一种单组份TMB显色液制造技术

本发明专利技术公开了一种单组份TMB显色液，每1000mL的显色液包括以下组分：柠檬酸7-10g，磷酸氢二钠16-20g，过硼酸钠0.1-0.5g，甘油20-30ml，TMB5-40mg，10-40mlDMSO。通过将本发明专利技术所述范围内的单组份TMB显色液用于酶联免疫反应中的显色阶段，避免了TMB显色液在使用之间需要将A、B液混合，减少了操作时间，避免了TMB显色液的有效显色成分的浓度发生改变，进而提高了TMB显色液的灵敏度；本发明专利技术所用溶剂TMB的溶剂为DMSO，以传统溶剂乙醇相比，其溶解TMB的速度快，溶解充分，溶解后的溶液稳定性更好，提高了显色效果。

【技术实现步骤摘要】
-种单组份TMB显色液
本专利技术涉及TMB显色液领域，具体地，涉及一种单组份TMB显色液。
技术介绍
TMB是一种过氧化物酶底物，用于ELISA反应。底物产生一种可溶性淡蓝色的末端 产物，可在370或635nm在分光光度计上读取。其适用于酶联免疫反应中的显色阶段的定量 和定性分析。其检验的原理是：当标记在抗体或抗原上的酶与显色液中的TMB、双氧水等反 应，加入终止液后溶液由无色变成黄色，黄色深浅反应ELISA体系中抗原抗体结合的多少， 从而判断某种抗原或抗体的多少。在通过酶标仪测度吸光值，判断免疫反应的程度。 现有市售的酶联免疫试剂盒所采用TMB显色剂液大多为双组份，分A液和B液，使 用之前需要先混匀，在使用上存在缺点一是不够方便，二是在包装材料上存在成本提高和 资源浪费；三是使用中的混合过程容易造成批间质量不均一；四是还存在稳定性差、保存 时间短、显色背景高、灵敏度低等的缺点，市售的酶联免疫试剂盒也有采用单组份的TMB显 色液，但是现有的单组份TMB显色液的稳定性不是不是特别好。 现有技术的TMB显色液及其制备方法，由A液和B液等体积混合后得到，所述A 液各组分的摩尔浓度为：柠檬酸〇? 01-0. 5mol/L，磷酸氢二钠0? 01-0. 5mol/L，过氧化氢 0. 01-0. 5mol/L，EDTAO. 1-lmmol/L;所述B液包括TMB、HC1和聚乙烯吡咯烷酮，所述TMB的 摩尔浓度为〇.l-lmm〇l/L，所述HC1的摩尔浓度为0. 01-0. 5mol/L，所述聚乙烯吡咯烷酮的 质量分数为〇. 1-10% ;现有的单组份TMB显色液的氧化剂为过氧化脲。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是提供一种单组份TMB显色液，以克服现有显色液操 作麻烦、稳定性差的问题。 此外，本专利技术还包括上述单组份TMB显色液的应用。 本专利技术解决上述问题所采用的技术方案是：一种单组份TMB显色液，其特征在于， 每1000mL的显色液包括以下组分：柠檬酸7-10g，磷酸氢二钠16-20g，过硼酸钠0. 1-0. 5g 甘油 20-30ml，TMB5-40mg，10-40mlDMS0。 现有的TMB显色液一般都是由A液和B液混合得到，A液各组分的摩尔浓度 为：朽1 樣酸 〇? 〇l_〇. 5mol/L，憐酸氢二钠 0? 01-0. 5mol/L，过氧化氢 0? 01-0. 5mol/L， EDTAO. 1-lmmol/L;所述B液包括TMB、HC1和聚乙烯吡咯烷酮，所述TMB的摩尔浓度为 0. 1-lmmol/L，所述HC1的摩尔浓度为0. 01-0. 5mol/L，所述聚乙烯吡咯烷酮的质量分数为 0. 1-10%，现有TMB显色剂的缺点在于A、B两种液体在显色之前需要等体积混匀，操作不方 便、耗时间、效率较低、批此之间存在差异，同时成本也高，且A液B液自混合的过程中，HC1 会挥发，会导致显色的有效成分的浓度发生改变，因而会导致混合后的TMB显色液的在显 色过程中的灵敏度降低；本专利技术为单组份TMB显色液，避免了TMB显色液在使用之间需要 将A、B液混合的操作步骤，简化操作流程，减少了操作时间，提高了效率，同时避免了因A、B 液不同批次间的差异导致混合的显色剂的显色效果；不会存在因HC1挥发导致的TMB显色 液的有效显色成分的浓度发生改变，进而提高了TMB显色液的灵敏度；并且，本专利技术将传统 溶剂乙醇替换成DMSO,DMSO为一种极性非质子溶剂，具有较好的渗透性，能与有机溶剂、水 互溶，因此，DMSO能加快TMB的溶解，使之溶解的更充分，且使溶解后的溶液更稳定，提高了 稳定性好的单组份TMB显色液具有更好的显色效果；本专利技术用过硼酸钠替代现有的过氧化 氢、过氧化脲，实验证明，与过氧化氢、过氧化脲相比，过硼酸钠具有更好的氧化性。 进一步地，DMS0为20-30mL。20-30mL的DMS0具有较快的溶解速度，溶解的更充 分，稳定性更好。 进一步地，柠檬酸为9-10g，磷酸氢二钠18-20g。 实验证明，柠檬酸为9-10g，磷酸氢二钠18-20g的TMB显色液具有更好的稳定性。 进一步地，TMB的质量设置为10-30mg。将TMB的质量设置为10-30mg能有效的提 高显色效果，提高显色的灵敏度。 一种单组份TMB显色液的应用，将所述的单组份TMB显色液应用到酶联免疫试剂 盒。 综上，本专利技术的有益效果是： 1、通过将本专利技术所述范围内的单组份TMB显色液用于酶联免疫反应中的显色阶段，避 免了TMB显色液在使用之间需要将A、B液混合的操作步骤，减少了操作时间，提高了效率， 同时避免了因A、B液不同批次间的差异导致混合的显色剂的显色效果。 2、通过将本专利技术所述范围内的单组份TMB显色液用于酶联免疫反应中的显色阶 段，避免了TMB显色液的有效显色成分的浓度发生改变，进而提高了TMB显色液的灵敏度。 3、本专利技术所用的溶剂为DMS0,以传统溶剂乙醇相比，其溶解TMB的速度快，溶解充 分，溶解后的溶液稳定性更好，使得显色效果更好。 【具体实施方式】 下面结合实施例，对专利技术作进一步地的详细说明，但本专利技术的实施方式不限于此。 实施例1 : 一种单组份TMB显色液，每1000mL的显色液包括以下组分：柠檬酸7g，磷酸氢二钠 16g，过硼酸钠 0?lg，甘油 20ml，TMB5mg，lOmLDMSO。 实施例2: 一种单组份TMB显色液，每1000mL的显色液包括以下组分：柠檬酸7g，磷酸氢二钠 16g，过硼酸钠 0?lg，甘油 20ml，TMB5mg，20mLDMS0。 实施例3 : 一种单组份TMB显色液，每1000mL的显色液包括以下组分：柠檬酸7g，磷酸氢二钠 16g，过硼酸钠 0?lg，甘油 20ml，TMB5mg，30mLDMS0。 实施例4: 一种单组份TMB显色液，每1000mL的显色液包括以下组分：柠檬酸7g，磷酸氢二钠 16g，过硼酸钠 0?lg，甘油 20ml，TMB5mg，40mLDMS0。 实施例5 : 一种单组份TMB显色液，每lOOOmL的显色液包括以下组分：柠檬酸10g，磷酸氢二钠 20g，过硼酸钠 0? 5g，甘油 30ml，TMBlOmg，20mlDMS0。 实施例6 : 一种单组份TMB显色液，每lOOOmL的显色液包括以下组分：柠檬酸10g，磷酸氢二钠 20g，过硼酸钠 0? 5g，甘油 30ml，TMB30mg，30mlDMS0。 实施例7 : 一种单组份TMB显色液，每1000mL的显色液包括以下组分：柠檬酸9g，磷酸氢二钠 18g，过硼酸钠 0. 2g，甘油 20ml，TMB20mg，20mlDMS0。 实施例8: 一种单组份TMB显色液，每1000mL的显色液包括以下组分：柠檬酸9g，磷酸氢二钠 18g，过硼酸钠 0? 2g，甘油 20ml，TMB30mg，40mlDMS0。本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种单组份TMB显色液，其特征在于，每1000mL的显色液包括以下组分：柠檬酸7‑10g，磷酸氢二钠16‑20g，过硼酸钠0.1‑0.5g甘油20‑30ml， TMB5‑40mg，10‑40mlDMSO。

【技术特征摘要】
1. 一种单组份TMB显色液，其特征在于，每lOOOmL的显色液包括以下组分：柠檬酸 7-10g，磷酸氢二钠 16-20g，过硼酸钠 0? 1-0. 5g 甘油 20-30ml，TMB5-40mg，10-40mlDMS0。2. 根据权利要求1所述的一种单组份TMB显色液，其特征在于，所述DMS0为20-30mL。3. 根据权利要求1...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨秦，张志新，何远立，叶正义，
申请(专利权)人：成都威尔诺生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：四川;51