本发明专利技术涉及海洋天然药物化学领域，具体涉及贪婪倔海绵中一种新的倍半萜醌化合物Dysideanone D及其用途。在对Dysideanone D药理活性研究中发现，Dysideanone D对多种肿瘤有抑制作用，其中对宫颈癌细胞抑制作用最强，抑制效果优于阳性药，且对正常细胞抑制作用较弱。因此，Dysideanone D可以用来制备抗肿瘤药物尤其是抗宫颈癌药物。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及海洋天然药物化学领域，具体涉及贪婪倔海绵中一种新的倍半萜醌化合物及其用途。
技术介绍
海洋生物含有与陆地生物不同的、化学结构特异的活性物质。为寻找治疗心脑血管疾病、肿瘤、艾滋病、老年痴呆等疑难疾病活性物质，人们纷纷将目光投向海洋。我国海洋药物研究与开发经过多年努力，取得了可喜成效，发现了一批新型抗艾滋病、抗肿瘤和抗动脉粥样硬化的药物。研究发现，海绵富含多种次生代谢产物，结构新颖，药理活性广泛。倍半萜醌和倍半萜氢醌是其中典型的一类化合物。以从贪婪倔海绵Dysidea avara 中分离得到的倍半萜氢醌Avarol及其衍生物Avarone为例，二者抗肿瘤活性极为显著，治疗效果与环磷酰胺、柔红霉素及氨甲蝶呤相似；抗HIV活性与AZT 相似；而醛糖还原酶抑制活性与Sorbinil 接近。Jiao WH等在对南海贪婪倔海绵（Sponge Dysidea avara）化学成分研究中新分离得到了三种结构特异的倍半萜醌化合物，命名为Dysideanone A、B和C（Dysideanones A?C, Unusual Sesquiterpene Quinones from the South China Sea Sponge Dysidea avara, J. Nat. Prod. 2014, 77, 346?350）。对这三个化合物活性筛选结果显示，Dysideanone B对HeLa肿瘤细胞株和HepG2肿瘤细胞株具有显著的抑制作用，IC50分别为7.1和9.4 μM。Dysideanone A、B和C结构式如下：专利技术人在对贪婪倔海绵Dysidea avara化学成分研究过程中，从二氯甲烷萃取物中分离鉴定了一个新的倍半萜醌类化合物，化学结构上为Dysideanone A 1位、17位脱水且3位、4位碳碳双键移位为4位和11位。该倍半萜醌化合物为首次报道，命名为Dysideanone D。细胞毒试验表明，该化合物对肿瘤细胞具有显著的细胞毒作用，对正常细胞细胞毒作用较弱，可以作为制备抗肿瘤药物的活性成分。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种从贪婪倔海绵Dysidea avara中分离得到的一种新的倍半萜醌化合物Dysideanone D。本专利技术的另一目的在于提供Dysideanone D在制备抗肿瘤药物中的应用。根据本专利技术的一方面，提供具有下列化学结构式的化合物Dysideanone D：根据本专利技术的另一方面，提供本专利技术化合物Dysideanone D在制备抗肿瘤药物中的应用。为实现该目的，本专利技术采用MTT法筛选了该化合物对多种肿瘤细胞的抑制活性，包括：人宫颈癌HeLa、人肝癌HepG2、人肺癌A549和人结肠癌HCT15。研究发现，Dysideanone D对人宫颈癌HeLa肿瘤细胞株具有显著的抑制作用（效果优于阳性药），对其他三种肿瘤细胞株抑制活性相对较弱；对人正常细胞无明显细胞毒作用。进一步细胞学试验表明，Dysideanone D对人宫颈癌HeLa肿瘤的抑制作用可能和细胞凋亡有关。基于标准药理学试验，本专利技术化合物Dysideanone D因而可以用于抗肿瘤领域，优选宫颈癌。下面为MTT试验及结果。体外抗人宫颈癌HeLa、人肝癌HepG2、人肺癌A549、人结肠癌HCT15和人脐静脉内皮细胞（VEC）的活性测定：平板打孔法测定KB 和细胞株抑制活性，试验方法如下：取对数生长期细胞培养于96 孔培养板内，每孔100μL ( 含1000-1200 个肿瘤细胞)，次日，给药组加入含有不同浓度化合物，每药设4 个剂量组，每组设3 个平行板。对照组加入与化合物等体积的溶剂，置5％CO2温箱中于37℃培养，4d 后弃去培养液，每孔加入200μL 0.2％ MTT 溶液，37℃保温4h，弃去上清液，每孔加入DMSO 150μL 溶解甲簪颗粒，轻度震荡后，用酶标仪，在参考波长450nm，检测波长570nm 条件下测定光密度(OD)。以溶剂对照处理的细胞株为对照组，以紫杉醇作为阳性对照药品。由所得细胞抑制率使用LOGIT 法进而计算化合物IC50 数值。试验结果表明，本专利技术化合物Dysideanone D对人宫颈癌HeLa肿瘤细胞株具有显著的抑制作用（效果优于阳性药），对其他三种肿瘤细胞株抑制活性相对较弱；另一方面，化合物Dysideanone D对正常细胞（人脐静脉内皮细胞VEC）的抑制作用较小，表明本专利技术化合物Dysideanone D具有抗肿瘤作用，且具有一定的选择性。试验结果见表1。表1 本专利技术化合物I对肿瘤细胞和正常细胞的抑制作用(IC50, μM)附图说明图1为Dysideanone D计算ECD和试验ECD图比较图2为Dysideanone D作用24小时HeLa细胞形态学变化（对照组和处理组）。具体实施方式实施例1： Dysideanone D制备方法干燥海绵6kg，95%乙醇热回流提取3次，每次20L。提取液减压浓缩得浸膏320g。将浸膏均匀分散在3L水中，用二氯甲烷萃取3次，每次3L。合并二氯甲烷萃取液，减压浓缩得浸膏118g。浸膏用100ml二氯甲烷和丙酮混合溶剂（3:1, V/V）溶解，与硅胶混合拌样（200g，200-300目），挥干溶剂。采用200-300目硅胶（1.5kg）装柱进行分离。用二氯甲烷-丙酮梯度洗脱（10:1, 5:1, 2:1, 1:1, V/V）。收集二氯甲烷-丙酮（2:1）洗脱部分，减压回收溶剂后，进一步用氯甲烷-丙酮梯度洗脱（4:1, 3:1, 2:1，V/V），收集二氯甲烷-丙酮（2:1）洗脱部分。对该部分用制备型高效液相色谱分离，水-甲醇梯度洗脱，从水-甲醇（体积比15:85）洗脱部位得到纯的化合物Dysideanone D（11.3mg）。结构确证：淡黄色粉末；HR-ESIMS显示[M+H]+为m/z 295.2542；1H NMR (CDCl3, δppm, J in Hz, 600 MHz)和13C NMR(CDCl3, δppm, 150 MHz)数据见表2。结合DEPT、HSQC、HMBC、NOESY谱及文献数据（Dysideanones A?C, Unusual Sesquiterpene Quinones from the South China Sea Sponge Dysidea avara, J. Nat. Prod. 2014, 77, 346?350）可确定其平面结构和相对构型。绝对构型通过ECD确证，ECD图见附图1。表2 1H NMR和13C NMR信号归属实施例2：细胞形态学观察和AO（吖啶橙）染色HeLa肿瘤细胞设不加药组（对照组）和加药组（5μM，处理组）。细胞经作用不同时间（0, 2, 4, 8, 12, 24小时）后经过4％多聚甲醛固定30min后，0.01M的PBS洗涤2-3次，AO染色10min，荧光显微镜下观察细胞核形态。发现阴性处理组的细胞形态正常，经过染色试剂染色后细胞核完整本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种倍半萜醌化合物，其化学结构式如下： 。
【技术特征摘要】
1.一种倍半萜醌化合物，其化学结构式如下：
。
2. 权利要求1 所述的化合物在制备抗肿瘤药物中的应...
【专利技术属性】
技术研发人员：周同永，周国泰，
申请(专利权)人：西宁意格知识产权咨询服务有限公司，
类型：发明
国别省市：青海;63
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