利用颗粒细胞端粒长度来判断胚胎发育潜能的方法技术

本发明专利技术涉及一种利用颗粒细胞端粒长度来判断胚胎发育潜能的方法，将女性的年龄段化分为小于等于35岁或大于35岁两个阶段，然后根据用于受精的卵母细胞的颗粒细胞相对端粒长度T／S值来判断其是高发育潜能的胚胎或是低发育潜能的胚胎。本发明专利技术是一种较为客观、准确、可量化的胚胎质量评价方法，无创、且无需反复拿出培养箱观察，减少了不良环境刺激。由于本发明专利技术可量化，有具体的数值范围，操作容易，避免了因人为主观因素使判断标准出现不统一的问题。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种。
技术介绍
卵泡（follicle)中卵母细胞四周有一层菱形或扁平细胞围绕，在卵泡开始发育、 卵细胞成长的同时，周围的菱形细胞变为立方形，并由单层增生成复层，因其细胞浆内含有 颗粒，故称为颗粒细胞（granulosa cells)。端粒学说由Olovnikov提出，认为细胞在每 次分裂过程中都会由于DNA聚合酶功能障碍而不能完全复制它们的染色体，因此最后复制 DNA序列可能会丢失，最终造成细胞衰老死亡。故颗粒细胞一般与人体的衰老研宄有关。 体外受精-胚胎移植（in-vitro fertilization，IVF-ET)和卵母细胞单精子注射 (intra-cytoplasmic sperm injection，ICSI)治疗不孕症的成功率主要取决于体内子宫 环境和移植胚胎的质量和数目。研宄证明，胚胎质量的评估选择有助于减少多胎妊娠，提高 种植率和临床妊娠率。评估胚胎是否具有高着床潜能是现代辅助生殖技术的重点，用于评 估胚胎质量的主要参数为原核期评分和卵裂期胚胎的形态及发育速度。 目前，临床实践中，胚胎评级主要基于主观的光镜形态学分析，包括卵母细胞质 量、原核期形态、卵裂球数量、卵裂球的均匀程度及胚胎碎片。未见有利用颗粒细胞端粒长 度来判断胚胎发育潜能的相关研宄报道。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是：提供一种较为客观、准确、可量化的利用颗粒细胞端 粒长度来判断胚胎发育潜能的方法。 解决上述技术问题的技术方案是：一种利用颗粒细胞端粒长度来判断胚胎发育潜 能的方法，所述的颗粒细胞端粒长度是指颗粒细胞相对端粒长度，用T/S值表示， 年龄小于或等于35岁的女性，用于受精的卵母细胞的颗粒细胞相对端粒长度T/S 值为4. 09?5. 89时，判断得到的胚胎为高发育潜能的胚胎，用于受精的卵母细胞的颗粒细 胞相对端粒长度T/S值为1. 95?3. 95时，判断得到的胚胎为低发育潜能的胚胎； 年龄大于35岁的女性，用于受精的卵母细胞的颗粒细胞相对端粒长度T/S值为 3. 72?5. 92时，判断得到的胚胎为高发育潜能的胚胎，用于受精的卵母细胞的颗粒细胞相 对端粒长度T/S值为1. 44?3. 20时，判断得到的胚胎为低发育潜能的胚胎。 现有的形态学评分存在的缺陷，如胚胎形态学评分并不能全面地反映胚胎的发育 潜能，过多依赖于实验室技术人员的主观判断标准，观察时间过短，数据之间缺乏联系，同 时缺少客观可量化的指标等。而本专利技术是一种较为客观、准确、可量化的胚胎质量评价方 法，无创、且无需反复拿出培养箱观察，减少了不良环境刺激。由于本专利技术可量化，有具体的 数值范围，操作容易，避免了因人为主观因素使判断标准出现不统一的问题。 下面，结合实施例对本专利技术之 的技术特征作进一步的说明。 【具体实施方式】 实施例1: 一种，所述的颗粒 细胞端粒长度是指颗粒细胞相对端粒长度，用T/S值表示， 年龄小于或等于35岁的女性，用于受精的卵母细胞的颗粒细胞相对端粒长度T/S 值为4. 09?5. 89时，判断得到的胚胎为高发育潜能的胚胎，用于受精的卵母细胞的颗粒细 胞相对端粒长度T/S值为1. 95?3. 95时，判断得到的胚胎为低发育潜能的胚胎； 年龄大于35岁的女性，用于受精的卵母细胞的颗粒细胞相对端粒长度T/S值为 3. 72?5. 92时，判断得到的胚胎为高发育潜能的胚胎，用于受精的卵母细胞的颗粒细胞相 对端粒长度T/S值为1. 44?3. 20时，判断得到的胚胎为低发育潜能的胚胎。 本实施例中，通过以下步骤测量颗粒细胞相对端粒长度： 1.颗粒细胞基因组DNA提取及定量。 (1)每个卵母细胞的颗粒细胞沉淀中加入Protease K 20uL、Buffer AL 200uL，混 匀后56 °C水浴10分钟。 (2)加入无水乙醇200ul/管，混勾后转移入Spin Colunm，室温下以13200rpm离 心2. 5分钟。 (3)弃滤液，将Spin Column移入清洁收集管中，加AW1液600ul，室温下以 13200rpm离心2. 5分钟。 (4)弃滤液，将Spin Column移入另一清洁收集管中加AW2液600ul，室温下以 13200rpm离心2. 5分钟。 (5)弃滤液，将Spin Column转移入已标患者姓名的新1. 5ml离心管中，加Buffer AE300ul，室温下以13200rpm离心2. 5分钟。 (6)核对标本姓名及编码，收集离心管内液体（即提出的DNA)，用超微量分光光度 计测定0D260和0D280, -20°C保存备用。 (7)选择一例基础内分泌正常、有正常排卵功能且无其他疾病的不孕妇女DNA样 本做为 Calibrator。 2.引物设计与合成。 表1引物序列本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种利用颗粒细胞端粒长度来判断胚胎发育潜能的方法，所述的颗粒细胞端粒长度是指颗粒细胞相对端粒长度，用T／S值表示，其特征在于：年龄小于或等于35岁的女性，用于受精的卵母细胞的颗粒细胞相对端粒长度T/S值为4. 09～5.89时，判断得到的胚胎为高发育潜能的胚胎，用于受精的卵母细胞的颗粒细胞相对端粒长度T/S值为1.95～3.95时，判断得到的胚胎为低发育潜能的胚胎；年龄大于35岁的女性，用于受精的卵母细胞的颗粒细胞相对端粒长度T/S值为3.72～5.92时，判断得到的胚胎为高发育潜能的胚胎，用于受精的卵母细胞的颗粒细胞相对端粒长度T/S值为1.44～3.20时，判断得到的胚胎为低发育潜能的胚胎。

【技术特征摘要】
1. 一种利用颗粒细胞端粒长度来判断胚胎发育潜能的方法，所述的颗粒细胞端粒长度 是指颗粒细胞相对端粒长度，用T / S值表示，其特征在于： 年龄小于或等于35岁的女性，用于受精的卵母细胞的颗粒细胞相对端粒长度T/S值为 4. 09?5. 89时，判断得到的胚胎为高发育潜能的胚胎，用于受精的卵母细胞的颗粒细胞 相对端粒长...

【专利技术属性】
技术研发人员：李楠，王麟，韦继红，韦立红，唐永梅，牟联俊，秦祖兴，
申请(专利权)人：柳州市妇幼保健院，
类型：发明
国别省市：广西;45