糖尿病生物标记物制造技术

本发明专利技术已根据CD4初始(CD45RO-CD62L+)与中枢记忆(CD45RO+CD62L+)的比率和CD4中枢记忆T细胞亚群的水平而发现一种新的1型糖尿病中自身胰岛素产生下降的标记物。一种在受试者中诊断自身免疫和其进行性，更确切来说诊断糖尿病、前糖尿病、对糖尿病的易感性或疗法/干预模态对一种或多种这些病状的有效性水平的方法，所述方法可以通过以下方式进行：通过对从受试者提取的样品进行免疫荧光分析确定CD4初始(CD45RO-CD62L+)T细胞的水平；通过对从受试者提取的样品进行免疫荧光分析确定CD4中枢记忆(CD45RO+CD62L+)T细胞的水平；以及定量地关联所述CD4初始T细胞和中枢记忆T细胞的所述水平，其中CD4初始T细胞与CD4中枢记忆T细胞的低比率和/或高CD4中枢记忆T细胞表明自身免疫、对自身免疫的易感性、糖尿病、前糖尿病、对糖尿病的易感性或治疗对一种或多种这些病状的无效性。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】糖尿病生物标记物相关申请的交叉引用本申请要求2012年5月24日提交的美国临时申请号61/651,144的优先权，所述美国临时申请以全文引用方式并入本文。
本专利技术一般来讲涉及自身免疫、糖尿病领域，并且更具体来说，涉及1型糖尿病和免疫标记物。
技术介绍
1型糖尿病(T1DM)最常见的形式是免疫介导的疾病，其中的胰岛素分泌β细胞被自身免疫应答破坏。若干遗传和环境因素都与所述疾病的发病相关，这涉及到特异性靶向胰岛素分泌β细胞的免疫细胞对胰岛的进行性炎性浸润。这种病变在临床发病前(前糖尿病)的一段不确定时间(几个月到几年)形成并且在患者被诊断患有所述疾病之后继续发展。目前有一种方法使用抗体筛选和诊断T1DM。只要所述特异性抗体存在，随着时间的过去，显性糖尿病往往就会发展。GAD65自身抗体(GAA)、ICA512自身抗体(ICA512AA)或抗胰岛素自身抗体(IAA)中一种或多种的表达与发展T1DM的风险相关。GAD65自身抗体(GAA)、ICA512自身抗体(ICA512AA)或抗胰岛素自身抗体(IAA)中两种或两种以上的表达与发展T1DM的高风险相关。(LipingYu等，Diabetes2001年8月，第50卷，第8期，1735-1740；VergeCF等，Diabetes45:926-933,199；VergeCF.等，Diabetes47:1857-1866,1998和BingleyPJ等，Diabetes43:1304-1310,1994)。然而，这种筛选对于个体患者来说用处有限。虽然抗体筛选能够检测T1DM风险的增加水平，但是所述风险是基于总的群体并且不能告知个体患者疾病是否会在例如接下来几个月发病或者所述个体是否可能会在接下来5至10年不患糖尿病。自身免疫破坏的强度因不同患者而异。因此，需要一种会告知个体发展T1DM的个人风险并且能够指出疾病发病的时间范围的诊断方法。还需要改善分析T1DM自身免疫治疗的主要终点。治疗要从FDA得到管理批准，临床试验必须在合适的主要终点显示统计上显著的影响。这种治疗效果优选表现一些显而易见和临床上显著的益处。在预防T1DM的治疗的情况下，临床疾病的延迟或不发展(这使这些试验长达5或10年)。在干预患有临床疾病的患者的情况下，合适的主要终点与代谢控制和糖尿病并发症相关。最常应用而代谢主要终点-未达到治愈-是自身胰岛素产生的测量(刺激的C肽作为保留β-细胞功能的替代标记物)，其它的是HbA1c和胰岛素使用。T1DM患者中β-细胞功能的改善能够预测更好的短期和长期临床结果，这可能花费几年来评估。对于T1DM和并发症的治疗，可以直接监测血糖水平并且可以通过糖基化血红蛋白(例如HbA1c)的水平监测改善的血糖控制，这已经证明与短期和长期糖尿病并发症相关。对于希望在疾病的后临床阶段中维持β细胞功能的治疗来说，已经使用刺激的C肽浓度来测量T1DM的发展(PalmerJP等，Diabetes2004；53:250-264)。然而，使用C肽浓度需要长期进行重复的侵入性检测(所谓的混合餐耐量试验)，因此所述试验持续很长时间以允许评估降低β-细胞功能并且因此降低C肽浓度的疾病的发展。因此，需要更好的标记物作为试验的主要终点(预防和干预试验两者)以及需要更好的标记物以便能够更迅速和可靠地指出T1DM自身免疫的进行性，从而分出前糖尿病和糖尿病病状的阶段。还需要更好的分析法以便能够测量治疗T1DM的疗法的有效性和/或检测并发症。
技术实现思路
已根据CD4初始(CD45RO-CD62L+)T细胞亚群与中枢记忆(CD45RO+CD62L+)T细胞亚群的比率和在中枢记忆(CD45RO+CD62L+)T细胞亚群水平而发现一种新的1型糖尿病中自身胰岛素产生下降的标记物。在受试者中诊断糖尿病、前糖尿病、对糖尿病的易感性或疗法对一种或多种这些病状的有效性的方法可以通过如下方式进行：通过对从患者提取的样品进行免疫荧光分析确定CD4初始(CD45RO-CD62L+)T细胞的水平；通过对从患者提取的样品进行免疫荧光分析确定CD4中枢记忆(CD45RO+CD62L+)T细胞的水平，以及定量地关联所述CD4初始T细胞和CD4中枢记忆T细胞的水平，其中CD4初始T细胞与CD4中枢记忆T细胞的低的或降低的比率，或高的或增加的CD4中枢记忆T细胞水平表明自身免疫疾病、前自身免疫疾病、对自身免疫的易感性或治疗对一种或多种这些病状的无效性。在前糖尿病情形中，T1DM特异性自身抗体的存在表明T1DM自身免疫本身的存在。因此，在本专利技术的一个方面中，本文中描述的方法与确定是否存在糖尿病自身抗体组合使用。在本专利技术的一个方面中，公开了在受试者中确定疗法对糖尿病和前糖尿病病状的有效性的方法，所述方法包括以下步骤：在受试者中开始疗法，从所述受试者提取样品，在所述样品中测量CD4T细胞初始(CD45RO-CD62L+)亚群与中枢记忆(CD45RO+CD62L+)亚群的比率和/或CD4中枢记忆T细胞的水平，以及评估所述疗法的有效性，其中在所述疗法期间比率的增加和/或低的/下降的CD4中枢记忆T细胞表明治疗有效。在其它实施方案中，所述方法可以包括在所述受试者中开始疗法，从所述受试者提取样品，测量所述样品中的CD4T细胞中枢记忆(CD45RO+CD62L+)亚群，以及评估所述疗法的有效性，其中在所述疗法期间低的或降低的CD4中枢记忆T细胞水平或CD4初始T细胞与CD4中枢记忆T细胞亚群的高的或增加的比率表明治疗有效。一些实施方案提供在受试者中监测如糖尿病的自身免疫疾病的干预效果的方法，所述方法包括：选择经历自身免疫疾病或病状治疗的受试者，从所述受试者提取样品，在所述样品中测量CD4中枢记忆(CD45RO+CD62L+)T细胞亚群以及任选地测量CD4T细胞初始(CD45RO-CD62L+)亚群，以及评估所述疗法的有效性，其中在所述疗法期间低的或降低的CD4中枢记忆T细胞水平或CD4初始T细胞与CD4中枢记忆T细胞亚群的高的或增加的比率表明治疗有效。所述样品是例如在疗法开始之前(或在疗法开始之后但是在细胞群体中的变化起始之前)以及在疗法进行大约三个月和/或六个月时从所述受试者提取。在其它实施方案中，提供一种在受试者中诊断自身免疫疾病、前自身免疫疾病、对自身免疫疾病的易感性或疗法对一种或多种这些病状的有效性的方法，所述方法包括：选择患有或疑似患有自身免疫疾病、前自身免疫疾病或具有对自身免疫疾病的易感性的受试者，通过对从所述受试者提取的样品进行免疫荧光分析确定CD4初始(CD45RO-CD62L+)T细胞的水平；通过对从所述受试者提取的样品进行免疫荧光分析确定CD4中枢记忆(CD45RO+CD62L+)T细胞的水平，以及定量地关联所述CD4初始T细胞和CD4中枢记忆T细胞的水平，其中CD4初始T细胞与CD4中枢记忆T细胞的低的或降低的比率，或高的或增加的CD4中枢记忆T细胞水平表明自身免疫疾病、前自身免疫疾病、对自身免疫的易感性或治疗对一种或多种这些病状无效。一些实施方案提供一种确定直到自身免疫疾病发病的时间的方法，所述方法包括：获得具有对所述自身免疫病状为特异性的自身抗体的受试者；从所述受试者提取一个或多个样品；在所述样品中测量中枢记忆(本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种在受试者中确定疗法对自身免疫疾病或病状的有效性的方法，所述方法包括：选择经历自身免疫疾病或病状的疗法的受试者，从所述受试者提取样品，在所述样品中测量CD4中枢记忆(CD45RO+CD62L+)T细胞亚群并且任选地测量CD4T细胞初始(CD45RO‑CD62L+)亚群，以及评估所述疗法的所述有效性，其特征在于：在所述疗法期间低的或降低的CD4中枢记忆T细胞水平，或所述CD4T细胞初始亚群与所述CD4中枢记忆T细胞亚群的高的或增加的比率表明有效的疗法。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2012.05.24 US 61/651,1441.一种生物标记物的检测和分析方法，所述生物标记物包括CD4T细胞初始与CD4中枢记忆T细胞的低的或降低的比率或高的或增加的CD4中枢记忆T细胞水平，其特征在于：所述检测和分析方法包括：在一个或多个样品中测量CD45RO+CD62L+CD4+中枢记忆T细胞亚群水平并且任选地测量CD45RO-CD62L+CD4+T细胞初始亚群水平；以及计算两个或更多个样品之间或在不同时间点对一个样品进行的两个或更多个测量之间的所述CD45RO+CD62L+CD4+中枢记忆T细胞亚群水平的变化，和/或所述CD45RO-CD...

【专利技术属性】
技术研发人员：泰汉摩·欧尔本，
申请(专利权)人：欧尔本生物科技有限责任公司，
类型：发明
国别省市：美国;US