一种长期保存蛹虫草菌种的方法技术

本发明专利技术涉及菌种保存技术领域，具体涉及一种长期保存蛹虫草菌种的方法，包括如下步骤：A、菌种培养：在无菌条件下，将蛹虫草健康菌种接种到灭菌好的PDA斜面培养基上，进行暗培养，待菌丝长满斜面40%-60%后，进行光培养；B、培养基脱水：将装有培养物的试管放入干燥皿，再将干燥皿置于冰箱中，待斜面培养基脱水至体积剩下20%-30%时，取出试管；C、菌种保存：往试管中缓慢注入灭菌好的石蜡油至淹没培养物1cm以上，震荡去除培养物表面气泡，塞入灭菌好的脱脂棉花，用灭菌好的石蜡封口后加盖灭菌好的pp薄膜，垂直摆放于0℃冰箱保存。本发明专利技术能更好地抑制菌种的生理活动，菌种能保存3年以上，且保存后的菌种活力依然较好。

【技术实现步骤摘要】
一种长期保存蛹虫草菌种的方法
本专利技术涉及菌种保存
，具体涉及一种长期保存蛹虫草菌种的方法。
技术介绍
现有的石蜡保存法的一般步骤为：将液体石蜡灭菌，放于37℃恒温箱中，使水汽蒸发掉备用。再将已分纯的待存菌在最适宜的斜面培养基中培养，使得到健壮的菌体，用无菌吸管吸取已灭菌的液体石蜡，注入已长好的斜面培养基上，用量以高出斜面1cm为准，将试管直立，贴上标签，置4℃下保存。该方法制作简单，不需要特殊设备，菌种可以保存1年左右不需要经常移种，缺点是保存的时候需要直立放置。但对于有些生命力顽强的菌种，如蛹虫草菌种，现有的石蜡保存法并不适用，因此，有必要研发一种能更好地抑制菌种的生理活动的长期保存方法。
技术实现思路
为了克服现有技术中存在的缺点和不足，本专利技术的目的在于提供一种长期保存蛹虫草菌种的方法，该方法能更好地抑制菌种的生理活动，相比现有的液体石蜡保存法，经本专利技术的方法保存的蛹虫草菌种能保存3年以上，且保存后的菌种活力依然较好。本专利技术的目的通过下述技术方案实现：一种长期保存蛹虫草菌种的方法，包括如下步骤：A、菌种培养：在无菌条件下，将蛹虫草健康菌种接种到灭菌好的PDA斜面培养基上，进行暗培养，待菌丝长满斜面40%-60%后，进行光培养；B、培养基脱水：将装有培养物的试管放入干燥皿，再将干燥皿置于冰箱中，待斜面培养基脱水至体积剩下20%-30%时，取出试管；C、菌种保存：往试管中缓慢注入灭菌好的石蜡油至淹没培养物1cm以上，震荡去除培养物表面气泡，塞入灭菌好的脱脂棉花，用灭菌好的石蜡封口后加盖灭菌好的pp薄膜，垂直摆放于0℃冰箱保存。优选的，缓慢注入灭菌好的石蜡油至淹没培养物1-3cm。本专利技术通过将菌丝长满斜面40%-60%后，再进行光培养，可以根据菌丝的生长速度来决定培养时间。本专利技术通过在石蜡封口后加盖灭菌好的pp薄膜，能保持试管口的卫生，防止污染。优选的，所述步骤A之前还包括步骤A0、材料准备：将装有PDA斜面培养基的试管用4层报纸封口，灭菌前在试管的内外各加1层pp薄膜，高温高压灭菌后去掉外层的pp薄膜，在超净台上晾至常温，接种后去掉内层的pp薄膜；将脱脂棉花、石蜡和石蜡油灭菌备用。本专利技术通过将装有PDA斜面培养基的试管用4层报纸封口，其透气性较好，方便后续培养基的脱水；本专利技术通过在试管的内外各加1层pp薄膜，能防止PDA斜面培养基在灭菌过程中破损；本专利技术通过在高温高压灭菌后去掉外层的pp薄膜，有利报纸上水分蒸发，保证干爽，减少污染。优选的，所述步骤A中，暗培养的培养温度为24℃±1℃，培养时间为2-3天。所述暗培养在干爽环境下进行，能减少污染；本专利技术通过将暗培养的培养温度控制在24℃±1℃，培养时间控制在2-3天，有利于菌丝的生长。更为优选的，所述步骤A中，暗培养的培养温度为24℃，培养时间为2天。优选的，所述步骤A中，光培养的培养温度为24℃±1℃，光照强度为400-600lux，培养时间为1-2天。本专利技术通过将光照强度控制在400-600lux，有利于分生孢子的生长；本专利技术通过将培养时间控制在1-2天，分生孢子数量多，质量好。更为优选的，所述步骤A中，光培养的培养温度为24℃，光照强度为500lux，培养时间为1天。上述一种长期保存蛹虫草菌种的方法得到的蛹虫草菌种，所述蛹虫草菌种的保存时间为3-4年。本专利技术的有益效果在于：本专利技术的方法采用培养基脱水步骤，能抑制菌种的生理活性，并配合低温保存，进一步抑制菌种的生理代谢，延长保存时间。本专利技术的方法能更好地抑制菌种的生理活动，相比现有的液体石蜡保存法，经本专利技术的方法保存的蛹虫草菌种能保存3年以上，且保存后的菌种活力依然较好。蛹虫草人工培养中，出发菌种的质量是决定子实体有效成分含量高低的关键因素，但蛹虫草优良菌种在繁殖过程中，退化是难以避免的。因此，筛选获得优良菌种之后，将之有效保存，并在必要的时候复活，最大程度发挥菌种的生产性能，将有利于保证优良菌种的供应，促进人工栽培蛹虫草的规模化和产业化发展。具体实施方式为了便于本领域技术人员的理解，下面结合实施例对本专利技术作进一步的说明，实施方式提及的内容并非对本专利技术的限定。实施例1一种长期保存蛹虫草菌种的方法，包括如下步骤：A、菌种培养：在无菌条件下，将蛹虫草健康菌种接种到灭菌好的PDA斜面培养基上，进行暗培养，待菌丝长满斜面40%后，进行光培养；B、培养基脱水：将装有培养物的试管放入干燥皿，再将干燥皿置于冰箱中，待斜面培养基脱水至体积剩下20%时，取出试管；C、菌种保存：在超净工作台上往试管中缓慢注入灭菌好的石蜡油至淹没培养物1cm，用小型漩涡振荡器去除培养物表面气泡，塞入灭菌好的脱脂棉花，用灭菌好的石蜡封口后加盖灭菌好的pp薄膜，垂直摆放于0℃冰箱保存。所述步骤A之前还包括步骤A0、材料准备：将装有PDA斜面培养基的试管用4层报纸封口，灭菌前在试管的内外各加1层pp薄膜，高温高压灭菌后去掉外层的pp薄膜，在超净台上晾至常温，接种后去掉内层的pp薄膜；将脱脂棉花、石蜡和石蜡油灭菌备用。所述步骤A中，暗培养的培养温度为23℃，干爽环境下培养2天。所述步骤A中，光培养的培养温度为23℃，光照强度为400lux，培养时间为2天。上述一种长期保存蛹虫草菌种的方法得到的蛹虫草菌种，所述蛹虫草菌种的保存时间为3年。实施例2一种长期保存蛹虫草菌种的方法，包括如下步骤：A、菌种培养：在无菌条件下，将蛹虫草健康菌种接种到灭菌好的PDA斜面培养基上，进行暗培养，待菌丝长满斜面45%后，进行光培养；B、培养基脱水：将装有培养物的试管放入干燥皿，再将干燥皿置于冰箱中，待斜面培养基脱水至体积剩下22%时，取出试管；C、菌种保存：在超净工作台上往试管中缓慢注入灭菌好的石蜡油至淹没培养物1.5cm，用小型漩涡振荡器去除培养物表面气泡，塞入灭菌好的脱脂棉花，用灭菌好的石蜡封口后加盖灭菌好的pp薄膜，垂直摆放于0℃冰箱保存。所述步骤A之前还包括步骤A0、材料准备：将装有PDA斜面培养基的试管用4层报纸封口，灭菌前在试管的内外各加1层pp薄膜，高温高压灭菌后去掉外层的pp薄膜，在超净台上晾至常温，接种后去掉内层的pp薄膜；将脱脂棉花、石蜡和石蜡油灭菌备用。所述步骤A中，暗培养的培养温度为24℃，干爽环境下培养3天。所述步骤A中，光培养的培养温度为23℃，光照强度为450lux，培养时间为1天。上述一种长期保存蛹虫草菌种的方法得到的蛹虫草菌种，所述蛹虫草菌种的保存时间为3.5年。实施例3一种长期保存蛹虫草菌种的方法，包括如下步骤：A、菌种培养：在无菌条件下，将蛹虫草健康菌种接种到灭菌好的PDA斜面培养基上，进行暗培养，待菌丝长满斜面50%后，进行光培养；B、培养基脱水：将装有培养物的试管放入干燥皿，再将干燥皿置于冰箱中，待斜面培养基脱水至体积剩下25%时，取出试管；C、菌种保存：在超净工作台上往试管中缓慢注入灭菌好的石蜡油至淹没培养物2cm，用小型漩涡振荡器去除培养物表面气泡，塞入灭菌好的脱脂棉花，用灭菌好的石蜡封口后加盖灭菌好的pp薄膜，垂直摆放于0℃冰箱保存。所述步骤A之前还包括步骤A0、材料准备：将装有PDA斜面培养基的试管用4层报纸封口，灭菌前在试管的内外各加1层pp薄膜，高温高压灭菌后去掉外层的pp薄膜，在超净台上晾至常温，本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种长期保存蛹虫草菌种的方法，其特征在于：包括如下步骤：A、菌种培养：在无菌条件下，将蛹虫草健康菌种接种到灭菌好的PDA斜面培养基上，进行暗培养，待菌丝长满斜面40%‑60%后，进行光培养；B、培养基脱水：将装有培养物的试管放入干燥皿，再将干燥皿置于冰箱中，待斜面培养基脱水至体积剩下20%‑30%时，取出试管；C、菌种保存：往试管中缓慢注入灭菌好的石蜡油至淹没培养物1cm以上，震荡去除培养物表面气泡，塞入灭菌好的脱脂棉花，用灭菌好的石蜡封口后加盖灭菌好的pp薄膜，垂直摆放于0℃冰箱保存。

【技术特征摘要】
1.一种长期保存蛹虫草菌种的方法，其特征在于：包括如下步骤：A、菌种培养：在无菌条件下，将蛹虫草健康菌种接种到灭菌好的PDA斜面培养基上，进行暗培养，待菌丝长满斜面40%-60%后，进行光培养；B、培养基脱水：将装有培养物的试管放入干燥皿，再将干燥皿置于冰箱中，待斜面培养基脱水至体积剩下20%-30%时，取出试管；C、菌种保存：往试管中缓慢注入灭菌好的石蜡油至淹没培养物1cm以上，震荡去除培养物表面气泡，塞入灭菌好的脱脂棉花，用灭菌好的石蜡封口后加盖灭菌好的pp薄膜，垂直摆放于0℃冰箱保存；所述步骤A中，暗培养的培养温度为24℃±1℃，培养时间为2-3天；所述步骤A中，光培养的培养温度为24℃±1℃，光照强...

【专利技术属性】
技术研发人员：郑贵朝，叶锦泉，喻孟君，
申请(专利权)人：东莞市生物技术研究所，
类型：发明
国别省市：广东;44