预防和/或治疗慢性病毒感染的产品及方法技术

本发明专利技术涉及病毒感染的预防和/或治疗领域,特别是对由慢性病毒感染引起的疾病，例如肝炎的预防和/或治疗。本发明专利技术涉及一种能够减少细胞外病毒抗原的试剂及其用途。本发明专利技术还涉及一种试剂盒和/或药物，其包含：a)一种或多种能够减少细胞外病毒抗原的试剂；b)针对所述病毒的疫苗；以及c)任选的使用说明书；优选地，在所述试剂盒和/或药物中，所述a)和b)各自被包含在单独的容器中且彼此不相混合。本发明专利技术还提供能够减少细胞外病毒抗原的试剂和针对所述病毒的疫苗联合用于制备试剂盒和/或药物的用途，其中所述试剂盒和/或药物用于预防和/或治疗受试者中慢性病毒感染引起的疾病，例如慢性乙型肝炎。

【技术实现步骤摘要】
预防和/或治疗慢性病毒感染的产品及方法
本专利技术属于病毒感染的预防和/或治疗领域,特别是对由慢性病毒感染引起的疾病(例如慢性肝炎，特别是慢性乙型肝炎)的治疗。
技术介绍
估计全球范围内有二十亿人被乙型肝炎病毒(HBV)感染，并且其中三亿五千万人患有慢性乙型肝炎病毒感染(CHB)。许多慢性乙型肝炎病例的特征在于：慢性活动性肝炎，以及大约四分之一的成年慢性乙型肝炎患者之后死于乙型肝炎病毒相关的肝硬化并发症，甚至是死于肝细胞癌[1,2]。尽管付诸了大量的努力来开发有效的抗病毒剂，未见有成功治疗慢性乙型肝炎的报道，特别是仍没有有效的治疗手段能够清除血清乙型肝炎病毒并产生保护性抗-HBsAg抗体。目前用于乙型肝炎病毒感染的临床疗法包括用核苷/核苷酸类似物或干扰素α(IFNα)进行治疗。二者均能够抑制乙型肝炎病毒复制和降低病毒抗原以及病毒基因组DNA的血清水平，但是它们都不能破坏乙型肝炎病毒诱导的耐受性，也不能诱导抗-HBsAg抗体的产生。因此，目前，治疗完成后的复发是无法避免的结果[3,4]。病毒特异性的获得性应答在慢性乙型肝炎患者中是弱的或者检测不到的[5,6]。持续存在的抗原可能引起病毒特异性T细胞的进行性耗竭以及与更高的病毒负荷相关的更严重的T细胞耗竭[7,8]。然而，诱导这种耐受性的此类病毒蛋白的性质仍不清楚。HBsAg的血清转化以及产生抗-HBsAg抗体是从慢性乙型肝炎中恢复的临床指征，并且被认为是治疗慢性乙型肝炎的金标准[9,10]。目前的抗-乙型肝炎病毒免疫疗法还不能在慢性乙型肝炎患者中诱导抗-HBsAg抗体的产生[11-14]。乙型肝炎免疫球蛋白(HBIG)被用于预防乙型肝炎病毒的围产期传布以及防止肝移植后乙型肝炎病毒感染的复发[15,16]。明矾吸附的HBsAg是被广泛使用的预防性疫苗，其在90％的未被感染的个体中诱导保护性抗-HBsAg抗体的产生，但是其在HBV携带者或者具有活动性肝炎的慢性乙型肝炎患者中完全没有治疗效果。
技术实现思路
如上文中所讨论的，目前被广泛使用的预防性乙肝疫苗对于已经感染了乙型肝炎病毒的患者完全没有治疗效果。然而，当前的专利技术人惊讶地发现，通过破除由持续的病毒感染诱导的耐受，能够将仅有预防效果的乙肝疫苗转化为治疗性疫苗。当前的专利技术人考虑到，长期存在的循环HBsAg可能诱导宿主免疫系统的耐受性，而使得所述宿主不再对HBsAg免疫接种产生免疫应答反应。因此，专利技术人设想清除细胞外长期存在HBsAg可能会改变所述耐受状态并且恢复宿主对于HBsAg疫苗的应答能力。为了开发出新的治疗策略来破除由持续的感染诱导的耐受，需要了解病毒诱导耐受的机制。而对于了解人类中病毒诱导耐受的机制而言，主要的障碍在于缺少适当的动物模型，这种适当的动物模型应当能够有效且准确地模拟持续的病原体感染和免疫耐受。之前，当前的专利技术人报道了通过在具有免疫能力的小鼠中进行AAV8/HBV1.3感染而建立的HBV-持续性表达模型，其显示出高水平的病毒血症和循环病毒抗原，正常的丙氨酸氨基转移酶(ALT)以及对临床上使用的预防性疫苗的耐受，这些特征均与人CHB患者相似[17]。乙型肝炎病毒相关抗原持续至少6个月而不在此模型中引起明显的肝损伤[17]。重要地，在此模型中，血清HBsAg能够持续处于高水平(>μg/ml的水平)，这与大多数HBV携带者相似。与慢性乙型肝炎患者类似，在此模型中发现了乙型肝炎病毒特异性免疫耐受性，并且甚至在重复进行免疫接种后仍未发现HBsAg血清转化或者抗-HBs抗体的产生。通过利用这一模型，当前的专利技术人研究了从宿主中清除细胞外HBsAg对于在免疫耐受性HBV携带者小鼠中重建抗病毒免疫性的影响。在本研究中，专利技术人开发出了简单但强效的组合治疗策略，其成功地破坏了病毒抗原诱导的耐受性并且将仅有预防效果的乙肝疫苗转化称为了治疗性疫苗，其中，专利技术人通过用抗体预处理经感染的宿主清除了循环抗原，从而恢复了免疫耐受宿主对于疫苗的保护性应答。在此项工作中，当前的专利技术人发现了免疫耐受状态与HBsAg的水平相关。从宿主中清除HBsAg将随时间逆转HBV诱导的耐受并且逐渐允许宿主对疫苗有应答。当前的专利技术人发现了在施用抗体以清除HBsAg4周之后，AAV/HBV携带者小鼠能够对疫苗有应答，特别令人惊讶的是，即使是对于常规的预防性疫苗也有应答。重要的是，这一新颖而简单的策略可被用于将预防性疫苗转变为治疗性疫苗，并且该策略也可能适用于其它的慢性感染或持续性感染。本申请中的结果表明，清除循环HBsAg数周将使得宿主响应于免疫接种，而具有不完全和/或瞬时病毒减少的小鼠不能响应于免疫接种，并且没有观察到耐受的逆转。与此观察结果一致的是，长时间使用抗病毒药物来抑制HBV复制能够恢复HBV特异性T细胞的体外反应性，但是没有逆转离体HBV特异性T细胞应答[19]。虽然人们对于通过创造无抗原环境来克服T细胞耐受的机制并不完全清楚，本申请的数据支持了下述观点：清除慢性感染宿主中的耐受原能够逆转由病毒诱导的耐受并且允许宿主对之前不反应的疫苗产生免疫应答反应。虽然现有的抗-HBV药物抑制病毒复制并且减少DNA负荷，但是它们不能有效地清除现存的细胞外HBsAg，而本专利技术中使用的中和性抗体联合常规预防性疫苗的治疗却能够实现有效地清除现存的细胞外HBsAg并且在受试者中产生抗-HBsAg抗体，从而成功地治疗慢性乙型肝炎。虽然人们进行了巨大的努力来开发抵抗慢性病毒(例如HBV)感染的治疗性疫苗，长久以来，临床的结果仍然是令人失望的。基于HBsAg的乙型肝炎DNA疫苗在患者中没能诱导产生持续的治疗效果，虽然其在免疫接种的过程中诱导了T细胞应答[20]。测试抗原-抗体复合疫苗的大型临床试验显示出，其增加了HBeAg血清转化的发生；然而，与其它的试验相似，没有患者出现保护性抗-HBsAg抗体应答[21]。在本研究中，当前的专利技术人设计了简单但实用的方案，其至少成功地实现了下列两个目标：1)中和抗体(NAb)处理有效地中和了循环抗原(例如HBsAg)，这在淋巴组织中提供了相对无抗原的窗口，其允许免疫细胞恢复其对疫苗响应的能力；2)一旦通过HBsAg耗竭逐渐降低了宿主的耐受程度，目前所使用的现有HBV疫苗(甚至完全无治疗效果的预防性HBV疫苗)在促进HBV携带者宿主产生免疫应答方面便是有效的。因此，用中和性抗体或通过其它减少细胞外抗原的方式(例如抗病毒治疗)对经慢性感染的宿主进行延长的治疗将是关键性的第一步，其后继以适当的免疫接种作为重要的第二步来诱导保护性免疫应答，激活自身的免疫力进行持续的病毒控制。因此，适当的组合治疗将最终清除持续性的病毒感染。可选地，为了进一步提高所述组合治疗方案的效率和针对性，在进行治疗前，可首先通过向来自受试者的样品(例如血液样品)施用一种或多种针对不同血清亚型的检测抗体来快速诊断所述受试者体内病毒所属的血清亚型(例如，本专利技术的抗体H可用于诊断ayw和adr亚型)。特别地，所述血清亚型包括但不限于，例如adr、adw、ayr或ayw亚型。因此，在一个方面，本专利技术提供了一种能够减少细胞外病毒抗原的试剂，优选地，其为所述病毒抗原的中和性抗体。在一个具体的实施方式中，所述中和性抗体为乙肝表面抗原的中和抗体。在本专利技术的优选实施方本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种试剂盒和/或药物，其包含:a)一种或多种能够减少细胞外病毒抗原的试剂；b)针对所述病毒的疫苗；以及c)任选的使用说明书；优选地，在所述试剂盒和/或药物中，所述a)和b)各自被包含在单独的容器中且彼此不相混合。

【技术特征摘要】
1.一种试剂盒和/或药物，其包含:a)一种或多种能够减少细胞外病毒抗原的试剂；b)针对所述病毒的疫苗；以及c)任选的使用说明书；其中，在所述试剂盒和/或药物中，所述a)和b)各自被包含在单独的容器中且彼此不相混合；其中，所述病毒抗原为乙肝表面抗原；所述能够减少细胞外病毒抗原的试剂为中和抗体；所述疫苗为预防性乙肝疫苗。2.根据权利要求1所述的试剂盒和/或药物，其还包含：d)一种或多种针对不同血清亚型的检测抗体，其用于快速诊断受试者体内病毒所属的血清亚型。3.根据权利要求2所述的试剂盒和/或药物，其中，在所述试剂盒和/或药物中，所述a)、b)和d)各自被包含在单独的容器中且彼此不相混合。4.能够减少细胞外病毒抗原的试剂和针对所述病毒的疫苗联合用于制备试剂盒和/或药物的用途，其中所述试剂盒和/或药物用于预防和/或治疗受试者中慢性病毒感染引起的疾病，其中，所述疾病为慢性乙型肝炎；其中，所述病毒抗原是乙肝表面抗原；所述能够减少细胞外病毒抗原的试剂为中和抗体；所述疫苗为预防性乙肝疫苗；在所述试剂盒和/或药物中，所述能够减少细胞外病毒抗原的试剂和针对所述病毒的疫苗各自被包含在单独的容器中且彼此不相混合。5.根据权利要求4所述的用途，其中，所述试剂盒和/或药物在所述受试者中降低耐受性并在免疫接种后产生保护性应答。6.根据权利要求4所述的用途，其中，所述试剂盒和/或药物在所述受试者中重建所述受试者对于乙型肝炎病毒表面抗原的免疫性。7.根据权利要求1至3中任一项所述的试剂盒和/或药物、或者权利要求4至6中任一项所述的用途，其中，所述乙肝表面抗原选自乙肝表面抗原adr、adw、ayr和ayw亚型。8.根据权利要求1至3中任一项所述的试剂盒和/或药物或者权利要求4至6中任一项所述的用途，其中，所述中和抗体选自如下的(1)－(4)中的任意一种：(1)中和抗体，其重链可变区的CDR1－CDR3的氨基酸序列分别如SEQIDNO:1、SEQIDNO:2和SEQIDNO:3所示；其轻链可变区的CDR1－CDR3的氨基酸序列分别如SEQIDNO:4、SEQIDNO:5和SEQIDNO:6所示；(2)中和抗体，其重链可变区的CDR1－CDR3的氨基酸序列分别如SEQIDNO:1、SEQIDNO:2和SEQIDNO:9所示；其轻链可变区的CDR1－CDR3的氨基酸序列分别如SEQIDNO:4、SEQIDNO:5和SEQIDNO:10所示；(3)中和抗体，其重链可变区的CDR1－CDR3的氨基酸序列分别如SEQIDNO:1、SEQIDNO:2和SEQIDNO:11所示；其轻链可变区的CDR1－CDR3的氨基酸序列分别如SEQIDNO:4、SEQIDNO:5和SEQIDNO:6所示；(4)中和抗体，其重链可变区的CDR1－CDR3的氨基酸序列分别如SEQIDNO:1、SEQIDNO:2和SEQIDNO:3所示；其轻链可变区的CDR1－CDR3的氨基酸序列分别如SEQIDNO:4、SEQIDNO:12和SEQIDNO:6所示。9.根据权利要求1至3中任一项所述的试剂盒和/或药物或者权利要求4至6中任一项所述的用途，其中所述试剂盒和/或药物中包含针对不同血清亚型的检测抗体，并且根据所述检测抗体的检测结果来确定需使用的中和抗体。10.根据权利要求1至3中任一项所述的试剂盒和/或药物、或者权利要求4至6中任一项所述的用途，其中所述试剂盒和/或药物中所包含的能够减少细胞外病毒抗原的试剂的量足以在1天，2天，3...

【专利技术属性】
技术研发人员：傅阳心，
申请(专利权)人：苏州丁孚靶点生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32