本发明专利技术涉及一种检测黄曲霉毒素B1的磁性免疫层析试剂盒，包括至少一个试纸条和一个超顺磁性复合粒子标记AFB1抗体溶液；所述试纸条由反应垫、样品垫1、样品垫2、吸水垫依次相互交错粘在底板上并覆盖透明塑料膜组装而成；其中反应垫上预包被有AFB1蛋白偶联物的检测线和预包被了可与AFB1抗体结合的抗抗体的质控线；所述超顺磁性复合粒子标记AFB1抗体为AFB1抗体和超顺磁性复合粒子以肽键共价结合形成的聚合体。本发明专利技术还涉及本发明专利技术试剂盒的制备方法及其用于检测食品及饲料中黄曲霉毒素B1的用途。本发明专利技术以磁性颗粒为标记物引入免疫层析技术中，检测快速、操作简便、线性范围广、灵敏度高。
【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术涉及一种检测黄曲霉毒素B1的磁性免疫层析试剂盒，包括至少一个试纸条和一个超顺磁性复合粒子标记AFB1抗体溶液；所述试纸条由反应垫、样品垫1、样品垫2、吸水垫依次相互交错粘在底板上并覆盖透明塑料膜组装而成；其中反应垫上预包被有AFB1蛋白偶联物的检测线和预包被了可与AFB1抗体结合的抗抗体的质控线；所述超顺磁性复合粒子标记AFB1抗体为AFB1抗体和超顺磁性复合粒子以肽键共价结合形成的聚合体。本专利技术还涉及本专利技术试剂盒的制备方法及其用于检测食品及饲料中黄曲霉毒素B1的用途。本专利技术以磁性颗粒为标记物引入免疫层析技术中，检测快速、操作简便、线性范围广、灵敏度高。【专利说明】一种检测黄曲霉毒素B1的磁性免疫层析试剂盒及制备方 法
本专利技术属于食品及饲料检测领域。具体而言，本专利技术涉及一种检测黄曲霉毒素B1 的磁性免疫层析试剂盒、其制备方法以及该试剂盒用于检测黄曲霉毒素B1的用途。
技术介绍
黄曲霉毒素主要是由黄曲霉菌（Aspergillusflavs)、寄生曲霉菌（Aspergillus parasiticus)和集蜂曲霉（Aspergillusnonius)产生的一组高毒和强致癌的次生代谢产 物。黄曲霉毒素对人和多种动物表现出剧烈毒性，且具有明显的致癌能力。在目前已知所 有的真菌毒素中，其毒性、致癌性、致突变性和致畸性均居首位。黄曲霉毒素B1(Aflatoxin B1，AFB1)广泛存在于各种农产品、食品和饲料中，严重污染花生、稻米、玉米、小麦等粮油产 品，给人们的身体健康和消费安全带来极大危害。在各种黄曲霉毒素中，尤以AFB1的毒性 最大、致癌力最强，危害最为严重。1993年被国际癌症研宄机构列为一类致癌物质。 目前AFB1检测技术主要包括仪器分析法与免疫分析技术。仪器分析法有高效液 相色谱荧光检测法，高效液相色谱-质谱联用法。这些分析方法具有较高的灵敏度和特异 性，但是需要复杂的提取净化步骤和较贵重复杂的仪器，样品处理繁琐费时，成本高，而且 需要有经过专门训练的专业人员来操作复杂的仪器设备。免疫分析技术主要有酶联免疫吸 附法和免疫层析技术。酶联免疫吸附法（ELISA)在AFB1检测中已经广泛应用，但是存在操 作程序复杂，容易出现假阳性的结果。免疫层析技术是基于抗体抗原相互结合原理的一种 色谱分析技术，兴起于上世纪九十年代，实验操作简单，仅需加样一个步骤，反应迅速。目前 应用的标记物主要有胶体金颗粒。胶体金颗粒可使检测线区域显示一定的颜色，从而实现 特异性的检测。但由于结果通常是人眼目测观察，容易受到观察者主观判断的影响，灵敏度 较低，结果准确度不高。 磁性免疫层析技术（MagneticImmunoChromatographicTest，MICT)是近年来出 现的一种定量检测技术，它以超顺磁微粒代替胶体金标记物来进行免疫层析，通过检测结 合在超顺磁微粒上的目标物来提供对生物样品的定量检测数据。该技术与传统技术相比具 有以下优势：灵敏度较目测法高10-1000倍；测量结果可在至少4个数量级的范围内呈线 性；检测仪器体积小，尺寸仅书本大小；标记物磁微粒由聚合物包被，不随时间而衰变，分 析结果可存档并重新检测。该技术弥补了传统免疫层析技术灵敏度低，只定性不能定量的 缺点，代表了当前食品检测技术的发展方向。 本专利技术目的是将磁性免疫层析技术应用在AFB1分析中，简化操作步骤，缩短检测 时间，提高检测灵敏度。
技术实现思路
本专利技术的目的之一是提供一种检测黄曲霉毒素B1的磁性免疫层析试剂盒。所述 试剂盒包括至少一个本专利技术的试纸条和一种超顺磁性复合粒子标记AFB1抗体溶液。 所述试纸条由反应垫、样品垫1、样品垫2、吸水垫依次相互交错地，例如相互交错 2mm，粘在底板上并在上层覆盖透明塑料膜组装而成，所述样品垫1与样品垫2连接，反应垫 一端连接样品垫2,另一端与吸水垫相连。所述硝酸纤维素膜预包被有相互分离的检测线和 质控线，所述检测线含有AFB1抗原，所述质控线含有能与所述AFB1抗体特异性结合的抗抗 体。 所述反应垫为硝酸纤维素膜，硝酸纤维素膜的长度可以为25mm-35mm，例如为 35mm〇 所述AFB1抗体为AFB1单克隆抗体或AFB1多克隆抗体，优选为AFB1单克隆抗体。 所述AFB1抗原为AFB1半抗原与载体蛋白的偶联物，所述AFB1半抗原为AFB1，所 述载体蛋白为牛血清白蛋白（BSA)或人血清蛋白或钥孔血蓝蛋白（KLH)或卵清蛋白，优选 为BSA〇 所述AFB1抗体特异性结合的抗抗体为羊抗鼠IgG抗体或兔抗鼠IgG抗体，优选为 羊抗鼠IgG抗体。 所述样品垫1为纤维素膜或玻璃纤维膜或玻璃纤维与纤维素的混合膜。 所述样品垫2为经样品垫处理液预处理的纤维素膜或玻璃纤维膜或玻璃纤维 与纤维素的混合膜。所述样品垫处理溶液例如为含有0.5% -2%BSA，1 % -5%蔗糖， 0? 5% -3% 曲拉通X-100 的 0? 01MPBS，pH7. 0-7. 6。 所述吸水垫为纤维素膜。 所述超顺磁性复合粒子标记AFB1抗体溶液为AFB1抗体与超顺磁性复合粒子以肽 键共价结合形成的聚合体溶解在保存液中形成的溶液。所述保存液例如为1%BSA，0. 5% Tween-20, 5%蔗糖的pH8. 5的硼酸缓冲液。 所述超顺磁性复合粒子为Fe304纳米粒子，粒径为50-300nm，优选为100-200nm。 所述超顺磁性复合粒子表面带有易于与AFB1抗体偶联的基团，这些基团可以是羧基、氨基 等基团，优选的基团是羧基基团。 本专利技术还涉及用于制备本专利技术的检测黄曲霉毒素B1的磁性免疫层析试剂盒的制 备方法，包括以下步骤： I.超顺磁性复合粒子标记AFB1抗体的制备： (1)将超顺磁性复合粒子、1-乙基_(3_二甲基氨基丙基）碳二亚胺（EDC)、N_羟 基丁二酰亚胺（NHS)和浓度例如为0.lM、pH= 4. 7的2-(N-吗啡啉）乙磺酸（MES)缓冲液 混匀，EDC与NHS的摩尔比为1 : 2,在37°C下反应大约30min，得到活化的磁性粒子； (2)将步骤⑴得到的活化的磁性粒子、AFB1抗体和浓度为50mMpH= 8. 5的硼 酸缓冲液混匀，37°C反应3h，得到偶联后磁性粒子反应液； (3)向步骤⑵中的反应液加入含有BSA的例如50mMpH= 8. 5的硼酸缓冲液， 使BSA终浓度为5%，在37°C下反应30min，得到含有封闭后磁性粒子的反应液；再将封闭 后的磁性粒子进行洗涤、保存，得到超顺磁性复合粒子标记AFB1抗体；所述洗涤液为50mM pH= 8. 5的硼酸缓冲液，所述保存液为1%BSA，0. 5%Tween-20,5%蔗糖的pH8. 5的硼酸 缓冲液； II.反应垫的处理：用例如含有1% -2%BSA的0? 01MPBS、pH7. 0-7. 6的包被缓 冲液将AFB1抗原及抗抗体分别稀释至例如0.l-2mg/mL的浓度，并通过定量喷液装置例如 以0. 8-1. 5 y L/cm的量分别将二者喷到硝酸纤维素膜上，分别形成检测线和质控线，AFB1抗原与抗体的间隔（即检测线和质控线之间的间隔）本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种检测黄曲霉毒素B1的磁性免疫层析试剂盒，包括：至少一个试纸条和一种超顺磁性复合粒子标记黄曲霉毒素B1抗体溶液。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：武会娟，管笛，亢子佳，贾迪，
申请(专利权)人：北京市理化分析测试中心，
类型：发明
国别省市：北京;11
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