鲢鱼DPP-IV抑制多肽及其应用制造技术

本发明专利技术涉及一种鲢鱼DPP-Ⅳ抑制多肽及其应用，所述鲢鱼抑制多肽为淡水鱼鲢鱼鱼肉蛋白经蛋白酶精细水解所得的天然产物，即鲢鱼蛋白酶解功能多肽。鲢鱼蛋白经胃蛋白酶、胰酶和中性蛋白酶三段式酶解后制备得到的DPP-Ⅳ抑制多肽不仅具有良好的DPP-Ⅳ抑制活性，抑制率高达51.59％(多肽浓度5mg/mL)，并且拥有良好的耐受胃肠消化稳定性。所述DPP-Ⅳ抑制多肽具有天然，安全，高效，成本低特点，是非常有前景的针对糖尿病预防或治疗的食品功能基料，可用于制备预防或辅助治疗受益于DPP-IV抑制的疾病的药物或功能食品。

【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术涉及一种鲢鱼DPP-Ⅳ抑制多肽及其应用，所述鲢鱼抑制多肽为淡水鱼鲢鱼鱼肉蛋白经蛋白酶精细水解所得的天然产物，即鲢鱼蛋白酶解功能多肽。鲢鱼蛋白经胃蛋白酶、胰酶和中性蛋白酶三段式酶解后制备得到的DPP-Ⅳ抑制多肽不仅具有良好的DPP-Ⅳ抑制活性，抑制率高达51.59％(多肽浓度5mg/mL)，并且拥有良好的耐受胃肠消化稳定性。所述DPP-Ⅳ抑制多肽具有天然，安全，高效，成本低特点，是非常有前景的针对糖尿病预防或治疗的食品功能基料，可用于制备预防或辅助治疗受益于DPP-IV抑制的疾病的药物或功能食品。【专利说明】鲢鱼DPP-IV抑制多肽及其应用
本专利技术涉及医药
，具体地说，涉及一种具有DPP- IV抑制活性的淡水鱼鲢 鱼多肽及其应用。
技术介绍
糖尿病（diabetes mellitus，DM)是目前世界范围内增长速度最快和发病率最为 广泛的疾病之一，已经成为仅次于肿瘤和心血管疾病的"第三号杀手〃。糖尿病作为由多种 遗传和环境因素相互作用而引起的一组慢性代谢异常综合症，是由于胰岛素相对或绝对缺 乏，以及周围靶组织不同程度对胰岛素抵抗引起的碳水化合物、蛋白质，脂肪代谢紊乱引发 的，它可导致失明、心脑血管疾病、肾功能衰竭、神经病变、肢体坏疽以致截肢、昏迷等多种 并发症的发生,严重危害人类健康。其中2型糖尿病（T2DM)占患者总数的90-95%。 目前II型糖尿病的治疗以小分子口服药为主，磺脲类、格列奈类、双胍类、噻唑烷 二酮类和α-糖苷酶抑制剂是常用的II型糖尿病治疗药物，但随着时间的推移它们的疗效 逐渐降低，并且存在着较多的不良反应。目前，基于肠促胰素的治疗包括胰升血糖素样肽 1(GLP-1，glucagon-like ρ印tide-Ι)类似物及二肽基肽酶IV(DPP-IV)抑制剂成为糖尿病 新药研究的热点。而相对于GLP-I类似物，DPP-IV抑制剂具有可口服使用，更少的胃肠道 不良反应及更好的耐受性，及其它可能的更多益处。 自从2006年8月默克公司研制的DPP- IV抑制剂西他列汀在墨西哥上市后，国外 越来越多的人致力于化学合成的DPP-IV抑制剂，目前有很多已进入待批和ΙΙ、ΠΙ期临床阶 段。这些化学合成药物虽然在临床前和临床实验中并未表现出严重的副作用，只是出现一 些诸如恶心、瘙痒和鼻咽炎等的不良反应，但因为DPP-IV本身也担负着许多生理学功能， 比如和⑶45 -起发挥共刺激作用可促进T细胞激活、增殖，也可以使一些趋化因子、神经肽 和小肽类激素失活等，长期服用是否会产生副作用的争议一直都存在。因此，如果能从天然 药物或天然食物中获得具有DPP-IV抑制活性的功能物质，将对人类健康产生重大的影响。 近两年来从食物来源中寻找具有DPP- IV抑制活性的小分子活性肽已成为研究热 点。DPP- IV抑制活性肽指的是一类具有抑制DPP- IV活性的、相对分子量较小的多肽物质， 这些多肽的氨基酸序列和肽链长度各不相同，但都具有类似的功能。目前发现从食物蛋白 经酶解或发酵产生的DPP- IV活性肽，一般链长含2-14个氨基酸残基。分子量低于lOOODa， 并且认为，肽N末端氨基酸为Pro, Phe，Tyr或序列中含有疏水氨基酸的肽段具有较高的 DPP- IV抑制活性。 在我国，鲢鱼属大宗淡水养殖鱼类，因其肉薄、刺多，泥土味与鱼腥味不易去除，使 得销售价格很低。作为一种高产、低值的淡水鱼，具有较高的开发价值。另外，目前以鲢鱼 为原料加工的产品主要以初级加工产品为主，主要包括鱼糜、软罐头、风味鱼干、肉肠、鱼糕 等，存在加工产品品种少，规模小，附加值低等问题。近些年来国内外已有一些采用酶解的 方法对鱼蛋白进行深加工利用的研究报道。鱼蛋白被酶解后为肽段及氨基酸，具有相比全 蛋白更高的生物活性，利用蛋白酶解制备鱼生物活性肽，是提高其附加值的有效途径之一。 因此，通过对鲢鱼发展精深加工，实现鲢鱼加工增值，使淡水鱼加工向加工多样化 和高附加值方向发展，成为鲢鱼加工利用的一个重要研究方向，为促进淡水养殖业的发展 具有积极的作用。 目前关于采用蛋白酶酶解食源性蛋白制备活性肽的研究很多，以鲢鱼为原料开发 功能肽的研究也有所报道，如：尤娟等在"酶法制备鲢鱼蛋白抗氧化肽研究"（见《渔业现代 化》，2010年第37卷第3期，42-47)提供了 5种蛋白酶水解鲢鱼鱼肉蛋白制备抗氧化肽的 研究结果。 但目前以鲢鱼为原料经酶解反应制备DPP-IV抑制活性肽未见相关研究。
技术实现思路
为了解决现有技术中存在的问题，本专利技术的目的是提供具有耐胃肠消化能力的淡 水鱼鲢鱼DPP- IV抑制活性多肽及其应用。 为了实现本专利技术目的，本专利技术首先提供了具有DPP-IV抑制活性且耐胃肠消化的 鲢鱼多肽。 本专利技术提供的一种具有DPP- IV抑制活性的鲢鱼多肽，其由以下方法制备：鲢鱼鱼 肉蛋白经胃蛋白酶、胰酶、中性蛋白酶三段式酶解后制得的酶解物，经脱盐，即得。 所述鲢鱼鱼肉蛋白由以下方法制备：以鲢鱼为原料，经去鳞、去内脏，洗净，选取鲢 鱼背部白肉，切成小块后用搅碎机搅成肉糜，再经灭除鱼肉内源性蛋白酶得到的。 优选地，所述鲢鱼鱼肉蛋白由以下方法制备：将鲢鱼杀死后，去鳞、去内脏，洗净后 进行采肉，选取鲢鱼背部白肉，切成小块后用搅碎机搅成肉糜，然后鲢鱼肉糜与去离子水混 合，调整蛋白质浓度为5%，将调整好蛋白质浓度的鱼肉浑浊液在95°C水浴锅内放置IOmin 灭酶，冷却后进行均质处理，即得鲢鱼鱼肉蛋白。 所述经胃蛋白酶、胰酶和中性蛋白酶三段式酶解具体包括以下步骤： 1)第一步酶解反应，胃蛋白酶：PH2.0、底物浓度5.0%、温度37°C、酶与底物比 1 %、水解时间为Ih ; 2)第二步酶解反应：将胃蛋白酶酶解物用下面的方法继续酶解胰酶：pH7. 5、温度 37°C、酶与底物比2%、水解时间为2h ; 3)第三步酶解反应：将胰酶酶解物用下面的方法继续酶解：中性蛋白酶：pH7. 5、 温度45 °C、酶与底物比3 %、水解时间为6h。 4)灭活除杂：将中性蛋白酶酶解后的水解液经沸水浴IOmin灭活中最终水解液中 的蛋白酶后，迅速冷却，酶解物离心，取上清。 上述方法中： 所述pH调节剂为盐酸、氢氧化钠或碳酸氢钠； 所述脱盐是指将三段式酶解得到的上清液以一定流速通过阳离子交换树脂进行 脱盐，浓缩获得多肽液、或进一步冷冻或喷雾干燥后得到多肽粉。 本专利技术还提供了一种制备上述淡水鱼鲢鱼多肽的方法，该方法包括以下步骤： 1)将鲢鱼杀死后，去鳞、去内脏，洗净后进行采肉，选取鲢鱼背部白肉，切成小块后 用搅碎机搅成肉糜，然后鲢鱼肉糜与去离子水混合，调整蛋白质浓度为5%，将调整好蛋白 质浓度的鱼肉浑池液在95°C水浴锅内放置IOmin灭酶,冷却后进行均质处理，即得鲢鱼鱼 肉蛋白。 2)第一步酶解反应，胃蛋白酶：pH2.0、底物浓度5.0%、温度37°C、酶与底物比 1 %、水解时间为Ih ; 3)第二步酶解反应：将胃蛋白酶酶解物用下面的方法继续酶解胰酶：pH7. 5、温度 37°C、酶与底物比2%、水解时间为2h ; 4本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种具有DPP‑Ⅳ抑制活性的淡水鱼鲢鱼多肽，其特征在于，其由以下方法制备：鲢鱼鱼肉蛋白经胃蛋白酶、胰酶和中性蛋白酶三段式酶解后制得的酶解物，经脱盐，即得。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：陈尚武，张颖，
申请(专利权)人：中国农业大学，
类型：发明
国别省市：北京;11