OspA的突变片段以及其相关方法和用途技术

本发明专利技术涉及一种包含外表面蛋白A(OspA)的突变片段的多肽、一种编码所述多肽的核酸、一种包含所述多肽和/或所述核酸的药物组合物(具体地在治疗或预防疏螺旋体感染的方法中用作药剂)、一种治疗或预防疏螺旋体感染的方法以及一种免疫受试者的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】OspA的突变片段以及其相关方法和用途专利
本专利技术涉及用于预防和治疗疏螺旋体(Borrelia)感染的组合物和方法。具体地说，本专利技术涉及一种包含外表面蛋白A(OspA)的突变片段的多肽、一种编码所述多肽的核酸、一种包含所述多肽和/或所述核酸的药物组合物(具体地适于在治疗或预防疏螺旋体感染的方法中用作药剂)、一种治疗或预防疏螺旋体感染的方法以及一种免疫受试者的方法。专利技术背景在欧洲和北美，莱姆疏螺旋体病或莱姆病是最常报道的蜱传疾病。所述疾病是由虫媒传播的革兰氏阴性样螺旋体广义伯氏疏螺旋体(B.burgdorferis.l.)引起，并且是可涉及多种器官或组织，导致皮肤、心脏、肌肉骨骼和神经学病症的感染。在大多数国家，莱姆疏螺旋体病不是应具报疾病并且没有关于年发病率的准确数据可用。在美国，致病物为狭义伯氏疏螺旋体(B.burgdorferis.s)并且莱姆疏螺旋体病定位于东北部、大西洋中部和中北上部各州。在2010年，美国疾病控制与预防中心(CDC)报道了总计约30,000例莱姆疏螺旋体病。在欧洲，阿氏疏螺旋体(B.afzelii)和伽氏疏螺旋体(B.garinii)为莱姆疏螺旋体病的主要致病物，而且狭义伯氏疏螺旋体和巴伐利亚疏螺旋体(B.bavariensis)根据地理位置在较低程度上促成莱姆疏螺旋体病。莱姆疏螺旋体病的患病率在不同欧洲国家变化相当大，并且从西到东患病率总体逐渐增加。在多数欧洲国家，报道的莱姆疏螺旋体病病例数目自20世纪90年代早期开始逐渐增加(例如，捷克共和国、爱沙尼亚、立陶宛；参见LymeborreliosisinEurope，2006年WHO报道)，并且病例的地理分布也有所扩大。疏螺旋体属于螺旋体科家族，所述螺旋体科家族细分为医学上重要的密螺旋体(Treponema)属、钩端螺旋体(Leptospira)属和疏螺旋体属。广义伯氏疏螺旋体为约10-20μm长和0.2-0.5μm宽的螺旋状、运动活泼的革兰氏阴性菌，它在微量需氧的条件下生长。螺旋体细胞壁由细胞质膜组成，所述细胞质膜由肽聚糖和若干鞭毛围绕并且接着由松散结合的外膜围绕。莱姆疏螺旋体病通常分阶段地发生，各阶段的特征为出现缓解和恶化的不同临床表现。阶段1，早期感染，由皮肤的局部感染组成；数天或数周后为阶段2，播散性感染；数月至数年后为阶段3，持续性感染。然而，感染为可变的；一些患者仅患有皮肤的局部感染，而其他患者仅显示疾病后期表现，如关节炎。莱姆疏螺旋体病的不同临床症状也是由不同的广义伯氏疏螺旋物种感染引起。狭义伯氏疏螺旋体更经常地引起关节表现(关节炎)和心脏问题，阿氏疏螺旋体主要引起皮肤症状(游走性红斑EM和慢性萎缩性肢皮炎ACA)，而伽氏疏螺旋体牵涉大部分莱姆神经疏螺旋体病病例。局部感染-感染的阶段1的最常见症状为游走性红斑，这出现于70％-80％的受感染人群中。这种皮肤损害之后通常为流感样症状，如肌痛、关节痛、头疼和发热。这些非特异性症状出现于50％的患有游走性红斑的患者中。播散性感染-在阶段2期间，细菌从感染部位移动到血流中，到达远端组织和器官。在此阶段出现的神经学、心血管和关节炎症状包括脑膜炎、颅神经病变和间歇性发炎性关节炎。持续性感染-感染的阶段3为慢性的并且发生于蜱叮咬之后数月至数年间。在北美最常见的症状为由狭义伯氏疏螺旋体感染所引起的风湿性关节炎。伽氏疏螺旋体引起的中枢神经系统的持续性感染在阶段3期间导致更严重的神经学症状，并且阿氏疏螺旋体引起的皮肤的持续性感染导致慢性萎缩性肢皮炎。在一些危险群体如农民、林业工人、徒步旅行者、跑步者或度假者中，如同在15岁以下的儿童和39岁与59岁之间的成人中一样，血清阳性率和疾病发病率增加，其中没有性别偏好。莱姆疏螺旋体病的这种增加的发病率与森林栖息地以及社会因素的改变有关。环境改变如森林片断化已导致啮齿动物捕食者如狐狸和猛禽类急剧减少，这进而导致老鼠数量增加，之后导致蜱数量增加。最近，不均衡的重新造林已增加鹿的数量并因此增加蜱的数量。郊区扩张和用于娱乐如露营和徒步旅行的林地区域使用的增加使人们与更大数目的疏螺旋体属蜱载体更深入地接触。所有这些因素共同导致疏螺旋体的更广泛分布和莱姆疏螺旋体病的更高发病率。抗微生物剂为治疗疏螺旋体感染的基本方法。所使用的抗生素取决于疾病的阶段、症状和患者对药物的过敏性。抗生素疗程的长度也取决于疾病的阶段和症状的严重性。早期莱姆疏螺旋体病通常用口服四环素如多西环素和半合成青霉素如阿莫西林或青霉素V来治疗。关节炎和神经学病症用高剂量静脉内青霉素G或头孢曲松治疗。高至30％的莱姆疏螺旋体病患者不展示疏螺旋体感染的早期特征症状，这使得诊断和治疗均成问题。抗生素疗程可为较长的(长至数月)并且有时为无效的，并且因此在疏螺旋体领域，特别是在晚期疾病期间很有争议。即使在有效治疗疏螺旋体的情况下，患者也可在数年过后患有衰弱疲劳、疼痛或神经症状，这些称为治疗后莱姆病症状。通常，抗生素的使用可产生不希望的后果，如靶微生物发展出抗性。最终，抗生素疗法可有效地治愈莱姆疏螺旋体病，但没有对之后的感染提供保护。单价血清型1-OspA-基疫苗(LYMErixTM)在美国得到批准并且在市场上销售，用于预防由狭义伯氏疏螺旋体引起的莱姆病。然而，在欧洲和其它地方的不同血清型中的OspA序列的异质性妨碍了利用来自仅一种血清型的基于OspA的疫苗进行有效保护。包含来自一种OspA血清型的近端部分连同来自另一种OspA血清型的远端部分的嵌合OspA分子在保留这两种亲本多肽的抗原特征的同时，可用于预防和治疗莱姆病或莱姆疏螺旋体病(WO2011/143617，WO2011/143623)。目前，在市场上没有用于莱姆疏螺旋体病的预防性药剂，并且因此在本领域中需要开发可提供针对存在于美国、欧洲和其它地方的疏螺旋体的有效保护的这种药剂，特别是需要开发可提供同时针对若干种疏螺旋体血清型的有效保护的药剂。专利技术概述本专利技术涉及一种包含疏螺旋体外表面蛋白A(OspA)的突变片段的多肽、一种编码所述多肽的核酸、一种包含此类核酸分子的载体以及一种包含此类载体的宿主细胞。此外，本专利技术提供一种用于产生此类多肽的方法和一种用于产生表达此类多肽的细胞的方法。另外，本专利技术提供特异性结合此类多肽的抗体；产生此类抗体的杂交瘤细胞；用于产生此类抗体的方法；包含此类多肽、核酸分子、载体或抗体的药物组合物；此类多肽、核酸分子、载体或抗体用于制备药剂或药物组合物(具体地用作疫苗或用于治疗或预防疏螺旋体感染的方法)的用途；用于诊断感染的方法和用于治疗或预防疏螺旋体感染的方法以及免疫受试者的方法。开发用于预防莱姆疏螺旋体病的亚单位疫苗的努力大部分集中于使用疏螺旋体外表面蛋白A(OspA)作为抗原。OspA蛋白仅在处于蜱载体肠内时由疏螺旋体表达。因此，通过疫苗接种产生的OspA抗体在体内不会对抗感染，而是在蜱摄食血液时进入其肠内。在肠内，抗体中和螺旋体并且阻断细菌从蜱的中肠迁移到唾液腺，即阻断疏螺旋体进入脊椎动物宿主所通过的路线。因此，OspA-特异性抗体防止疏螺旋体从蜱载体传递到人宿主中。来自狭义伯氏疏螺旋体菌株ZS7的脂化形式的OspA与氢氧化铝一起由SmithKlineBeecham(现在为GlaxoSmithKline本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种包含外表面蛋白A(OspA)的突变片段的多肽，其中所述突变OspA片段a)由疏螺旋体的OspA蛋白的C‑末端结构域组成；并且b)与对应野生型OspA片段序列的不同之处至少在于至少一个二硫键的引入。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2012.07.06 US 61/668,627;2013.03.14 US 13/802,9911.多肽，其由脂化的氨基酸序列SEQIDNO:186所组成。2.一种编码根据权利要求1所述的多肽的核酸。3.一种包含根据权利要求2所述的核酸分子的载体。4.一种包含如权利要求2所述的核酸或如权利要求3所述的载体的宿主细胞。5.如权利要求4所述的宿主细胞，其中所述宿主细胞为大肠杆菌。6.一种用于产生表达如权利要求1所述的多肽的细胞的方法，其包括用如权利要求3所述的载体转化或转染适合的宿主细胞。7.一种用于产生根据权利要求1所述的多肽的方法，其包括表达根据权利要求2所述的核酸。8.一种用于产生根据权利要求1所述的多肽的方法，其特征在于以下步骤：a)将编码所述多肽的载体引入到宿主细胞中；b)使所述宿主细胞在允许所述多肽表达的条件下生长；c)使所述宿主细胞均质化；以及d)使所述宿主细胞均浆经受纯化步骤。9.一种药物组合物，其包含根据权利要求1所述的多肽和/或根据权利要求2所述的核酸。10.如权利要求9所述的药物组合物，其还包含具有SEQIDNO:190氨基酸序列的多肽。11.如权利要求9或10所述的药物组合物，其还包含药学上可接受的赋形剂。12.根据权利要求11所述的药物组合物，其中所述药学上可接受的赋形剂包括L-甲硫氨酸。13.根据权利要求9所述的药物组合物，其还包含来源于导致莱姆疏螺旋体病的疏螺旋体物种的至少一种另外的抗原。14.根据权利...

【专利技术属性】
技术研发人员：帕尔·科姆斯泰特，乌尔班·伦德贝格，安德烈亚斯·迈因克，马库斯·汉纳，沃尔夫冈·舒勒，本亚明·维策尔，克里斯托夫·赖尼施，布里吉特·格罗曼，罗伯特·施勒格尔，
申请(专利权)人：瓦尔尼瓦奥地利有限责任公司，
类型：发明
国别省市：奥地利;AT