多重蛋白质定量标准物制造技术

本发明专利技术提供具有不同分子量多肽的蛋白质定量标准物，其用作电泳凝胶的一条泳道中作为质量定量标准。所述蛋白质定量标准物包括具有不同电泳迁移率并以不同量存在的未染色多肽，从而在观察时凝胶中的条带具有不同强度。所述蛋白质定量标准物还可包括预染色的多肽，其用作可见的分子量标志物。本发明专利技术还提供用所述蛋白质定量标准物确定靶多肽或蛋白质质量的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】多重蛋白质定量标准物相关专利申请的交叉引用本申请要求2012年6月28日提交的美国临时专利申请第61/665,425号的优先权，其通过引用全文纳入本文。
本专利技术属于蛋白质检测领域，具体涉及对凝胶电泳中的蛋白质定量。背景凝胶电泳，包括聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)，是用于评估蛋白质或多肽的分子量的常见实验室技术。凝胶电泳用于分离蛋白质，所述分离基于它们的电荷、大小和/或分子量。在非变性条件下，蛋白质可基于其荷质比分离，并且电泳迁移率受天然蛋白质的大小和形状影响。在变性条件下，例如存在阴离子去污剂例如十二烷基磺酸钠(SDS)，蛋白质会基于其分子量分离。阴离子去污剂会使蛋白质解折叠并提供均匀的负电荷密度，从而蛋白质的电泳迁移率是分子量的对数的线性函数。对样品中蛋白质的量定量的方法为本领域已知，包括Bradford试验。Bradford试验依赖由已知蛋白质标准物生成的标准曲线来测定未知蛋白质的总量。然而，Bradford试验通常使用含有感兴趣蛋白质的溶液进行。若感兴趣蛋白质的消光系数已知，可使用分光光度法测量纯化的蛋白质的量。蛋白质的量还可通过偶联同位素标记方法(如ICAT、iTRAQ和串联治疗标签)的质谱来测定。然而，分光光度法受限用于溶液中纯蛋白质的测量。当前用于对SDS-PAGE凝胶中蛋白质定量的方法涉及从已知质量的纯化蛋白质的系列稀释液生成标准曲线，其中使各稀释液在凝胶的分开泳道中与含感兴趣靶蛋白的样品平行电泳。本专利技术公开了用于对电泳凝胶中蛋白质的量定量的蛋白质定量标准物，以及测定凝胶中蛋白质的量的方法，而无需生成已知蛋白质质量的系列稀释或制备感兴趣蛋白质的纯化样品。
技术实现思路
本专利技术描述了蛋白质定量标准物，其可用于测定电泳凝胶中靶蛋白的质量(即含量或量)。所述标准物包含可用于生成质量标准曲线的未染色多肽组，用于测定所述凝胶中靶多肽的量。所述未染色多肽组可在混合物中提供，所述混合物适于加样和在凝胶的一个泳道中电泳分离。所述蛋白质定量标准物还可包括预染色多肽组，其可用作测定靶多肽分子量(即大小)的分子量梯度。因此，在一些实施方式中，所述蛋白质定量标准物可用于测定电泳凝胶中靶蛋白的分子量和质量。所述预染色多肽组和未染色多肽组可在混合物中提供，所述混合物适于加样和在凝胶的一个泳道中电泳分离。在电泳分离时，所述预染色多肽显示为凝胶上的条带，使得使用者可确定不同大小多肽之间的分离程度。靶蛋白通常在凝胶的另一泳道中加样，随后电泳分离。因此，在一个方面，提供一种可加样到电泳凝胶的一条泳道中的蛋白质定量标准物，所述标准物包括未染色多肽组，其中所述未染色多肽组的成员具有不同的电泳迁移率并且以不同量存在，从而所述标准物适于从凝胶的一条泳道中生成蛋白质质量标准曲线。在一个实施方式中，所述未染色多肽组的不同成员具有不同的分子量和/或不同的电泳迁移率。在一个实施方式中，所述未染色多肽组的各成员具有与所述未染色多肽组的其他成员不同的分子量和/或不同的电泳迁移率。在一些实施方式中，所述蛋白质定量标准物还包含具有不同分子量和/或不同电泳迁移率的预染色多肽组，从而所述标准物适于在凝胶的一条泳道中生成分子量梯度和蛋白质质量标准。在一个实施方式中，所述预染色多肽组的不同成员具有不同的分子量和/或不同的电泳迁移率。在一个实施方式中，所述预染色多肽组的各成员具有与所述预染色多肽组的其他成员不同的分子量和/或不同的电泳迁移率。在一些实施方式中，所述标准物的至少一种预染色多肽和至少一种未染色多肽具有不同电泳迁移率。在一些实施方式中，所述蛋白质定量标准物在共同混合物中包含具有不同分子量的预染色多肽组和具有不同分子量的未染色多肽组，其中所述未染色多肽组的成员具有不同电泳迁移率且以不同的量存在，从而所述标准物适于在电泳凝胶的一条泳道中生成分子量梯度和蛋白质质量标准。所述蛋白质质量标准可用于从凝胶的一条泳道生成蛋白质定量标准曲线。在另一实施方式中，本专利技术公开了用于测定靶蛋白的质量或量的方法。因此，在一些实施方式中，所述方法包括：使所述靶多肽在凝胶的一条泳道中电泳迁移，并使蛋白质定量标准物在凝胶的另一泳道中电泳迁移，其中所述蛋白质定量标准物包含具有不同电泳迁移率并以不同量存在的未染色多肽组；检测所述靶多肽和所述蛋白质定量标准物；和，将所述靶多肽的检测量与由所述蛋白质定量标准物生成的质量标准曲线做比较，从而确定靶蛋白的质量。在一些实施方式中，所述方法包括视觉比较凝胶中的靶多肽含量与凝胶或凝胶图像中的所述蛋白质定量标准物的条带，从而测定或评估所述靶多肽的质量或含量。所述方法还可检测含预染色多肽的蛋白质标准物，所述预染色多肽用于检测所述靶蛋白的表观分子量。所述未染色多肽可在凝胶分离完成期间或之后进行观察或检测，如本文详述。在一些实施方式中，所述检测包括无染剂成像。在一些实施方式中，所述检测包括荧光成像。在一些实施方式中，所述检测包括使所述未染色多肽与染剂或染料接触并观察所述多肽。所述方法可在变性凝胶例如SDS-PAGE凝胶上或非变形凝胶上实施。在一些实施方式中，所述方法还包括使所述未染色多肽接触一种或多种配体，所述配体特异结合所述标准物的多肽。在一些实施方式中，所述一种或多种配体与生色或化学发光试剂偶联。本专利技术还提供在微流体电泳装置或毛细管电泳装置中测定靶蛋白的质量的方法。因此，在一些实施方式中，公开了测定靶多肽质量的方法，所述方法包括：使本文所述靶多肽和所述蛋白质定量标准物在微流体装置中电泳迁移；检测所述靶多肽和所述蛋白定量标准物；和将所述靶多肽的检测量与由所述蛋白质定量标准物生成的质量标准曲线做比较，从而确定所述靶多肽的质量。本专利技术还提供测定靶多肽的质量或含量的计算机执行方法。所述计算机执行方法可用经过电泳分离所述蛋白质标准物的凝胶或凝胶图像进行。在一些实施方式中，所述计算机执行方法包括：对蛋白质定量标准物中的未染色多肽定量，所述蛋白质定量标准物包含具有不同电泳迁移率并以不同量存在的未染色多肽组；基于所述定量步骤生成回归拟合；从所述回归拟合计算所述靶多肽的质量；和提供所述经计算的质量。所述回归拟合可为线性或非线性回归。在一些实施方式中，所述计算机执行方法受用可执行指令配置的一种或多种计算机系统的控制。在另一方面，公开了用于进行本文所述方法的一个或多个步骤的计算机产品。在一个实施方式中，所述计算机产品包括永久性计算机可读介质，其储存多项指令，所述指令用于控制处理器进行一种或多种下述步骤的操作：(i)接收数据，所述数据包括蛋白质定量标准物中的未染色多肽的量，所述蛋白质定量标准物包含具有不同电泳迁移率并以不同量存在的未染色多肽组；(ii)基于所接收的数据生成回归拟合；(iii)从所述回归拟合计算所述靶多肽的质量；和(iv)提供所述经计算的质量。在一些实施方式中，提供包含计算机产品的计算机系统，所述产品用于进行本文所述方法的一个或多个步骤。在一个实施方式中，所述计算机系统包括永久性计算机可读介质和一种或多种处理器，所述永久性计算机可读介质储存多项指令，所述指令用于控制处理器进行一种或多种下述步骤的操作：(i)接收数据，所述数据包括蛋白质定量标准物中的未染色多肽的量，所述蛋白质定量标准物包含具有不同电泳迁移率并以不同量存在的未染色多肽组；(ii)基于本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种可在电泳凝胶的一条泳道中上样的蛋白质定量标准物，所述标准物包括未染色多肽组，其中所述未染色多肽组的成员具有不同的电泳迁移率并且以不同量存在，从而所述标准物适于从凝胶的一条泳道中生成蛋白质质量标准曲线。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2012.06.28 US 61/665,4251.一种可在电泳凝胶的一条泳道中上样的蛋白质定量标准物，其特征在于，所述标准物包括(i)和(ii)的混合物：(i)未染色多肽组，其中所述未染色多肽组的成员具有不同的电泳迁移率并且以不同量存在，其中所述未染色多肽是未标记多肽，和(ii)具有不同电泳迁移率的预染色多肽组，从而所述标准物适于从凝胶的一条泳道中生成蛋白质质量标准曲线和分子量梯度。2.如权利要求1所述的蛋白质定量标准物，其中所述多肽大小范围为2kDa-250kDa。3.如权利要求2所述的蛋白质定量标准物，其中所述多肽大小范围为2kDa-100kDa。4.如权利要求2所述的蛋白质定量标准物，其中所述多肽大小范围为20kDa-100kDa。5.如权利要求1所述的蛋白质定量标准物，其中所述预染色多肽组的成员具有不同电泳迁移率。6.如权利要求1所述的蛋白质定量标准物，其中所述预染色多肽组的成员以相同的量存在。7.如权利要求1所述的蛋白质定量标准物，其中至少一种预染色多肽和至少一种未染色多肽具有不同的电泳迁移率。8.如权利要求1所述的蛋白质定量标准物，其中所述未染色多肽包含百分比差异不多于5％的色氨酸。9.如权利要求1所述的蛋白质定量标准物，其中所述预染色多肽用一种或多种有色染料染色，其中所述一种或多种有色染料包含单一有色染料、不同有色染料的组合或荧光染料。10.如权利要求1所述的蛋白质定量标准物，还包括氨基酸序列与预染色多肽相同的未染色多肽。11.一种试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包含如权利要求1所述的蛋白质定量标准物。12.确定靶多肽的质量的方法，其特征在于，所述方法包括：使所述靶多肽在凝胶的一条泳道中电泳迁移，并使权利要求1所述的蛋白质定量标准物在所述凝胶的另一泳道中电泳迁移；检测所述靶多肽和所述蛋白定量标准物；将所述靶多肽的检测量与由所述蛋白质定量标准物生成的质量标准曲线做比较，从而确定所述靶多肽的质量。13.如权利要求12所述的方法，还包括检测蛋白质标准物的预染色多肽条带以确定所述靶多肽的表观分子量。14.如权利要求12或13所述的方法，其中所述检测包括无染剂成像。15.如权利要求12或13所述的方法，其中所述检测包括荧光成像。16.如权利要求12所述的方法，其中所述检测包括使所述未染色多肽与染剂或染料接触并观察所述多肽。17.如权利要求12所述的方法，其中所述凝胶是变性凝胶或非变性凝胶。18.测定靶多肽的质量的方法，其特征在于，所述方法包括：使所述靶多肽和权利要求1所述的蛋白质定量标准物在微流体装置中电泳迁移；检测所述靶多肽和所述蛋白定量标准物；将所述靶多肽的检测量...

【专利技术属性】
技术研发人员：J·S·西诺，D·C·伊，L·O·洛马斯，
申请(专利权)人：生物辐射实验室股份有限公司，
类型：发明
国别省市：美国;US