同组分离的复合 物组成略有不同，其一般包括EED、EZH2、SUZ12和RbAp48或其果蝇（Drosophila)同源物。 然而，仅包括EED、EZH2和SUZ12的重建复合物保留对组蛋白H3第27位赖氨酸的组蛋白甲 基转移酶活性。美国专利7, 563, 589 (通过引用纳入本文）。 在构成PRC2复合物的各种蛋白中，EZH2(Zeste增强子同源物2)是催化亚基。EZH2 的催化位点进而存在于SET结构域，所述SET结构域是在若干染色质相关蛋白质（包括三 胸组和多梳组的成员）中发现的高度保守序列基序（以Su(var) 3 - 9命名，Zeste增强子， 三胸）。SET结构域是除H3-K79甲基转移酶D0T1以外所有已知组蛋白赖氨酸甲基转移酶 的特征。 除Hox基因沉默以外，显示PRC-2介导的组蛋白H3-K27甲基化还参与X灭活。 Plath等.（2003)Science300:131-5;Silva等.（2003)DevCell4:481-95?募集PRC2 复 合物至Xi以及随后组蛋白H3-K27上的三甲基化发生在X灭活的起始阶段，并且依赖Xist RNA。此外，发现EZH2和其相关组蛋白H3-K27甲基转移酶活性区别标记多能外胚层细胞和 分化的滋养外胚层。Erhardt等.（2003)Development130:4235-48)。 与EZH2维持多能外胚层细胞的表观遗传修饰模式的作用一致，Cre介导的EZH2去 除引起细胞中组蛋白H3-K27甲基化的缺失。Erhardt等.（同上）。此外，前列腺和乳癌细胞 系和组织的研宄显示EZH2和SUZ12水平与这些癌症的侵袭性之间的强烈相关性（Bracken 等? （2003)EMB0J22:5323-35;Kirmizis等? （2003)M〇1CancerTher2:113-21; Kleer等?（2003)ProcNatlAcadSciUSA100:11606-11;Varambally等?（2002)Nature 419:624-9)，指示RRC2复合物的功能障碍可能引起癌症。 近期，报道EZH2的体细胞突变与滤泡性淋巴瘤（FL)和弥散性大B细胞淋巴瘤 (DLBCL)的生发中心B细胞样（GCB)亚型相关。Morin等.（2010)NatGenet42:181-5。在 所有情况中，发现突变EZH2基因的出现是杂合的，并且通过转录组测序在所述突变样品中 检测到野生型和突变等位基因的表达。目前，关于治疗大多数DLBCL的治疗标准是R-CH0P 方法。然而，该方法的结果远不能令人满意。因此，医疗上急需鉴定新型且有效的治疗方法， 其任选地视对象的遗传概况而定。
技术实现思路
本专利技术基于如下发现：表达某些EZH2突变型本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种治疗或减轻对象的癌症或癌前病症症状的方法，所述方法包括向表达突变型EZH2的对象给予治疗有效量的EZH2抑制剂，所述突变型EZH2在SEQ ID NO:6所示的底物口袋结构域中包含突变。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：K·W·孔特斯，S·K·纳特森，T·J·N·威格尔，
申请(专利权)人：EPIZYME股份有限公司，
类型：发明
国别省市：美国;US
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