检测人PGI蛋白的荧光免疫层析试纸及其制备方法技术

本发明专利技术涉及检测人PGI蛋白的荧光免疫层析试纸及其制备方法。所述试纸通过双抗体夹心法检测人PGI蛋白，所述双抗体夹心法采用标记有荧光微球的第一PGI单克隆抗体作为捕获抗体，所述第一PGI单克隆抗体来源于序列表SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所述的序列中的一者；并且所述双抗体夹心法采用第二PGI单克隆抗体作为检测抗体，所述第二PGI单克隆抗体来源于序列表SEQ IDNO.1和SEQ ID NO.2所述的序列中的另一者。本发明专利技术的荧光免疫层析试纸操作简便、快速、检测范围宽、特异性高、灵敏度好。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于多肽化学和免疫学领域，具体涉及人胃蛋白酶原I（PGI）抗原表位肽、用该抗原表位肽制备的PGI特异性抗原和相应的单克隆抗体或多克隆抗体、所述抗体在制备人PGI体外诊断试剂盒上的用途，人PGI体外诊断试剂盒，以及一种用于定量检测待测物中人PGI蛋白的荧光免疫层析试纸及其制备方法。
技术介绍
胃蛋白酶原（PG）是胃液中胃蛋白酶的无活性前体。人胃蛋白酶原按其电泳迁移率由快至慢，可分为PG1至PG7七种同工酶原，并且根据其生化性质、免疫原性、细胞来源以及组织内分布可分为PGI和PGII两个亚群。七种同工酶原中的PG1至PG5免疫原性近似，称为胃蛋白酶原I（PGI），其主要由胃腺的主细胞和黏液颈细胞分泌；PG6至PG7被称为胃蛋白酶原II（PGII），除了由胃体和胃底黏膜的泌酸腺的主细胞分泌外，泌酸腺的黏液颈细胞、贲门腺和胃窦的幽门腺的黏液细胞以及十二指肠上段的Brunner腺也能产生PGII。胃几乎是PG的唯一来源，并且在分泌阶段的分泌量会发生变化。血清PGI和PGII反映了胃粘膜不同部位的分泌功能。合成后的PG大部分进入胃腔，在酸性胃液作用下活化成胃蛋白酶，只有少量PG（约1%）透过胃黏膜毛。因此，血清PG浓度可以反映其分泌水平。正常人血清中的PGI是PGII的6倍，当胃黏膜发生病理变化时，血清PG含量也随之发生改变。血清PG含量与幽门螺杆菌（HP）感染、慢性胃炎、胃癌等相关。在不同胃部疾病中，血清PGI、PGII和PGI/PGII的值发生相应变化，其升高、降低还是不变并不一致，作为诊断或治疗结果指标的灵敏度和特异度也各不相同。因此，对于不同胃部疾病，血清PGI、PGII和PGI/PGII的值也有不同的判断标准。PGI是检测胃泌酸腺（胃底腺）细胞功能的指针，胃酸分泌增多，则PGI升高；胃酸分泌减少或胃粘膜腺体萎缩，则PGI降低。例如，在胃酸分泌过多的浅表性胃炎和幽门螺杆菌（HP）感染的胃炎中，PGI的分泌会增加；而在慢性严重萎缩性胃炎中，当主细胞减少时PGI含量下降。高浓度的PGI还作为十二指肠溃疡及并发症危险性的亚临床指征，并且还可以作为观察HP感染（幽门螺杆菌）根除治疗疗效的一个指标。胃癌是我国常见的恶性肿瘤之一，其病死率居各种恶性肿瘤之首，其早期诊断、早期治疗成为提高患者生存质量、降低病死率的唯一途径。国内外学者对胃癌患者血清PG变化作了大量的研究发现：当患胃癌时，血清PGI水平降低，PGII水平基本保持正常或升高，进而，测定血清PGI的水平和PGI/PGII的比值有助于胃癌的鉴别诊断，过低的PGI和PGI/PGII应警惕早期胃癌。由于血清PG的含量直接反映胃黏膜的功能，因此胃癌患者血清PGI水平明显下降，表明胃癌患者胃黏膜分泌能力下降。80％以上的胃癌伴有萎缩性胃炎，而萎缩性胃炎可导致胃黏膜主细胞丢失，从而影响其分泌功能；胃癌患者血清PGI水平明显下降与胃癌患者胃黏膜萎缩、肠化从而分泌降低有关。因此血清PGI及PGI/PGII明显下降对监测早期胃癌具有重要的临床意义，可有效应用于胃癌高发区人群的初步筛查。PG检测作为非侵入性方法，可降低胃病患者或胃癌高危人群检查的痛苦，并且简便、经济，具有重大意义。检测血清中的PGI水平的最理想的方法是免疫测定。因此，寻找合适的具有免疫原性的PGI抗原表位肽、制备特异性的PGI抗原及抗体即成为了重点。荧光免疫层析方法测血液中的待测物操作简便、快速，只需10分钟就能完成样品检测，并且检测范围宽，灵敏度好，能够迅速及时地帮助诊断病情，监测预后。中国专利申请No.200910117820.8公开了一种荧光微球免疫层析试纸条的制备方法及定量检测方法；中国专利申请No.200910047352.1公开了一种荧光免疫层析试纸及其制备方法和应用。然而，目前还没有针对人PGI蛋白的荧光免疫层析试纸。
技术实现思路
为解决上述现有技术中所存在的问题，本专利技术提供了一种用于定量检测待测物中人PGI蛋白的荧光免疫层析试纸及其制备方法。具体而言，本专利技术提供了：一种用于定量检测待测物中人PGI蛋白的荧光免疫层析试纸，该试纸通过双抗体夹心法检测所述人PGI蛋白，其中：所述双抗体夹心法采用标记有荧光微球的第一PGI单克隆抗体作为捕获抗体，所述第一PGI单克隆抗体来源于人PGI抗原表位肽(1)和(2)中的一者；并且所述双抗体夹心法采用第二PGI单克隆抗体作为检测抗体，所述第二PGI单克隆抗体来源于人PGI抗原表位肽(1)和(2)中的另一者；所述人PGI抗原表位肽(1)和(2)分别为：(1)Tyr-Lys-Val-Pro-Leu-Ile-Arg-Lys-Lys-Ser-Leu-Arg-Arg；(2)Tyr-Lys-Asn-Phe-Thr-Val-Phe-Asp-Arg-Ala-Asn-Asn-Gln。优选地，所述第一PGI单克隆抗体是由第一PGI抗原制备而成的，该第一PGI抗原是通过使所述人PGI抗原表位肽(1)和(2)中的一者与载体蛋白偶联制备而成的；并且所述第二PGI单克隆抗体是由第二PGI抗原制备而成的，该第二PGI抗原是通过使所述人PGI抗原表位肽(1)和(2)中的另一者与载体蛋白偶联制备而成的。优选地，所述荧光微球的粒径为320nm至400nm。优选地，所述荧光微球上的荧光物质为异硫氰酸荧光素、四乙基罗丹明、四甲基异硫氰酸罗丹明或X-罗丹明，其中优选为X-罗丹明；所述荧光微球的微球材料为聚苯乙烯、聚甲基丙烯酸甲酯或甲基丙烯酸甲酯的共聚物。优选地，所述荧光微球的激发波长为350～600nm，优选为390nm；发射波长为500～700nm，优选为615nm。优选地，所述荧光免疫层析试纸具有底板，并且在该底板上沿使用时的层析方向依次以接触方式设置有：样品垫、结合垫、反应膜、吸水滤纸，所述结合垫包被有所述的标记有荧光微球的第一PGI单克隆抗体，所述反应膜包括检测区和质控区，所述检测区包被有所述第二PGI单克隆抗体，所述质控区包被有能与所述的标记有荧光微球的第一PGI单克隆抗体特异性结合的抗抗体。优选地，所述反应膜为在大于550nm的波长下基本上不发荧光的硝酸纤维素膜。优选地，所述底板基本上不具有荧光性质。优选地，所述抗抗体为羊抗鼠IgG单克隆抗体或兔抗鼠IgG单克隆抗体，其中优选为羊抗鼠IgG单克隆抗体。本发本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于定量检测待测物中人PGI蛋白的荧光免疫层析试纸，该试纸通过双抗体夹心法检测所述人PGI蛋白，其中：所述双抗体夹心法采用标记有荧光微球的第一PGI单克隆抗体作为捕获抗体，所述第一PGI单克隆抗体来源于人PGI抗原表位肽(1)和(2)中的一者；并且所述双抗体夹心法采用第二PGI单克隆抗体作为检测抗体，所述第二PGI单克隆抗体来源于人PGI抗原表位肽(1)和(2)中的另一者；所述人PGI抗原表位肽(1)和(2)分别为：(1)Tyr‑Lys‑Val‑Pro‑Leu‑Ile‑Arg‑Lys‑Lys‑Ser‑Leu‑Arg‑Arg；(2)Tyr‑Lys‑Asn‑Phe‑Thr‑Val‑Phe‑Asp‑Arg‑Ala‑Asn‑Asn‑Gln。

【技术特征摘要】
1.一种用于定量检测待测物中人PGI蛋白的荧光免疫层析试
纸，该试纸通过双抗体夹心法检测所述人PGI蛋白，其中：
所述双抗体夹心法采用标记有荧光微球的第一PGI单克隆抗体
作为捕获抗体，所述第一PGI单克隆抗体来源于人PGI抗原表位肽
(1)和(2)中的一者；并且
所述双抗体夹心法采用第二PGI单克隆抗体作为检测抗体，所
述第二PGI单克隆抗体来源于人PGI抗原表位肽(1)和(2)中的另一
者；
所述人PGI抗原表位肽(1)和(2)分别为：
(1)Tyr-Lys-Val-Pro-Leu-Ile-Arg-Lys-Lys-Ser-Leu-Arg-Arg；
(2)Tyr-Lys-Asn-Phe-Thr-Val-Phe-Asp-Arg-Ala-Asn-Asn-Gln。
2.根据权利要求1所述的荧光免疫层析试纸，其中所述第一PGI
单克隆抗体是由第一PGI抗原制备而成的，该第一PGI抗原是通过
使所述人PGI抗原表位肽(1)和(2)中的一者与载体蛋白偶联制备而成
的；并且
所述第二PGI单克隆抗体是由第二PGI抗原制备而成的，该第
二PGI抗原是通过使所述人PGI抗原表位肽(1)和(2)中的另一者与载
体蛋白偶联制备而成的。
3.根据权利要求1所述的荧光免疫层析试纸，其中所述荧光微
球的粒径为320nm至400nm。
4.根据权利要求1所述的荧光免疫层析试纸，其中所述荧光微
球上的荧光物质为异硫氰酸荧光素、四乙基罗丹明、四甲基异硫氰酸
罗丹明或X-罗丹明，其中优选为X-罗丹明；所述荧光微球的微球材
料为聚苯乙烯、聚甲基丙烯酸甲酯或甲基丙烯酸甲酯的共聚物。
5.根据权利要求1所述的荧光免疫层析试纸，其中所述荧光微
球的激发波长为350～600nm，优选为390nm；发射波长为500～700nm，
优选为615nm。
6.根据权利要求1所述的荧光免疫层析试纸，其中所述试纸具
有底板，并且在该底板上沿使用时的层析方向依次以接触方式设置
有：样品垫、结合垫、反应膜、吸水滤纸，所述结合垫包被有所述的
标记有荧光微球的第一PGI单克隆抗体，所述反应膜包括检测区和
质控区，所述检测区包被有所述第二PGI单克隆抗体，所述质控区
...

【专利技术属性】
技术研发人员：朱建安，
申请(专利权)人：朱建安，
类型：发明
国别省市：广东;44