一种人参中人参总皂苷的分离纯化方法技术

本发明专利技术公开了一种人参中人参总皂苷的分离纯化方法，属于中药领域，分离方法由以下步骤构成：样品溶液的制备、大孔树脂分离纯化、弱碱性阴离子交换树脂纯化；本发明专利技术方法简单易行，得到的人参总皂苷含量高、颜色浅适宜成为中药注射剂及冻干粉等剂型的原料，得到的人参皂苷有很好的生理活性。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于中药领域，具体涉及中药有效成分的分离方法。
技术介绍
人参为五加科多年生草本植物。多秋季采挖，洗净经晒干或烘干。栽培的俗称园 参;播种在山林野生状态下自然生长的称林下山参，习称籽海。性甘、味苦。归脾、 肺、心、肾经，具有大补元气，复脉固脱，补脾益肺等功效。 迄今为止从人参药材中分离出人参皂苷46种，人参皂苷是人参的主要活性成分， 人参皂苷Rg3具有很强拟制肿瘤细胞增殖作用，以其为主要成分制成的参一胶囊是一种抗 癌新药；人参皂苷Rh2也有抗肿瘤活性；Rgl :可快速缓解疲劳、改善学习记忆、延缓衰老，具 有兴奋中枢神经作用、抑制血小板凝集作用；Rbl :西洋参（花旗参）的含量最多，具影响动 物睾丸的潜力，亦会影响小鼠的胚胎发育，具有增强胆碱系统的功能，增加乙酰胆碱的合成 和释放以及改善记忆力作用；Rb2 :具有DNA，、RNA的合成促进作用、脑中枢调节具有抑制 中枢神经，降低细胞内钙，抗氧化，清除体内自由基和改善心肌缺血再灌注损伤等作用；Rc : 是一种人参中的固醇类分子。具有抑制癌细胞的功能，可增加精虫的活动力；Re :抑制中枢 神经，促进DNA，RNA合成，升高血浆皮质酮的作用，扩张血管；Rf、Rd减少乙酰胆碱引起的豚 鼠离体子宫的收缩。 人参药材的分离纯化大部分都是用大孔吸附树脂进行分离、富集、纯化，但是大孔 吸附树脂纯化后得到的人参总皂苷含量低，颜色深，不易于制成中药注射剂或冻干粉。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供。 本专利技术所采用的技术方案是： ，由以下步骤构成： A、 样品溶液的制备：取人参药材粉碎，乙醇浸泡，乙醇回流提取三次，合并上述提取液， 减压回收乙醇，过滤，浓缩，即得样品溶液； B、 大孔树脂分离纯化：称取处理好的大孔吸附树脂装柱，取样品溶液上样，流速为 2?3BV/h，然后依次用pH8-9的氨水溶液、20%乙醇洗脱杂质，再用80%的乙醇3 BV洗脱，收 集洗脱液I; C、 弱碱性阴离子交换树脂纯化：取步骤B中所得洗脱液上弱碱性阴离子交换树脂柱， 收集洗脱液II，浓缩至稠膏，减压干燥，即得。 作为优选方式，所述步骤B中大孔吸附树脂为AB-8型大孔吸附树脂，AB-8型大孔 吸附树脂与生药质量比为2. 5:1。 作为优选方式，所述步骤C中树脂与药材质量比为1:1. 5,阴离子柱子径高比=1 : 10,流速为3?4BV。 作为优选方式，所述步骤C中弱碱性阴离子交换树脂为D301。 作为优选方式，人参总皂苷的分离纯化方法由以下步骤构成： A、 样品溶液的制备：取人参药材粉碎，乙醇浸泡lh，第一次10倍量70%乙醇回流提取1 小时；第二次8倍量70%乙醇回流提取1小时；第三次8倍量70%乙醇回流提取0. 5小时， 合并上述提取液，减压回收乙醇，过滤，浓缩，即得样品溶液； B、 大孔树脂分离纯化：称取处理好的AB-8型大孔吸附树脂装柱，AB-8型大孔吸附树脂 与生药质量比为2. 5:1，取样品溶液上样，流速为2?3BV/h，然后加3 BV pH8-9的氨水溶液、 5 BV 20%乙醇洗脱杂质，再用80%的乙醇3 BV洗脱，收集洗脱液I ; C、 弱碱性阴离子交换树脂纯化：取步骤B中所得洗脱液I上D301弱碱性阴离子交换树 脂柱，药材与树脂质量比为1. 5:1，阴离子柱子径高比=1 :10,流速为3~4BV，收集洗脱液II， 浓缩至稠膏，60°C减压干燥，即得。 为了验证本方法的效果，做了以下实验 1. 试剂与药材大孔吸附树脂AB-8,弱碱性阴离子交换树脂由沧州宝恩吸附材料科技 有限公司提供。甲醇、乙腈为色谱醇，水为超纯水。人参对照品：人参皂苷RgpR^RLRbp Rc、Rb2、Rd购于中国药品生物药品检验所(供含量测定用）。人参药材产地：集安、文浩。 2?分离纯化 2. 1样品溶液的制备 取人参药材Ikg粉碎，放入烧瓶中；加70%浸泡lh。第一次10倍量70%乙醇回流提取 1小时；第二次8倍量70%乙醇回流提取1小时；第三次8倍量70%乙醇回流提取0. 5小时。 合并上述提取液，过滤，减压回收乙醇，至无乙醇味，加水定容至4000ml (浓度0. 25g/ml)， 冷藏24h ;冷藏液取出，放置常温，过滤，过滤液加水定容5000ml，浓度0. 2g/ml备用。 2. 2大孔树脂柱处理：取AB-8型大孔吸附树脂2. 5kg即（1:2. 5)，用95%乙醇浸泡， 搅拌，去除液面漂浮物。然后将大孔树脂装入柱底垫纱布的玻璃柱中，用95%的乙醇洗涤， 直至流出液加入等量的水不浑浊为止。用水洗脱大孔树脂柱至无醇味，备用。 2. 3弱碱性阴离子交换树脂D301的处理： (1)弱碱性取阴离子交换树脂D301 lkg，用4~5%氢氧化钠溶液缓慢流过树脂，用量为 树脂体积的:T5倍，每小时1. 5倍体积流过。 (2)用去离子水冲洗，出水pH值为中性。 (3)用4~5%盐酸溶液缓慢流过阴离子交换树脂，用量为树脂体积的3~5倍，每小时 1. 5倍体积流过。 (4)用去离子水冲洗，出水pH值为6~7。 (5)用4~5%氢氧化钠溶液缓慢流过阴离子交换树脂，用量为树脂体积的3~5倍，每 小时1. 5倍体积流过。 (6)用去离子水冲洗，出水pH值为中性。 2. 4上样：取浓缩液通过处理好的AB-8大孔吸附树脂柱，控制流速2~3倍树脂体 积/h，流出液弃去。加pH8~9的氨水溶液3倍量柱体积洗脱，再用20%乙醇5倍量柱体积， 洗脱流出液弃去。加80%的乙醇3倍量柱体积洗脱，收集流出液。 2. 5上弱碱性阴离子交换树脂：取AB-8树脂流出液上弱碱性阴离子离子交换树脂 柱，(树脂：药材=1:1. 5)，阴离子柱子径高比=1:10,流速为3~4倍柱体积，收集流出液，浓缩 至稠膏，60°C减压干燥，即得，为淡黄色粉末。 3人参皂苷的含量测定 3. 1对照品的配制 3. I. I HPLC对照品的配制：精密称取人参皂苷对照品!^、!^、!^、!^、!^、!^、!^适量， 用甲醇配成浓度分别为0. 2mg/ml的混标溶液。 3. I. 2 UV对照品的制备：精密称取人参皂苷对照品Re适量，用甲醇配成浓度为 0.2mg/ml的溶液，备用。 3. 2样品的制备：精密称取2. 5所得人参皂苷30. Omg，用甲醇定容至IOml容量瓶 中，备用。 3. 3人参皂苷含量测定色谱条件：流动相乙腈-水梯度洗脱色谱柱为Waters Symmetry C18 (4. 6mmx250mm，5 u m)，检测波长 203nm ;流速 lml/min ;柱温 30°C。本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种人参中人参总皂苷的分离纯化方法，其特征在于由以下步骤构成：A、样品溶液的制备：取人参药材粉碎，乙醇回流提取三次，合并上述提取液，减压回收乙醇，过滤，浓缩，即得样品溶液；B、大孔树脂分离纯化：称取处理好的大孔吸附树脂装柱，取样品溶液上样，流速为2~3BV/h，然后依次用pH8‑9的氨水溶液、20%乙醇洗脱杂质，再用80%的乙醇3 BV洗脱，收集洗脱液Ⅰ；C、弱碱性阴离子交换树脂纯化：取步骤B中所得洗脱液Ⅰ上弱碱性阴离子交换树脂柱，收集洗脱液Ⅱ，浓缩至稠膏，减压干燥，即得。

【技术特征摘要】
1. 一种人参中人参总皂苷的分离纯化方法，其特征在于由以下步骤构成： A、 样品溶液的制备：取人参药材粉碎，乙醇回流提取三次，合并上述提取液，减压回收 乙醇，过滤，浓缩，即得样品溶液； B、 大孔树脂分离纯化：称取处理好的大孔吸附树脂装柱，取样品溶液上样，流速为 2?3BV/h，然后依次用pH8-9的氨水溶液、20%乙醇洗脱杂质，再用80%的乙醇3 BV洗脱，收 集洗脱液I; C、 弱碱性阴离子交换树脂纯化：取步骤B中所得洗脱液I上弱碱性阴离子交换树脂 柱，收集洗脱液II，浓缩至稠膏，减压干燥，即得。2. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述步骤B中大孔吸附树脂为AB-8型大孔 吸附树脂，AB-8型大孔吸附树脂与生药质量比为2. 5:1。3. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述步骤C中树脂与药材质量比为1:1. 5， 阴离子柱子径高比=1 :1〇,流速为3?4BV。4. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于所...

【专利技术属性】
技术研发人员：蔡艳，宋剑，贾继明，王贵金，裴彩云，
申请(专利权)人：河北以岭医药研究院有限公司，
类型：发明
国别省市：河北;13