甜瓜聚合基因7198双重SSR-PCR体系的建立制造技术

本发明专利技术甜瓜聚合基因7198双重SSR-PCR体系的建立，属于生物技术育种领域，专用于甜瓜抗蔓枯病基因Gsb-1与Gsb-4的聚合育种。通过同时添加引物CMCT505和CMTA170a，并调整DNTPs、Buffer与模板DNA的浓度及退火温度等，设计各影响因素的正交试验，通过对双亲后代F1以及单一PCR体系扩增筛选到的聚合基因幼苗DNA进行鉴定，建立了可以同时扩增出189bp和121bp两个目的条带的双重SSR-PCR体系。该双重PCR体系具有节省时间、降低成本、提高效率的优点，特别是节省珍贵的实验材料。对甜瓜乃至整个蔬菜作物的聚合育种实践和理论研究具有重要的借鉴意义。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
甜瓜聚合基因7198双重SSR‑PCR体系的建立，其特征在于：1)利用双引物PCR体系对杂交后代进行分子标记的检测，若后代同时含有抗性基因Gsb‑1与Gsb‑4，则能在聚丙烯酰胺凝胶电泳时一次性扩增出189bp和121bp的两个目的条带，从而可以快速有效地筛选出聚合两个抗病基因的后代单株。2)引物CMCT505对抗病基因Gsb‑1扩增出的189bp处的序列为：GACAGTAATCACCTCATCAACAGTGAATAATTAACATTAATTTAATTAATTAGGTTGATATATATGTGTGTGTGTGTGTGTGTATATATATAGAGAGAGAGAGAGAGGGAGATGATAAGGTTGGAAATAATAAAGTTATAATATAAAGTTGATGAGGTGATTACTGTCAGGGAATGTAAATTGGATATG；引物CMTA170a对抗病基因Gsb‑4扩增出的121bp处的序列为：TTAAATCCCAAAGACATGGCGTATATATATATATTATATTTGTTTTGGTATTTCCTAAGTCGCCGCCATGAAAACCTCAAAAGCTAACCGTCCTTCGTCTAGACGAAGGACGGTTAGCTTT。3)同时添加双亲两对SSR引物的PCR扩增体系30uL，包括ddH2O19.5μL，10×PCR Buffer(Mg2+)3.5uL，dNTPs(25mM)4.0uL，引物CMTA170a浓度为0.2umol/L，引物CMCT505浓度为0.3umol/L，3U·uL‑1Taq DNA聚合酶0.5μL，模板DNA(20ng/μL)2.0uL。PCR扩增程序为：94℃变性5min；然后94℃30s，58℃30s，72℃1min20s，35个循环；72℃延伸10min。...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：钱春桃，毕研飞，陈劲枫，娄群峰，徐兵划，郭静，
申请(专利权)人：南京农业大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32