抗卡珀斯肉瘤疱疹病毒的疫苗药物靶点SIM制造技术

本发明专利技术属生物医学领域，涉及抗卡珀斯肉瘤疱疹病毒的疫苗药物靶点SIM，具体涉及一种抗珀斯肉瘤疱疹病毒的SIM多肽序列及其在制备疫苗中的用途。所述SIM结构域对卡珀斯肉瘤疱疹病毒的基因组稳定、持续遗传等维护潜伏期感染有重要作用；其可识别由SUMO-2修饰KAP1和Sin3A等多种转录因子的转录沉默复合物；其缺失可影响KSHV病毒基因组的稳定遗传和潜伏感染，以及提高微环境应激条件下KSHV病毒启动裂解生活周期和破坏宿主细胞的效率，可作为抗卡珀斯肉瘤疱疹病毒的治疗靶点。本发明专利技术还涉及所述多肽序列的出发表位的人工改造核苷酸序列、整个SIM亚功能结构域不同组装顺序相应核苷酸序列和其编码的蛋白质产物，以及在抗卡珀斯肉瘤疱疹病毒方面的治疗潜在用途。

【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术属生物医学领域，涉及抗卡珀斯肉瘤疱疹病毒的疫苗药物靶点SIM，具体涉及一种抗珀斯肉瘤疱疹病毒的SIM多肽序列及其在制备疫苗中的用途。所述SIM结构域对卡珀斯肉瘤疱疹病毒的基因组稳定、持续遗传等维护潜伏期感染有重要作用；其可识别由SUMO-2修饰KAP1和Sin3A等多种转录因子的转录沉默复合物；其缺失可影响KSHV病毒基因组的稳定遗传和潜伏感染，以及提高微环境应激条件下KSHV病毒启动裂解生活周期和破坏宿主细胞的效率，可作为抗卡珀斯肉瘤疱疹病毒的治疗靶点。本专利技术还涉及所述多肽序列的出发表位的人工改造核苷酸序列、整个SIM亚功能结构域不同组装顺序相应核苷酸序列和其编码的蛋白质产物，以及在抗卡珀斯肉瘤疱疹病毒方面的治疗潜在用途。【专利说明】抗卡珀斯肉瘤疱疹病毒的疫苗药物靶点SIM
本专利技术属生物医学
，涉及基因的开发与应用，具体涉及一种抗珀斯肉瘤疱疹病毒的SIM多肽序列作为疫苗和药物靶点的免疫治疗的用途。
技术介绍
现有技术公开了卡珀斯肉瘤疱疹病毒KSHV是多种人类恶性肿瘤的主要病原体，是最常见4种感染性肿瘤之一的主因。研究显示，KSHV感染与HIV相关艾滋病患者、器官移植免疫抑制患者和部分免疫低下老年人等肿瘤发病和致死率密切相关。鉴于HIV感染率上升和器官移植/自身免疫患者免疫治疗手段日渐广泛，干预KSHV致病途径已成为一种迫切需要的应对举措。全球范围内，在撒哈拉以南非洲国家流行地区KSHV检测到高达80%，而美国多达20%。据估计，约14%的艾滋病死亡由与KSHV相关的最常见卡珀斯肉瘤(4%)并发癌症引起。另据统计，全世界每年约6万例的原发性渗出性淋巴瘤(PEL)诊断中，艾滋病相关淋巴瘤约占3-4%。更重要的是，相关领域中，目前尚未建立针对KSHV引发恶性肿瘤的治疗方法或疫苗。研究显示，由于KSHV可利用少数几个病毒基因将病毒基因组附加到宿主的染色体和逃避宿主免疫监视系统建立长期潜伏感染，因此，一旦被感染，患者将终身携带病毒。 与其它疱疹病毒相似，KSHV病毒具有潜伏期和裂解期两个生活周期。在潜伏感染期，KSHV病毒仅有少量几个病毒基因表达，其中包括了潜伏相关核抗原LANA。已有研究证明LANA是负责维护KSHV病毒潜伏感染的关键蛋白。研究表明LANA是一个含1162个氨基酸的多功能病毒蛋白，其不仅与KSHV病毒基因组的稳定持续遗传和建立潜伏感染密切相关，而且与降解肿瘤抑制蛋白如P53和VHL等有直接作用。但是，迄今，尚未有针对KSHV病毒感染特性而设计的治疗性疫苗。因此，研发针对KSHV病毒潜伏感染的治疗性疫苗至关重要。
技术实现思路
本专利技术的目的是为克服现有技术的缺陷，提供抗卡珀斯肉瘤疱疹病毒的疫苗药物靶点SIM，具体涉及由与艾滋病相关的卡珀斯肉瘤疱疹病毒(KSHV)编码的含SUM0-2特异结合功能结构域(SIM, ^UMO-1nteracting Motif)的多肽序列。 本专利技术的进一步目的是，提供所述的抗珀斯肉瘤疱疹病毒的SIM多肽序列及其在制备免疫治疗疫苗和药物靶点中的用途。 本专利技术基于大量前期研究发现，潜伏相关核抗原LANA特有SIM功能结构域。该SIM结构域是KSHV病毒编码潜伏期相关核抗原LANA的一个功能结构域，对卡珀斯肉瘤疱疹病毒的基因组稳定、持续遗传等维护潜伏期感染起着重要作用。该多肽序列可以识别包括由SUM0-2修饰KAPl和Sin3A等多种转录因子的转录沉默复合物。 本专利技术经实验表明，上述多肽序列缺失可影响KSHV病毒基因组的稳定遗传和潜伏感染，SIM位点的封闭可促进卡珀斯肉瘤病毒启动裂解细胞生活周期和破坏宿主细胞的效率。 本专利技术进一步实验表明阻断潜伏感染不仅可阻止随后的感染，而且可减少肿瘤的进展，该SIM结构域可作为抗卡珀斯肉瘤疱疹病毒的候选治疗靶点。 本专利技术所述的与SUM0-2结合的功能结构域SM是LANA蛋白的一个关键位点，其包含编码SEQID No:1所示的61个氨基酸残基的全长多肽； I)该序列cDNA片段长为183bp,编码61个氨基酸,分子量为9kDa的蛋白； 2)含有4个SUM0-2结合的亚功能结构域，存在I个IYV，I个ISI和2个SSS。 本专利技术还涉及所述多肽序列的出发表位的人工改造核苷酸序列、整个SM亚功能结构域不同组装顺序相应核苷酸序列和其编码的蛋白质产物，以及所述基因和蛋白质在制备抗卡珀斯肉瘤疱疫病毒方面的治疗制剂中的用途。 如在实验中所证明的，本专利技术的SIM多肽蛋白能与大量的转录沉默子识别，该位点的缺失能有效地破坏LANA维护病毒基因组稳定遗传的能力。 此外，本专利技术SM位点缺失的LANA突变体丧失了阻遏裂解期调控蛋白RTA基因转录表达，并可在细胞内有效地裂解破坏肿瘤细胞。 本专利技术所述的SIM多肽疫苗药物靶点具有抗KSHV病毒潜伏感染的高特异性、有效性，以及所产生抗体或小分子药物对抗KSHV病毒感染具有很高的潜在抑制效率。 本专利技术所述的SIM多肽蛋白可作为抗原产生中和抗体以及作为结合靶点筛选获得的小分子化学药物，进一步制备用于预防和治疗KSHV病毒相关疾病的免疫制剂，如，抗卡珀斯肉瘤病毒潜伏期感染的疫苗。 为了便于理解，以下将通过具体的附图和实施例对本专利技术进行详细地描述。需要特别指出的是，具体实例和附图仅是为了说明，显然本领域的普通技术人员可以根据本文说明，在本专利技术的范围内对本专利技术做出各种各样的修正和改变，这些修正和改变也纳入本专利技术的范围内。 【专利附图】【附图说明】 : 图1示出卡珀斯肉瘤疱疹病毒编码LANA中含SIM位点的61个氨基酸多肽序列(即SEQ ID NO:1)及其蛋白编码所对应的183个碱基序列(即SEQ ID NO:2)。 图2示出含SM位点多肽的61个氨基酸序列(即SEQ ID NO:1)中两个大亚SIM(SIM1和SM2)及附近酸性氨基酸区段(AD)空间结构上的分布情况。 图3为与SIM结构域特异结合的细胞内转录因子复合物， 上图:SDS-PAGE检测原核表达蛋白GST和GST-SM结合293细胞中蛋白复合物的考马斯亮蓝染色结果；下图:上图中与SM结构域特异结合bl、b2、b3和b4蛋白的质谱测序结果。 图4为SM缺失降低LANA与KAPl和Sin3A蛋白结合能力， 其中，原核表达蛋白GST和GST融合野生型(WT)或SM缺失(ASM) LANA (下图为考马斯亮蓝染色结果)与KAPl、Sin3A或DNA-PKc结合能力(上图为免疫印迹结果)的差另1J。 图5为SIM缺失降低LANA介导TR稳定传代特性， 其中， A:染色体共沉淀检测SM位点和酸性区段AD缺失对LANA结合TR能力的影响；B:嘌呤酶素处理含不同LANA突变体和TR-Purc/的293细胞14天后的细胞菌落分析结果。 图6显示SIM缺失导致LANA对裂解期调节关键蛋白RTA基因转录抑制能力的丧失，荧光报告基因分析正常供氧和低氧条件下不同LANA突变体对Rta基因启动子转录能力的影响。 图7显示了 SM缺失突变体显性负效应激活KSHV病毒DNA复制， 其中，含SM缺失的不同LANA突变体对携带野生型KSHV病毒的293细胞的激活作用。 【具本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种抗卡珀斯肉瘤疱疹病毒的多肽序列，其特征在于，其氨基酸序列如SEQID No：1所示；1)该序列cDNA片段长为183bp，编码61个氨基酸，分子量为9kDa的蛋白；2)含有4个SUMO‑2结合的亚功能结构域，存在1个IYV，1个ISI和2个SSS。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：蔡启良，朱彩霞，蔡屾，
申请(专利权)人：复旦大学，
类型：发明
国别省市：上海;31