本发明专利技术公开了一种Au@Pt酶模拟物标记的克伦特罗ELISA检测试剂盒。该试剂盒包括Au@Pt纳米颗粒标记的二抗。所述Au@Pt纳米颗粒标记的二抗按照如下方法制备得到：将浓度为6mg/ml的二抗按照1:1000的比例进行稀释，得到稀释后的二抗；将浓度为5nM的修饰后的Au@Pt纳米颗粒悬浮液按照1:4的比例进行稀释，得到稀释后的Au@Pt纳米颗粒悬浮液。将所述稀释后的二抗与稀释后的Au@Pt纳米颗粒悬浮液按照体积比为4:100进行混合，在4℃下反应4天，得到所述Au@Pt纳米颗粒标记的二抗。实验结果表明：本发明专利技术的Au@Pt酶模拟物标记的克伦特罗ELISA检测试剂盒具有操作简单，反应时间短，灵敏度高、成本低等特点。
【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术公开了一种AuPt酶模拟物标记的克伦特罗ELISA检测试剂盒。该试剂盒包括AuPt纳米颗粒标记的二抗。所述AuPt纳米颗粒标记的二抗按照如下方法制备得到：将浓度为6mg/ml的二抗按照1:1000的比例进行稀释，得到稀释后的二抗；将浓度为5nM的修饰后的AuPt纳米颗粒悬浮液按照1:4的比例进行稀释，得到稀释后的AuPt纳米颗粒悬浮液。将所述稀释后的二抗与稀释后的AuPt纳米颗粒悬浮液按照体积比为4:100进行混合，在4℃下反应4天，得到所述AuPt纳米颗粒标记的二抗。实验结果表明：本专利技术的AuPt酶模拟物标记的克伦特罗ELISA检测试剂盒具有操作简单，反应时间短，灵敏度高、成本低等特点。【专利说明】-种Au@Pt酶模拟物标记的盐酸克伦特罗ELISA检测试剂 合 Sl
本专利技术属于生物
，具体涉及一种Au@Pt酶模拟物标记的盐酸克伦特罗 ELISA检测试剂盒。
技术介绍
盐酸克伦特罗是一种人工合成用于治疗哮喘的药物，20世纪70年代美国将其引 入畜禽生产，可以促进肌肉生长、减少胴体脂肪、提高瘦肉率。但长期使用该药物会在动物 可食性组织中残留，人食用后会引起中毒，因此我国和欧盟均禁止应用盐酸克伦特罗作促 生长剂。然而受经济利益的驱使，许多不法企业和生产商依然进行非法添加，这给人民的身 体健康和生命安全造成潜在的危害。因此，有必要建立快速、灵敏、有效和廉价的检测技术 和方法。 目前，对于盐酸克伦特罗的检测技术包括快速筛选法和仪器确证法。其中，快速筛 选主要以胶体金试纸条和酶联免疫试剂盒（ELISA)为主。胶体金试纸条灵敏度明显偏低， 常规ELISA试剂盒中酶的活性受温度影响较大，且价格较高。仪器确证法包括气相色谱质 谱联用法（GC-MS)、高效液相色谱法（HPLC)和液相色谱-质谱联用法（LC-MS)等。仪器确 证技术虽然测定准确、回收率高、特异性好，但样品基质复杂，前处理的过程耗时长，对样品 的灵敏度和准确度影响较大并且最终检测所需设备昂贵，使得基层单位和企业难以实现现 场快速检测。
技术实现思路
本专利技术的一个目的是提供一种检测待测样品中盐酸克伦特罗浓度的方法。 本专利技术提供的检测待测样品中盐酸克伦特罗浓度的方法包括如下步骤： (1)将盐酸克伦特罗单抗包被到酶标板上，待用； (2)向包被盐酸克伦特罗单抗的酶标板中加入盐酸克伦特罗标准溶液或待测样 品，反应； (3)加入Au@Pt纳米颗粒标记的二抗，反应； (4)加入底物显色，显色后各孔终止反应； (5)用酶标仪检测加入标准品的各孔的吸光度值，以盐酸克伦特罗标准溶液浓度 为横坐标、以酶标仪的读数为纵坐标绘制标准曲线； (6)用酶标仪检测加入待测样品的孔的吸光度值，将吸光度值代入所述标准曲线， 即得待测样品中盐酸克伦特罗的浓度。 上述方法中，所述Au@Pt纳米颗粒标记的二抗的获得方法包括如下步骤： A、将AuOPt纳米颗粒制成AuOPt纳米颗粒悬浮液； B、将AuOPt纳米颗粒悬浮液离心，得到AuOPt纳米颗粒沉淀物； C、向Au@Pt纳米颗粒的水悬液中加入聚苯乙烯磺酸钠，反应； D、反应后离心，倒掉上清液分离出沉淀物，将沉淀物用水溶解，得到修饰后的Au@ Pt纳米颗粒悬浮液； E、将二抗加入所述修饰后的Au@Pt纳米颗粒悬浮液中，反应，得到所述的Au@Pt纳 米颗粒标记的二抗。 上述方法中，所述将二抗加入所述修饰后的Au@Pt纳米颗粒悬浮液前，还需将二 抗和修饰后的Au@Pt纳米颗粒悬浮液进行稀释的步骤； 所述将二抗进行稀释的方法：将浓度为6mg/ml的二抗按照1:1000的比例进行稀 释，得到稀释后的二抗； 所述将修饰后的Au@Pt纳米颗粒悬浮液进行稀释的方法：将浓度为5nM的修饰后 的Au@Pt纳米颗粒悬浮液按照1:4的比例进行稀释，得到稀释后的Au@Pt纳米颗粒悬浮液。 上述方法中，所述将二抗加入所述修饰后的Au@Pt纳米颗粒悬浮液中的方法：将 所述稀释后的二抗与稀释后的Au@Pt纳米颗粒悬浮液混合，所述稀释后的二抗与所述稀释 后的Au@Pt纳米颗粒悬浮液的体积比为4:100。 上述方法中，所述步骤E中反应条件是：在4°C下反应4天。 上述方法中，所述底物为四甲基联苯胺。 上述方法中，所述显色后各孔加入50iiL的浓度为4M的硫酸溶液终止反应。 上述方法中，所述用酶标仪检测吸光度值时的波长为450nm。 本专利技术的另一个目的是提供Au@Pt纳米颗粒在作为酶联免疫检测中使用的标记 中的应用。 本专利技术的最后一个目的是提供一种酶联免疫试剂盒。 本专利技术提供的酶联免疫试剂盒包括Au@Pt纳米颗粒标记的二抗。 上述试剂盒中，所述Au@Pt纳米颗粒标记的二抗按照如下方法制备得到： A、将AuOPt纳米颗粒制成AuOPt纳米颗粒悬浮液； B、将Au@Pt纳米颗粒悬浮液离心，得到Au@Pt纳米颗粒沉淀物； C、向Au@Pt纳米颗粒的水悬液中加入聚苯乙烯磺酸酯，反应； D、反应后离心，倒掉上清液分离出沉淀物，将沉淀物用水溶解，得到修饰后的Au@ Pt纳米颗粒悬浮液； E、将二抗加入所述修饰后的Au@Pt纳米颗粒悬浮液中，反应，得到所述的Au@Pt纳 米颗粒标记的二抗。 上述所述的试剂盒在检测或辅助检测待测样品中盐酸克伦特罗浓度中的应用也 是本专利技术的保护范围。 Au@Pt纳米材料具有成本低、制备简单、稳定性更好，生物活性好等优点，并且纳米 粒子因其比表面积大，表面活化中心多，催化活性和催化效率也大大增强。与天然辣根过氧 化物酶（HRP)相比具有可调的催化活性，其不仅具有天然酶的优点同时也克服了天然酶的 缺点，这使它成为一个有前途的酶模拟物。本专利技术采用该纳米结构材料-Au@Pt替代天然辣 根过氧化物酶，研发了基于Au@Pt纳米材料标记二抗的ELISA检测盐酸克伦特罗的试剂盒。 本试剂盒具有操作简单，反应时间短，灵敏度高、成本低等特点，能够很好的用于盐酸克伦 特罗的检测。 【专利附图】【附图说明】 图1为二抗与Au@Pt纳米材料偶联时间比较。 图2为盐酸克伦特罗在不同浓度范围的线性相关性。 图3为盐酸克伦特罗灵敏度曲线。 【具体实施方式】 下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。 下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。 实施例1、试剂盒及使用方法 一、Au@Pt纳米颗粒标记的二抗 1、Au@Pt纳米颗粒悬浮液的制备及修饰 (1)纳米金棒溶液的制备 将7. 5ml溴化十六烷基三甲铵CTAB(0. 1M)水溶液与100ill的HAuC14溶液 (24mM)混合，并用超纯水稀释至9. 4ml;然后在磁子搅拌的条件下加入0. 6ml的NaBH4溶液 (0.01M);搅拌3min后停止，在室温下静置反应30min，得到纳米金种子溶液（合成后的纳 米金种子要在2-5h以内进行使用）。 将240iil的纳米金种子溶液加入到生长溶液（由100ml的0? 1MCTAB溶液、 2. 04ml的 0? 024MHAuC14溶液、2ml本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种检测待测样品中盐酸克伦特罗浓度的方法，包括如下步骤：(1)将盐酸克伦特罗单抗包被到酶标板上，待用；(2)向包被盐酸克伦特罗单抗的酶标板中加入盐酸克伦特罗标准溶液或待测样品，反应；(3)加入Au@Pt纳米颗粒标记的二抗，反应；(4)加入底物显色，显色后各孔终止反应；(5)用酶标仪检测加入标准品的各孔的吸光度值，以盐酸克伦特罗标准溶液浓度为横坐标、以酶标仪的读数为纵坐标绘制标准曲线；(6)用酶标仪检测加入待测样品的孔的吸光度值，将吸光度值代入所述标准曲线，即得待测样品中盐酸克伦特罗的浓度。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：王培龙，苏晓鸥，王日楠，石雷，吴晓春，
申请(专利权)人：中国农业科学院农业质量标准与检测技术研究所，
类型：发明
国别省市：北京;11
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