一株根结线虫生防细菌、生防菌剂及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一株根结线虫生防细菌、生防菌剂及其应用。该生防细菌为雷氏普罗威登斯菌(Providencia rettgeri)菌株UN06，保藏编号为CGMCC No.10246。本发明专利技术利用雷氏普罗威登斯菌UN06菌株发酵获得的发酵液与菌渣、草炭等吸附载体和菌体生长所需的营养物质尿素混合均匀后造粒制成UN06颗粒剂。每亩施用100公斤UN06颗粒剂对番茄根结线虫、黄瓜根结线虫、烟草根结线虫的防效在分别为90.17％、88.66％和85.98％。本发明专利技术的根结线虫病生防菌剂具有成本低、防效高、无残留、对人畜安全的特点，是防治根结线虫病的高效生物农药。

【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术公开了一株根结线虫生防细菌、生防菌剂及其应用。该生防细菌为雷氏普罗威登斯菌(Providencia rettgeri)菌株UN06，保藏编号为CGMCC No.10246。本专利技术利用雷氏普罗威登斯菌UN06菌株发酵获得的发酵液与菌渣、草炭等吸附载体和菌体生长所需的营养物质尿素混合均匀后造粒制成UN06颗粒剂。每亩施用100公斤UN06颗粒剂对番茄根结线虫、黄瓜根结线虫、烟草根结线虫的防效在分别为90.17％、88.66％和85.98％。本专利技术的根结线虫病生防菌剂具有成本低、防效高、无残留、对人畜安全的特点，是防治根结线虫病的高效生物农药。CGMCC No.1024620141226【专利说明】一株根结线虫生防细菌、生防菌剂及其应用
本专利技术涉及一株根结线虫生防细菌、生防菌剂及其在防治根结线虫病防治中的应 用，属于微生物农药
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技术介绍
作物病原线虫引起的病害已成为农业生产中的第二大类病害。全球每年因作物 病原线虫造成的直接经济损失高达1570亿美元（Abad P，Gouzy J，Aury JM. et al. 2008. Genome sequence of the metazoan plant-parasitic nematode Meloidogyne incognita. Nat. Biotechnol. 26(8) :909-15. doi :10. 1038/nbt. 1482.)，其中危害最重、造成损失最大 的是根结线虫，根结线虫可危害粮食、油料、蔬菜、烟草、水果等3000多种植物。根结线虫以 二龄幼虫侵染作物根系并诱导植物组织线虫根瘤，根瘤的形成阻碍了植物从土壤中吸收营 养和水分；此外，根结线虫的侵染造成伤口和降低植物抗性，有利于土壤中其它植物病原菌 的侵染，因此容易导致根结线虫病与其它植物病害的复合发生，造成更大的损失（Bird DM and Kaloshian I.2003.Are roots special? Nematodes have their say. Physiol. Mol. Plant Pathol. 62:115-123.)。 蔬菜是我国第一大经济作物和最大的出口创汇农产品。据不完全统计，2008年 全国设施蔬菜面积已达5020万亩，面积仍在不断增加。由于设施大棚高温、多年连茬等因 素，近年来大棚蔬菜根结线虫危害猖獗失控，给蔬菜生产带来严重损失。发病地块一般减产 20%以上，严重的达75%甚至绝收。据估算，我国蔬菜每年因根结线虫危害造成的损失超过 50亿元。 烟草是中国多个省份经济的重要支柱产业，2012年全国烟草种植面积2118万亩。 目前，除东北外，烟草根结线虫在全国各主要产烟区都有发生，在云、贵、川等西南省份的山 地烟区法宝尤为严重，一般发病田减产3?4成，重病田减产6?7成。 长期以来，对作物病原线虫的防治主要依靠化学农药，但由于化学杀线虫剂高毒 性，造成农产品和生态污染问题非常突出。根据保护臭氧层的"蒙特利尔议定书"国际条约， 发达国家已于2005年全面禁用使用最广泛的化学杀线虫剂溴甲烷，发展中国家将于2015 年全面禁用(Ristaino J, Thomas W. 1998. Agriculture, methyl bromide and the ozone hole:can we fill the gap Plant Dis. 81:964-997·)。目前，灭线磷、溴甲烧、涕灭威等化 学杀线虫剂在国内几乎都被禁用或限制使用。由此导致可选用的化学杀线虫剂种类更少， 加剧了线虫防治的困难。 生物农药具有安全、有效、无污染等特点，利用生防微生物研发生物农药具有 广阔的发展前景。目前国内外有不少防治线虫的生物农药品种问世，并且有些生物农 药已经在局部地区使用。根结线虫和孢囊线虫侵染作物根部，由作物根际、病原线虫、 土著微生物及其环境因子构成的复杂生态系统直接影响到生防微生物的根际定殖和防 效。因土壤抑菌作用（fungistasis of soil)导致的防效不稳定已严重制约了病原 线虫生物农药的产业化推广。如何克服土壤抑菌作用对生防制剂田间萌发、定殖生态 的影响，是线虫生防乃至整个植物病虫害生物防治领域亟待解决的关键科学问题。雷 氏普罗威登斯菌（Providencia rettgeri)是一种具有异氧脱氮性能的细菌，在生物 除氮和解决水体富营养化方面有应用前景（Taylor SM，He YL，Zhao B，Huang J. 2009. Heterotrophic ammonium removal characteristics of an aerobic heterotrophic nitrifying-denitrifying bacterium,Providencia rettgeri YL.Journal of Environmental Sciences，21:1336-1341.) D该微生物杀线虫方面的特性未见报道D
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一株对根结线虫病有高效杀灭活性的生防细菌一雷氏普 罗威登斯菌（Providencia rettgeri)菌株UN06。温室试验和田间试验的结果表明：该生 防细菌对根结线虫病有很好的防治效果，具备研发成根结线虫病生物农药并产业化推广应 用的前景。 本专利技术具体是这样实现的：本专利技术人从山东寿光大棚番茄健康植株的茎部分离到 一株根结线虫生防细菌一雷氏普罗威登斯菌（Providencia rettgeri)菌株UN06。该菌 株已于2014年12月26日保存于中国微生物菌种保藏委员会普通微生物中心，保藏编号： CGMCC No. 10246。该菌株具有以下生物学特性：在AMS培养基平板上，菌落乳白色，直径 2mm、半透明、圆形、光滑。菌体杆状，大小为0. 5 μ mXO. 8-1. 5 μ m，最适生长温度为28°C，最 适生长pH值为7。 雷氏普罗威登斯菌（Providencia rettgeri)菌株UN06的培养方法或繁殖方法 为： (1)普通培养保存采用牛肉膏蛋白胨固体培养基，配方为：牛肉膏5g，蛋白胨10g， NaCl 5g，琼脂 20g，水 lOOOmL，pH 7. 2-7. 4 ; (2)实验室液体培养采用牛肉膏蛋白胨液体培养基，配方为：牛肉膏5g，蛋白胨 10g，NaCl 5g，水 lOOOmL，pH 7. 2-7. 4 ; (3)大量发酵采用SRC培养基，配方为：蔗糖12. 5g，大米粉50g，蟹壳粉37. 5g， NaCl 2. 5g，MgSO4L 25g，ΚΗ2Ρ042· 5g，加水定容到 1000ml，pH 6. 5。 本专利技术还提供了一种包括上述雷氏普罗威登斯菌（Providencia rettgeri)菌株 UN06的生防菌剂。 上述生防菌剂的制备方法，具体包括以下步骤： (1)斜面种子培养：将雷氏普罗威登斯菌（Providencia rettgeri)菌株UN06的 菌体移到牛肉膏蛋白胨固体培养基斜面上，15-40?下培养1-5天后获得斜面种子； (2本文档来自技高网...

【技术保护点】
一株根结线虫生防细菌，它为雷氏普罗威登斯菌(Providencia rettgeri)菌株UN06，该菌株的保藏编号为CGMCC No.10246。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：周峰，莫明和，潘克静，
申请(专利权)人：山东泰宝生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：山东;37