一种D-二聚体和FDP复合质控品及其制备方法技术

本发明专利技术公开了一种D-二聚体和FDP复合质控品及其制备方法。所述D-二聚体和FDP复合质控品的制备方法为：在钙离子存在的条件下，在血浆中加入凝血酶，使血浆完全凝固；捣碎凝固的血浆，加入酶溶液进行酶解反应以降解纤维蛋白，反应完全后，破坏酶活性以终止酶解反应，得到D-二聚体和FDP复合母液；用保护液D-二聚体和FDP复合母液进行稀释，使复合母液中D-二聚体和FDP达到目标浓度，获得复合质控品。本发明专利技术一次性制备可同时用于D-二聚体和FDP两个项目测试的复合质控品，制备方法简单、生产成本低。复合质控品冻干后复溶均一性好，15分钟即混合均匀，可替代进口产品同时用于D-二聚体和FDP的质量控制。

【技术实现步骤摘要】
一种D-二聚体和FDP复合质控品及其制备方法
本专利技术属于体外诊断试剂
，尤其涉及一种D-二聚体和FDP复合质控品及 制备方法。
技术介绍
在血凝检验中，经常需要同时测定D-二聚体和纤维蛋白（原）降解产物（Fibrin/ FibringenDegradationPorducts，简称FDP)的含量。随着技术的发展，越来越多的血凝 检测通过自动化的血凝分析仪完成，为了监控仪器的运行情况，需要用到D-二聚体和纤维 蛋白（原）降解产物的质控品。 从人血浆中直接分离D-二聚体、纤维蛋白（原）降解产物（FDP)来源有限、产量 低。从动物血浆中制备D-二聚体、纤维蛋白（原）降解产物质控品虽可解决来源问题，但 往往体系均一性不高。 目前，已有D-二聚体质控品的报道。但没有同时含有D-二聚体和FDP的质控品， 因此，需要使用两种质控品，使用不便，且由于分别配制质控品的过程中的操作误差，影响 质控的准确度。
技术实现思路
基于此，为了克服上述现有技术的缺陷，本专利技术提供了D-二聚体和FDP复合质控 品及其制备方法。 为了实现上述专利技术目的，本专利技术采取了以下技术方案： -种D-二聚体和FDP复合质控品的制备方法，包括如下步骤： 1)在钙离子存在的条件下，在血浆中加入凝血酶，使血浆完全凝固； 2)捣碎凝固的血浆，加入酶溶液进行酶解反应以降解纤维蛋白，反应完全后，破坏 酶活性以终止酶解反应，得到D-二聚体和FDP复合母液； 3)用保护液对步骤2)得到的D-二聚体和FDP复合母液进行稀释，使复合母液中D-二聚体和FDP达到目标浓度，获得D-二聚体和FDP复合质控品。 优选地，步骤1)中，采用钙离子溶液实现钙离子条件，所述钙离子溶液为浓度为 0.lmol/L-0. 5mol/L的氯化钙溶液，所述氯化钙溶液的加入体积为血浆体积的2% -10%。 本专利技术大大提高了钙离子的浓度，但是减少了加入的体积量，提升产物中高值质控品浓度。 优选地，步骤1)中，所述凝血酶的用量为50IU-200IU/ml血浆。 优选地，步骤2)中，35-38°C过夜酶解反应完全后，再升温至50°C-100°C保持2-8 小时，破坏酶活性以终止酶解反应。 优选地，步骤2)中，所述酶溶液包括降解纤维蛋白的酶及其激活剂。降解纤维蛋 白的酶及其激活剂协同酶解，以控制降解反应，保证了获得D-二聚体和FDP稳定可控的浓 度。 优选地，所述降解纤维蛋白的酶为葡激酶，所述激活剂为纤溶酶原。 优选地，所述纤溶酶原的浓度为2mg/ml，所述葡激酶的浓度为lmg/ml，所述纤溶 酶原和葡激酶的体积用量比为1 :2。 优选地，步骤1)中，所述血浆为外购人血浆来源商品化的纤维蛋白原（FIB)质控 品或牛血浆，优选采用商品化的纤维蛋白原（FIB)质控品。当采用牛血清时，所述牛血浆的 制备方法为：将牛的新鲜血液与〇. 109M的柠檬酸三钠以体积比9:1混合，2000g-3000g离 心20-40分钟，取上层，即得。 优选地，步骤3)中，还包括D-二聚体和FDP达到目标浓度后冻干的步骤；步骤3) 中，所述保护液的成分为：磷酸盐1% -3% (w/v)，叠氮钠0.lg/1-lg/l，牛血清白蛋白20g/ L-50g/L，甘露醇 10g/L-30g/L。 本专利技术还提供了上述制备方法制备得到的D-二聚体和FDP复合质控品。 本专利技术还提供一种D-二聚体和FDP复合质控品，含有0. 1?5mg/L的D-二聚体 和 1 ?60mg/L的FDP。 与现有技术相比，本专利技术具有以下有益效果： 1、本专利技术的D-二聚体和FDP复合质控品的制备方法可一次性制备同时用于D-二 聚体和FDP两个项目测试的复合质控品，制备方法简单、生产成本低，每毫升血浆可制得 100毫升以上质控品；制备得到的复合质控品冻干后复溶均一性好，15分钟即混合均匀，可 替代进口产品同时用于D-二聚体和FDP的质量控制。 2、本专利技术的D-二聚体和FDP复合质控品的制备方法通过在血浆中加入凝血酶促 进凝血，凝固更完全，此时血浆中可溶的纤维蛋白原完全转化为不溶的纤维蛋白，以便后续 控制降解的效果更佳，达到稳定的降解可控目的； 3、本专利技术的D-二聚体和FDP复合质控品的制备方法采用商品化的人源血浆质控 品质量更稳定，生物风险低；采用牛血浆作为原材料则成本低廉，易于获取。 【附图说明】 图1为本专利技术实施例1的一种D-二聚体和FDP复合质控品的制备方法的流程示 意图。 【具体实施方式】 为了使本专利技术实现的技术手段、创作特征、达成目的与功效易于明白了解，下面结 合具体图示进一步阐述本专利技术。 参照图1，一种D-二聚体和FDP复合质控品的制备方法，包括如下步骤： 1)在钙离子存在的条件下，在血浆中加入凝血酶，室温下使血浆自然发生凝血过 程至完全凝固；此时血浆中可溶的纤维蛋白原完全转化为不溶的纤维蛋白。 血浆采用外购人血浆来源商品化的纤维蛋白原（FIB)质控品或牛血浆。优选采用 商品化的纤维蛋白原（FIB)质控品。当采用牛血浆时，牛血浆来自动物屠宰场的新鲜血液， 制备方法为将血液与〇. 109M的柠檬酸三钠以9:1混合，2000g-3000g离心30分钟，上层即 为牛血浆。 钙离子溶液为0.lmol/L-0. 5mol/L的氯化钙试剂，钙离子溶液的加入体积为血浆 体积的2% -10%。凝血酶用量为50IU-200IU/ml血浆。 2)捣碎凝固的血浆，加入可以降解纤维蛋白的酶溶液，混合均匀后37°C过夜进行 酶解反应，反应完全后，升高温度至50°C-100°C，静置2-8小时彻底破坏酶活性以终止酶解 反应，得到D-二聚体和FDP复合母液； 降解纤维蛋白的酶溶液至少包含纤溶酶原和葡激酶，纤溶酶原的终浓度不低于 1μg/ml血浆。纤溶酶原的活性单位优选10万IU/ml-40万IU/ml。葡激酶作为纤溶酶原 的激活剂，其活性单位优选50万IU/ml-350万IU/ml。 3)用保护液对步骤2)得到的D-二聚体和FDP复合母液进行稀释，使用D-二聚 体和FDP检测试剂盒对稀释后的质控液进行测试，调整稀释比例使复合母液中D-二聚体和 FDP达到目标浓度，分装为小瓶后进行冻干，获得D-二聚体和FDP复合质控品。保护液的 成分包括磷酸盐1% -3% (w/v)，叠氮钠0·lg/1-lg/l，牛血清白蛋白20g/L-50g/L，甘露醇 10g/L-30g/L。该组分的保护液优选用于冻干，本领域技术人员能够理解，如果质控液不进 行冻干，可以采用其他组分的保护液，常规的具有稳定蛋白作用的保护液都可以用于本申 请的实施方式中，例如〇.lmol/L的PBS缓冲液（pH7. 0)、0. 9%的氯化钠、10%的牛血清白蛋 白。 实施例1一种D-二聚体和FDP复合质控品的制备方法 1)氯化钙溶液配制：称取0. 22g CaCl2. 2H20,加入5ml纯化水，搅拌使其溶解，得到 0· 3mol/L的氯化妈溶液。 纤维蛋白凝块准备：取2个批号的外购FIB质控品各10支，每支分别加入Iml 纯化水复溶15分钟，中本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种D‑二聚体和FDP复合质控品的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：1)在钙离子存在的条件下，在血浆中加入凝血酶，使血浆完全凝固；2)捣碎凝固的血浆，加入酶溶液进行酶解反应以降解纤维蛋白，反应完全后，破坏酶活性以终止酶解反应，得到D‑二聚体和FDP复合母液；3)用保护液对步骤2)得到的D‑二聚体和FDP复合母液进行稀释，使复合母液中D‑二聚体和FDP达到目标浓度，获得D‑二聚体和FDP复合质控品。

【技术特征摘要】
1. 一种D-二聚体和FDP复合质控品的制备方法，其特征在于，包括如下步骤： 1) 在钙离子存在的条件下，在血浆中加入凝血酶，使血浆完全凝固； 2) 捣碎凝固的血浆，加入酶溶液进行酶解反应以降解纤维蛋白，反应完全后，破坏酶活 性以终止酶解反应，得到D-二聚体和FDP复合母液； 3) 用保护液对步骤2)得到的D-二聚体和FDP复合母液进行稀释，使复合母液中D-二 聚体和FDP达到目标浓度，获得D-二聚体和FDP复合质控品。2. 根据权利要求1所述的D-二聚体和FDP复合质控品的制备方法，其特征在于，步骤 1)中，采用钙离子溶液实现钙离子条件，所述钙离子溶液为浓度为〇. lmol/L-O. 5mol/L的 氯化钙溶液，所述氯化钙溶液的加入体积为血浆体积的2% -10%。3. 根据权利要求1所述的D-二聚体和FDP复合质控品的制备方法，其特征在于，步骤 1) 中，所述凝血酶的用量为50IU-200IU/ml血浆。4. 根据权利要求1所述的D-二聚体和FDP复合质控品的制备方法，其特征在于，步骤 2) 中，35-38°C过夜酶解反应完全后，再升温至50°C _100°C保持2-8小时，破坏酶活性以终 止酶解反应。5. 根据权利要求1所述的D-二聚体和FDP复合质控品的制备方法，其特征在于，步骤 2...

【专利技术属性】
技术研发人员：艾峰，肖国伟，潘仁斌，
申请(专利权)人：上海长岛生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：上海;31