本发明专利技术属于临床免疫学检测技术领域，公开了一种髓过氧化物酶抗体(MPO-Ab)定量测定试剂盒，包括磁分离试剂、酶标记试剂、校准品、清洗浓缩液、底物溶液以及稳定剂。本发明专利技术还公开了上述试剂盒的制备方法。本发明专利技术还公开了上述试剂盒的检测方法。本发明专利技术制备的试剂盒精确度、灵敏度以及稳定性较好，并且成本低廉，操作简单，具备广阔的应用前景。
【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术属于临床免疫学检测
，公开了一种髓过氧化物酶抗体(MPO-Ab)定量测定试剂盒，包括磁分离试剂、酶标记试剂、校准品、清洗浓缩液、底物溶液以及稳定剂。本专利技术还公开了上述试剂盒的制备方法。本专利技术还公开了上述试剂盒的检测方法。本专利技术制备的试剂盒精确度、灵敏度以及稳定性较好，并且成本低廉，操作简单，具备广阔的应用前景。【专利说明】髓过氧化物酶抗体（MPO-Ab)定量测定试剂盒及其检测方 法
本专利技术属于临床免疫学检测
，具体涉及一种髓过氧化物酶抗体（MPO-Ab) 定量测定试剂盒及其检测方法。
技术介绍
血管炎是一组以血管的炎症与坏死为主要病理改变的炎性疾病，包括血管壁及血 管周围有炎细胞浸润，并伴有血管损伤，包括纤维素沉积、胶原纤维变性、内皮细胞及肌细 胞坏死，又称脉管炎。临床表现因受累血管的类型、大小、部位及病理特点不同而表现各异。 其常累及全身多个系统（例如皮肤、肾脏、肺、神经系统等），引起多系统、多脏器的功能障 碍，但也可局限于某一脏器。致病因素直接作用于血管壁的为原发性血管炎，在血管炎症基 础上产生一定的临床症状和体征者为血管炎疾病；由邻近组织炎症病变波及血管壁致病的 为继发性血管炎。 髓过氧化物酶（MP0)又称过氧化物酶，是一种重要的含铁溶酶体，存在于髓系细 胞(主要是中性粒细胞和单核细胞）的嗜苯胺蓝颗粒中，是髓细胞的特异性标志；它也是抗 中性粒细胞胞浆抗体（ANCA)的主要靶抗原，是嗜中性粒细胞杀灭吞噬微生物的重要物质， 抗MP0抗体属于ANCA的一种，主要针对中性粒细胞和单核粒细胞的细胞浆成分。64%的新 月体性肾小球肾炎可检测出抗MP0抗体，显微镜下多血管炎患者阳性率为60% ;变应性肉 芽肿性血管炎患者可检测出抗MP0抗体；韦格纳肉芽肿患者阳性率为24%，许多体内和体 外的研究数据都提示抗MP0抗体与血管炎的致病机制有关。 临床检测髓过氧化物酶抗体的常见方法包括放射免疫分析法以及间接免疫荧光 法等。但这些方法都存在着不足之处。放射免疫分析法是利用同位素标记的与未标记的抗 原，同抗体发生竞争性抑制反应，是一种在无须采用生物测定方法的情况下用于检测抗原 的实验室测定方法。该法极其敏感而又极其特异，但其却需要具备尖端复杂的设备，且成本 也不低。同时，还需要特殊的预防措施，因为其要用到放射性物质。因此，如今放射免疫分 析法在很大程度上已经被ELISA所取代。间接免疫荧光法的基本原理是用特异性的抗体与 载玻片中的抗原结合后形成抗原抗体复合物，继用荧光抗体与抗原抗体复合物结合，形成 抗原抗体荧光复合物。该方法在分析结果时无法根据分子量的大小区分非特异性识别；操 作相对复杂，需要价格较昂贵的荧光显微镜，只能进行定性检测，不能进行定量测定。
技术实现思路
为了克服现有技术的不足，本专利技术提供了一种具备较佳的准确度、精密度和稳定 性的试剂盒。本专利技术是通过如下技术方案来实现的： 一种髓过氧化物酶抗体（MPO-Ab)定量测定试剂盒，包括磁分离试剂、酶标记试剂、校 准品、清洗浓缩液、底物溶液以及稳定剂； 所述磁分离试剂的制备步骤如下： 一、配制磁微粒缓冲液，以配制1L为例： 1) 、量取800mL纯化水于容器中，称取Tris12.lg和NaCl8. 5g加入容器中，充分搅拌 至完全溶解； 2) 、称取BSA5g，量取新生牛血清50mL以及Proclin300 0. 2mL至容器中，充分搅拌至 完全溶解； 3) 、用4M的HC1调pH，控制pH在7. 9-8. 1之间； 4) 、最后用纯化水定容至1L，2-8°C保存待用。 二、制备磁分离试剂： 1) 、取100mg含羧基（C00H)活性基团的磁微粒，用0? 025mol/L，pH4. 5-5的MES缓冲 液10mL混悬； 2) 、加入0. 5-lmL浓度为10mg/mL的EDC水溶液，室温混悬30-60min; 3) 、磁分离，吸去上清，用0. 025mol/L，pH4. 5-5MES缓冲液10mL重悬； 4) 、加入 0? 02-0.lmg的MP0 抗原，室温混悬 120-240min; 5) 、磁分离，吸去上清，用磁微粒缓冲液重悬到lmg/mL，完成磁分离试剂的制备。 所述酶标记试剂的制备步骤如下： 一、配制酶标记试剂稀释液，以配制1L为例： 1) 、量取800mL纯化水于容器中，称取H印es6. 06g、NaCl8. 5g加入容器中，充分搅拌 至完全溶解； 2) 、称取BSA5g，Zncl20.1g、Proclin-300 0.2mL和MgCl20.1g于容器中中，充分搅拌 至完全溶解； 3) 、用4M的HC1调pH，控制pH在7. 5-8. 0之间； 4) 、最后用纯化水定容至1L，2-8°C保存待用。 二、碱性磷酸酶（ALP)与MP0抗体的偶联 1) 、取lmgMP0抗体，加入10mg/mL的偶联剂2-IT溶液2-4iiL，室温静置20min，加入 0.lm〇L/L的甘氨酸溶液10yL，室温静置5min;用G-25凝胶柱除盐，收集活化后的抗体， 2-8 °C保存备用； 2) 、取1. 5mg的ALP溶液，加入5mg/mL的SMCC溶液10-20iiL，室温静置30min，用G-25 凝胶柱除盐，收集活化后的ALP，2-8°C保存备用； 3) 、将上述活化的MP0抗体与活化的ALP混合，2-8 °C条件下静置12-24h，用 Superdex200凝胶纯化柱纯化偶联物，获得MP0抗体-ALP连接物浓溶液，2-8°C保存备用。 4)、将MP0抗体-ALP连接物浓溶液用酶标记物稀释液稀释到0. 02-0. 1yg/mL，完 成酶标记试剂的制备。 上述校准品的制备步骤如下： 一、配制校准品稀释液： 1) 、量取600mL纯化水于容器中，称取200mL新生牛血清加入容器中，充分搅拌混合均 匀； 2) 、称取磷酸氢二钾3. 4g、磷酸二氢钾0. 36g、Proclin300 0. 02mL加入容器中，充分 搅拌至完全溶解； 3) 、用4M的HC1调pH，控制pH在7. 0-7. 5之间； 4) 、最后用纯化水定容至1L，2-8°C保存待用。 二、配制校准品：用校准品稀释液将MP0抗体分别配制为0、5、20、50、150、300U/mL 共6个浓度点。 所述清洗浓缩液的制备步骤如下：以配制1L为例： 1) 、量取800mL纯化水于容器中，称取Tris12.lg和NaCl8. 5g于容器中，充分搅拌至 完全溶解； 2) 、称取Tween-20 5g、TritonX-100 (聚乙二醇辛基苯基醚）5g，充分搅拌，直至完 全混勻； 3) 、用4M的HC1调pH，控制pH在7. 5-8. 0之间； 4) 、最后定容1000mL，2-8°C保存。 所述底物溶液的制备步骤如下：以配制1L为例： 1) 、称取NaCl8.87g、Tris3.72g、Na2S03 0 . 00 3g和Proclin-300 0.4ml于 1L烧杯中； 2) 、用量筒量取600ml纯化水于1L烧杯中，充分搅拌，直至完全溶解，调pH，控制其范围 在7. 5 - 8. 0之间本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种髓过氧化物酶抗体(MPO‑Ab)定量测定试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括磁分离试剂、酶标记试剂、校准品、清洗浓缩液、底物溶液以及稳定剂。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：于大为，杨晓勇，
申请(专利权)人：北京中航赛维生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：北京;11
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