检测轻度认知障碍患者血清/血浆微小RNA标志物及其应用制造技术

本发明专利技术属于生物技术和神经认知领域，涉及检测轻度认知障碍患者血清/血浆微小RNA标志物及其应用，所述标志物为：miR-206和miRNA-132的任意一种或者两者组合，所述标志物应用于诊断轻度认知障碍患者，并且所述标志物应用于制备诊断轻度认知障碍患者的试剂盒，所述的应用采用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)的方法检测被测试者的血清/血浆miR-206和/或miRNA-132的含量，并与认知正常者相比较来诊断轻度认知障碍。本次发明专利技术筛选出的miRNA标志物具有认知损伤特异性，诊断轻度认知障碍操作简单，灵敏度高，适用于大规模筛查。

【技术实现步骤摘要】
检测轻度认知障碍患者血清/血浆微小RNA标志物及其应用
本专利技术涉及血清/血浆微小RNA(microRNA，简称miRNA)的应用，具体涉及检测轻度认知障碍患者血清/血浆微小RNA标志物及其应用，属生物技术和神经认知

技术介绍
阿尔茨海默病(Alzheimer’sdisease，AD)是一种严重威胁人类健康的神经退行性疾病。轻度认知障碍(Mildcognitiveimpairment，MCI)是介于阿尔茨海默病与正常老龄化之间的一种过渡状态。研究提示有23％的轻度认知障碍患者在2年内，50％患者在4年内进展为阿尔茨海默病，故轻度认知障碍被认为是阿尔茨海默病早期干预治疗的最适阶段。随着全球人口的老龄化，轻度认知障碍患病率逐年增加，给社会带来沉重负担。因此，如何在疾病的早期甚至体检中发现轻度认知障碍患者，及早治疗是防治这些疾病的关键问题。目前有关轻度认知障碍检测方法包括:应用神经心理学测试(对综合认知功能进行评估)、神经影像学(结构和功能)、脑脊液生物学标志等,单独或者相互结合进行研究,可能有助于诊断轻度认知障碍，但这些方法在诊断上都有一定的缺陷。神经心理学测试收到测试者和受试者主观因素的影响以，测试结果往往有较大的不确定性和局限性。由于轻度认知障碍是阿尔茨海默病的临床前阶段，在神经影像学检查中可能并未发现结构和功能的改变或者人为经验不足等都会导致误诊或漏诊。尽管已经发现一些脑脊液标志物(如Aβ1-42、T-tau、P-tau等)(Alexopoulosetal.,2013)，但由于脑脊液标本采集有一定的创伤性,因此,临床应用中必须要严格掌握其适应证和禁忌证，此外，脑脊液检查对轻度认知障碍诊断的敏感性和特异性均有限。因此，寻找新的特异性高和敏感性好的轻度认知障碍标志物越来越受到国内外的重视。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题在于提供检测轻度认知障碍患者血清/血浆微小RNA标志物及其应用。本专利技术的目的在于检测轻度认知障碍患者血清/血浆miRNA标志物，为临床上轻度认知障碍患者的早期发现、早期治疗及干预提供支持。为解决上述技术问题本专利技术的技术方案为：检测轻度认知障碍患者血清/血浆微小RNA的标志物，其特征在于，所述标志物为miR-206和miRNA-132的任意一种或者两者组合，所述miR-206序列为SEQIDNO:1所示，所述miR-132序列为SEQIDNO:2所示，其中，SEQIDNO:1UGGAAUGUAAGGAAGUGUGUGGSEQIDNO:2UAACAGUCUACAGCCAUGGUCG所述标志物应用于诊断轻度认知障碍患者。所述标志物应用于制备诊断轻度认知障碍患者的试剂盒。所述试剂盒中含有SEQIDNO:3所示的miR-206的RT引物、SEQIDNO:4所示的miR-206的F端引物、SEQIDNO:5所示的miR-132的RT引物、SEQIDNO:6所示的miR-132的F端引物，其中各端引物序列如下：SEQIDNO:3GTCGTATCCAGTGCAGGGTCCGAGGTATTCGCACTGGATACGACCCACACSEQIDNO:4TGGAATGTAAGGAAGTGTGTGGSEQIDNO:5GTCGTATCCAGTGCAGGGTCCGAGGTATTCGCACTGGATACGACCGACCASEQIDNO:6TAACAGTCTACAGCCATGGTCG所述的检测轻度认知障碍患者血清/血浆微小RNA标志物的应用，通过检测被试者的血清/血浆miR-206和/或miRNA-132的含量，并与认知正常者的含量相比来诊断轻度认知障碍，所述miR-206的诊断临界值lg(2-△Ct)为-1.15，所述miRNA-132的诊断临界值lg(2-△Ct)为-2.05，miR-206和miRNA-132的联合诊断的诊断临界值lg(2-△Ct)为1.52。所述的检测轻度认知障碍患者血清/血浆微小RNA标志物的应用，采用实时定量PCR的方法检测被测试者的血清/血浆miR-206和/或miRNA-132含量。MicroRNAs(miRNAs)为非编码小RNA，长度为19-24bp。成熟的miRNAs主要通过识别靶mRNA的3′-UTR并与之结合，抑制靶mRNA的翻译或导致靶mRNA降解从而发挥基因转录后调节功能。miRNAs调控细胞生长、发育、分化及凋亡的各个环节,并与生理状态的改变以及疾病的发生、发展密切相关。近年来,miRNA已成为分子生物学、遗传学和临床医学等领域的研究热点。miRNAs是小分子，易于通过血脑屏障，比脑脊液、脑组织中检测更具有可行性，所以异常表达的miRNAs可以作为诊断学指标。研究发现，血清/血浆miRNA非常稳定，反复冻融、不同酸碱环境、高温、长期保存等条件下，血清/血浆miRNA含量变化不大，而此时大多数RNA都会降解。这就为血清miRNA作为生物标志物进行检测提供了可能。血清/血浆miRNA检测灵敏度高、创伤性小、可重复性好、费用低、操作简单，联合检测特定miRNA表达谱的改变将有助于多种疾病的早期诊断，也利于连续动态检测和人群的大规模筛查。本专利技术与现有技术相比显著的优点是：本次专利技术首次将AD模型鼠(SAMP8)海马组织miRNA芯片表达谱与血清/血浆miRNA的表达联合运用，以此筛选出的miRNA标志物更具有认知损伤特异性，诊断轻度认知障碍操作简单，灵敏度高，适用于大规模筛查。附图说明图1是miR-206在66例轻度认知障碍患者和76例认知正常者血清/血浆中的表达水平；图2是miR-132在66例轻度认知障碍患者和76例认知正常者血清/血浆中的表达水平；图3是miR-193b在66例轻度认知障碍患者和76例认知正常者血清/血浆中的表达水平；图4是miR-130b在66例轻度认知障碍患者和76例认知正常者血清/血浆中的表达水平；图5是miR-20a在66例轻度认知障碍患者和76例认知正常者血清/血浆中的表达水平；图6是miR-296在66例轻度认知障碍患者和76例认知正常者血清/血浆中的表达水平；图7是miR-329在66例轻度认知障碍患者和76例认知正常者血清/血浆中的表达水平；图8是miR-206、miR-132以及miR-206和miR-132结合对轻度认知障碍的诊断价值；图9是miR-206水平与轻度认知障碍患者认知功能的相关性分析；图10是miR-132水平与轻度认知障碍患者认知功能的相关性分析。。具体实施方式以下通过实施例对本专利技术作进一步的阐述。本实施例在以本专利技术技术方案为前提下进行实施，给出了详细的实施方式和过程，但本专利技术的包含范围不限于下述的实施例。下面的实施例中未注明的条件和方法等均按照常规或者制造商采用的条件进行。本专利技术的技术方案为：检测轻度认知障碍患者血清/血浆微小RNA的标志物，其特征在于，所述标志物为miR-206和miRNA-132的任意一种或者两者组合，所述miR-206序列为SEQIDNO:1所示，所述miR-132序列为SEQIDNO:2所示，其中，SEQIDNO:1UGGAAUGUAAGGAAGUGUGUGGSEQIDNO:2UAACAGUCUACAGCCAUGGUCG所述标志物应用于诊断轻度认知障碍患者。所述标志物应用于制备本文档来自技高网...

【技术保护点】
检测轻度认知障碍患者血清/血浆微小RNA的标志物，其特征在于，所述标志物为miR‑206和miRNA‑132的任意一种或者两者组合，所述miR‑206序列为SEQ ID NO:1所示，所述miR‑132序列为SEQ ID NO:2所示，其中，SEQ ID NO:1UGGAAUGUAAGGAAGUGUGUGGSEQ ID NO:2UAACAGUCUACAGCCAUGGUCG

【技术特征摘要】
1.检测轻度认知障碍患者血清/血浆微小RNA的标志物，其特征在于，所述标志物为miR-206和miRNA-132的两者组合；所述miR-206序列为SEQIDNO:1所示，所述miR-132序列为SEQIDNO:2所示，其中，SEQIDNO:1UGGAAUGUAAGGAAGUGUGUGGSEQIDNO:2UAACAGUCUACAGCCAUGGUCG。2.如权利要求1所述的检测轻度认知障碍患者血清/血浆微小RNA标志物的应用，其特征在于，所述标志物应用于制备诊断轻度认知障碍患者的试剂盒。3.如权利要求2所述的检测轻度认知障碍患者血清/血浆微小RNA标志物的应用，其特征在于，所述试剂盒...

【专利技术属性】
技术研发人员：许顺江，谢冰，王学义，张庆富，闫宝勇，
申请(专利权)人：河北医科大学第一医院，
类型：发明
国别省市：河北;13