一种用于鉴定西洋参的引物对及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种用于鉴定西洋参的引物对及其应用。本发明专利技术所提供的用于鉴定或辅助鉴定西洋参的引物对，具体为由序列表中序列1和序列2所示的两条单链DNA分子组成的引物对。实验证明，采用本发明专利技术所提供的引物，通过快速PCR方法及荧光染色的方法实现了西洋参与人参、三七、竹节参、珠子参、羽叶三七的快速、准确鉴别，并引入了荧光染料法对真伪鉴别结果进行检测，为实现药材分子鉴别的现场运用提供技术支撑。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于分子生物学领域，涉及。
技术介绍
人参属植物药材的鉴定方法主要有形态鉴定、理化鉴定、细胞鉴定等，这些传统的 鉴定手段由于易受环境条件的影响或植物本身的限制，人为干扰因素较多，无法直接体现 种质的遗传特征，有时难以得到准确的结果（周延清.DNA分子标记技术在植物研究中的应 用.北京：化学工业出版社，2005.)。DNA分子标记技术是近二十年来兴起并不断发展和完善的新检测技术。近年来， DNA分子标记技术在人参属植物的许多研究中均有应用，如中药鉴定、遗传多样性与种质 资源、物种进化与亲缘关系、野生类型与栽培品种的鉴别、道地性等。而就DNA分子标记 技术在人参属植物鉴定中的应用而言，DNA分子标记则是从分子水平上客观地反映待测 材料基因片段之间的差异，鉴别结果不受环境因素、样品形态和材料来源的影响，一般通 过杂交或电泳等方式就能直观地体现出来，结果更为准确可靠。因此，中药鉴定也就成 为DNA分子标记在人参属植物中应用最早且最多的领域。在DNA分子标记技术中应用最 多的是随机扩增多态性（RAPD)技术。Shaw和But于1995年首先采用RAPD方法明显地 区分开人参属的3种药材人参、西洋参、三七和桔梗、紫茉莉、护兰Talinumpaniculatum 及商陆PhytolaccaAcinosa4 种伪品（ShawPC,ButPP.AuthenticationofPanax speciesandtheiradulterantsbyrandom-primedpolymerasechainreaction.Planta Med，1995, 61 (5) :466.)。Kim等的研究表明RAH)标记可以方便有效地将韩国人参和其他人 参属植物鉴别开（KimHJ，LimCJ，ChoJH，etal.Moleculardifferentiationofpanax speciesbyRAPDanalysis.ArchPharmRes，2003,26(8):601.)。除RAPD技术外，随机 引物PCR(AP-PCR)、聚合酶链式反应（PCR)直接测序、rRNA和特征性片断扩增区域（SCAR) 等技术也被应用在人参属植物药材的鉴定中。1994年，Cheung等首次将AP-PCR技术应用 在人参与西洋参的药材鉴别中（CheungKS，KwanHS，ButPP，elal.Pharmacognostical identificationofAmericanandOrientalginsengrootsbygenomicfingerprinting usingarbitrarilyprimedpolymerasechainreaction(AP-PCR).JournalofEthnop harmacology, 1994, 42 (1) : 67.)。崔光红等利用多重等位基因特异PCR鉴别人参与西洋参 (崔光红，唐晓晶，黄璐琦.利用多重等位基因特异PCR鉴别人参、西洋参，中国中药杂志， 2006, 31 (23) : 1940)。詹鑫婕等依据人参和西洋参ITS2条形码的专属性鉴别位点，建立利 用聚合酶链反应-单链构象多态性技术（PCR-SSCP)鉴别人参和西洋参的方法（詹鑫婕，田 程，张媛，等.基于ITS2条形码SNPs的人参和西洋参PCR-SSCP分子鉴别研究，中国中药杂 志，2012, 37(24) : 3748)。 综上所述，不同研究学者分别采用RAro法、AP-PCR法、PCR-SSCP法、多重PCR法等 DNA分子标记技术对人参与人参属中其它药材进行鉴定研究，但这些方法测试时间较长，且 均需要电泳检测才可完成，因此相比较荧光染色方法繁琐，不利于现场快速鉴别的应用与 推广。
技术实现思路
本专利技术的第一个目的是提供一种用于鉴定或辅助鉴定西洋参的引物对。 本专利技术所提供的用于鉴定或辅助鉴定西洋参的引物对，具体为由序列表中序列1 和序列2所示的两条单链DNA分子组成的引物对。 所述引物对中，两条单链DNA分子既可以分别单独包装，也可以按照摩尔比为1:1 的比例混合后包装在一起。 本专利技术的第二个目的是提供一种用于鉴定或辅助鉴定西洋参的试剂盒。 本专利技术所提供的用于鉴定或辅助鉴定西洋参的试剂盒，具体可含有所述引物对、 dNTP和DNA聚合酶。 根据需要，所述试剂盒中还可含有荧光染料SYBRGreenI。 制备所述引物对的方法也属于本专利技术的保护范围。 制备所述引物对的方法，具体可包括将组成所述引物对的两条单链DNA分子分别 单独包装的步骤。 制备所述试剂盒的方法也属于本专利技术的保护范围。 制备所述试剂盒的方法，具体可包括如下A)或B)的步骤： A)将组成所述引物对的两条单链DNA分子分别单独包装后，与分别单独包装的 dNTP和DNA聚合酶包装于同一个试剂盒内：B)将组成所述引物对的两条单链DNA分子分别单独包装后，与分别单独包装的dNTP、DNA聚合酶和SYBRGreenI包装于同一个试剂盒内。 所述引物对，或所述试剂盒，在鉴定或辅助鉴定西洋参中的应用也属于本专利技术的 保护范围。 本专利技术的第三个目的是提供一种利用所述引物对或所述试剂盒鉴定或辅助鉴定 待测样品中是否含有西洋参的方法。 本专利技术所提供的利用所述引物对或所述试剂盒鉴定或辅助鉴定待测样品中是否 含有西洋参的方法，具体可包括如下步骤： (a)从待测样品中提取基因组DNA作为模板，采用所述引物对（序列1和序列2) 进行PCR扩增； (b)为如下（bl)或（b2): (bl)根据步骤（a)所得PCR产物的大小，按照如下方法确定待测样品中是否含有 西洋参：若PCR产物中含有大小为100_500bp(如240-260bp)的DNA片段，则所述待测样品 中含有或候选含有西洋参；若PCR产物中不含有大小为100_500bp(如240-260bp)的DNA 片段，则所述待测样品中不含有或候选不含有西洋参； 所述100-500bp(如240-260bp)的DNA片段具体为大小约为250bp的DNA片段 (在琼脂糖凝胶电泳图谱上与DNA分子量标准位于250bp处的条带处于同一水平线上）。 (b2)向步骤（a)扩增后的反应体系中加入荧光染料SYBRGreenI，得到含有荧光 染料的体系，按照如下方法确定待测样品中是否含有西洋参：若观察到所述含有荧光染料 的体系产生绿色荧光，则所述待测样品中含有或候选含有西洋参；若观察不到所述含有荧 光染料的体系产生绿色荧光，则所述当前第1页1 2 本文档来自技高网...

【技术保护点】
用于鉴定或辅助鉴定西洋参的引物对，其特征在于：所述引物对为由序列表中序列1和序列2所示的两条单链DNA分子组成的引物对。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：黄璐琦，袁媛，崔占虎，蒋超，
申请(专利权)人：中国中医科学院中药研究所，
类型：发明
国别省市：北京;11