共价连接的抗原‑抗体缀合物制造技术

本文中报道了一种包含抗原和与所述抗原特异性结合的抗体的缀合物，其中共价键在抗原和抗体的CDR2中的氨基酸残基之间形成；报道了一种包含在重链CDR2中的氨基酸位置53处(根据Kabat)是半胱氨酸残基的抗体；及其用途。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】共价连接的抗原-抗体缀合物 本文中报道了包含抗原和抗体的复合物，其中该复合物的组分通过单键彼此共价 连接。还报道了用于产生该共价复合物的方法及其用途。 专利技术背景 多肽治疗性应用的主要瓶颈是它们的溶解度、体内稳定性有限、血清半寿期短和 从血流快速清除。 报道了不同方案以解决这些缺点。然而，这些技术均未提供在不遭遇免疫原性风 险或生物学活性潜在丧失的情况下能够调节药物代谢动力学（PK)的稳健和通用平台。 -个改善治疗性多肽的PK/稳定性和生物物理特性的方法是使它们与使多肽稳 定化、使其维持溶解状态并延长其半寿期的实体融合。这类实体的例子是人血清白蛋白或 人免疫球蛋白Fc区。这种方法适用于由天然存在的氨基酸残基组成并且在不丧失其生物 学活性的情况下在其C端或N端耐受修饰的许多线形多肽。呈环状、U型、含有非天然氨基 酸残基或额外修饰的多肽不能作为融合多肽重组产生。然而，这类多肽可能是治疗性应用 所需的选择，因为在蛋白酶稳定性、活性和特异性方面而言，它们经常优于'正规的'线形 肽。 一个改善治疗性多肽的PK/稳定性和生物物理特性的方法（其也可以适用于呈环 状、U型或含有非天然结构物的那些多肽）是与聚合物化学或酶促缀合，例如通过PEG化或 HES化（hesylation)。但是，这类修饰经常导致多肽的生物学活性显著降低并且在某些情 况下可能是安全问题或毒性问题的原因。 用于稳定治疗性多肽或调节其PK的大多数现有化学偶联技术的主要缺点是它们 的复杂性。除了化学偶联步骤外，这些方法还在许多情况下产生多肽衍生物的混合物，所述 多肽衍生物以不确定的化学计量和/或在不确定的位置与调节PK的实体连接。另外，目前 使用的多肽修饰技术经常导致治疗性多肽的生物学活性剧烈降低或甚至完全丧失。此外， 难以预测化学缀合物的药理学特性和/或可能的降解途径。 US 5,804,371报告了半抗原标记的肽及其在免疫检测方法中的用途。洋地黄 毒苷标记的肽（缓激肽）及其对发炎组织中缓激肽的化学发光酶免疫测定法的适用性由 Decarie A?等人（P印tides 15(1994)511-518)报道。 在WO 2004/065569中报道了多功能抗体。 专利技术概沭 已经发现通过将半抗原化的化合物共价偶联至抗半抗原抗体，可以实现该化合物 的稳定化和PK性能改善。 如本文中报道的一个方面是一种含抗原和与所述抗原特异性结合的抗体的缀合 物，其特征在于该抗原和该抗体的CDR2中的氨基酸残基之间的共价键，其中根据Kabat确 定 CDR2。 已经发现一旦用包含用于该抗原和该抗体的⑶R2中的氨基酸残基之间形成共价 键的功能残基的通用接头衍生化，则任何抗原可以用于如本文中报道的缀合物和方法中。 官能团在通用接头中的位置具有下述优点：不必需再工程化在抗体的CDR2中的官能团的 合成及其位置。 如本文中报道的一个方面是一种含半抗原化化合物和与所述半抗原化化合物的 半抗原特异性结合的抗体（抗半抗原抗体）的缀合物，其特征在于该半抗原化化合物和该 抗体的CDR2中的氨基酸残基之间的共价键，其中根据Kabat确定CDR2。 在全部方面的一个实施方案中，⑶R2是重链⑶R2。 在全部方面的一个实施方案中，半抗原化化合物包含半抗原、任选的接头和有效 载荷。 在全部方面的一个实施方案中，共价键在半抗原化化合物的接头和抗体的CDR2 中的氨基酸残基之间。 在全部方面的一个实施方案中，共价键在半抗原化化合物中的官能团和抗体的 CDR2中的氨基酸残基之间。 在一个实施方案中，官能团处于半抗原化化合物的接头中。 在如本文中报道的全部方面的一个实施方案中，共价键在抗体的重链CDR2中的 半胱氨酸残基和抗原中的官能团或半抗原化化合物中的官能团之间。 在一个实施方案中，根据Kabat的重链可变域编号法，抗体的重链⑶R2中的半胱 氨酸残基在第52位置、或第52a位置、或第52b位置、或第52c位置或第52d位置或第53 位置处。 在一个实施方案中，根据Kabat的重链可变域编号法，抗体的重链⑶R2中的半胱 氨酸残基在第52a位置、或第52b位置、或第52c位置或第53位置处。 在一个实施方案中，根据Kabat的重链可变域编号法，抗体的重链⑶R2中的半胱 氨酸残基在第52b位置或在第53位置处。 在全部方面的一个实施方案中，共价键是二硫键。 在全部方面的一个实施方案中，该抗体是包含针对第一抗原或第一半抗原的第一 结合特异性和针对第二抗原或第二半抗原的第二结合特异性的双特异性抗体，其中第一抗 原/半抗原与第二抗原/半抗原不同。 在一个实施方案中，该抗体包含针对第一半抗原的第一结合特异性和针对第二半 抗原的第二结合特异性。 在一个实施方案中，抗体包含针对半抗原的第一结合特异性和针对（非半抗原 的）抗原的第二结合特异性。 在一个实施方案中，该（非半抗原的）抗原是细胞表面抗原。在一个实施方案中， 细胞表面抗原是肿瘤相关抗原。 在一个实施方案中，双特异性抗体是全长抗体。在一个实施方案中，双特异性 抗体的一条重链包含穴突变（hole mutation)并且相应的另一条链包含隆突突变（knob mutation)〇 在全部方面的一个实施方案中，有效载荷选自结合部分、标记部分和生物学活性 部分。 在全部方面的一个实施方案中，该抗体是全长抗体。 在全部方面的一个实施方案中，该抗体是人源化或人抗体。 在一个实施方案中，该抗体的恒定区是IgGl亚类或IgG4亚类。 在一个实施方案中，抗体具有IgGl亚类的恒定区，其中根据Kabat的EU索引编 号，所述恒定区在第234和235位置处具有丙氨酸并且在第329位置处具有甘氨酸。 在一个实施方案中，抗体具有IgG4类的恒定区，其中根据Kabat的EU索引编号， 所述恒定区具有在第228位置处的脯氨酸、在第235位置处的谷氨酸和在第329位置处的 甘氨酸。 在如本文中报道的全部方面的一个实施方案中，该抗体是抗体的片段。在一个实 施方案中，片段是Fab或（Fab) 2。 在全部方面的一个实施方案中，缀合物确切地包含一个共价键/重链⑶R2。 在如本文中报道的全部方面的一个实施方案中，该抗原或半抗原化化合物包含反 应基团，所述反应基团可以与抗体的CDR2中的半胱氨酸残基的巯基形成共价键。在一个实 施方案中，反应基团是巯基、或马来酰亚胺或卤代乙酰基。 在如本文中报道的全部方面的一个实施方案中，共价键是二硫键并且且它在不添 加氧化还原活性剂的情况下形成。 在全部方面的一个实施方案中，缀合物包含治疗部分或可检测部分。在一个实施 方案中，治疗部分或可检测部分共价缀合至抗原或半抗原。 在一个实施方案中，抗原或半抗原缀合至由5至60个氨基酸残基组成的多肽。在 一个实施方案中，该多肽包含10至50个氨基酸残基。在一个实施方案中，该多肽包含12 至40个氨基酸残基。在一个实施方案中，该多肽包含12至30个氨基酸残基。 在一个实施方案中，抗原或半抗原缀合至可检测标记物。 在一个实施方案中，抗原或半抗原缀合至多肽，或缀合至可检测标记物，或经接头 缀合至有效载荷。在一个实施方案中，接头是非肽接头。 如本文中报道的一个方面是在轻链和/或重链具有在⑶R2中的半胱氨酸残基的 抗体，其中根据Kabat本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种缀合物，其包含抗原和与所述抗原特异性结合的抗体，其中共价键在抗原和抗体可变区中的氨基酸残基之间。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2012.07.04 EP 12174947.71. 一种缀合物，其包含抗原和与所述抗原特异性结合的抗体，其中共价键在抗原和抗 体可变区中的氨基酸残基之间。2. -种缀合物，其包含半抗原和与所述半抗原特异性结合的抗体（抗半抗原抗体），其 中共价键在半抗原和抗体可变区中的氨基酸残基之间。3. 根据权利要求1或2所述的缀合物，特征在于可变区中的氨基酸残基是在重链CDR2 中。4. 根据前述权利要求中任一项所述的缀合物，特征在于共价键在抗体的重链CDR2中 的半胱氨酸残基和抗原或半抗原之间。5. 根据权利要求4所述的缀合物，特征在于根据Kabat的重链可变域编号法，抗体的重 链⑶R2中的半胱氨酸残基在第52b位置处或在第53位置处。6. 根据前述权利要求中任一项所述的缀合物，特征在于共价键是二硫键。7. 根据前述权利要求中任一项所述的缀合物，特征在于抗体是包含针对第一抗原或第 一半抗原的第一结合特异性和针...

【专利技术属性】
技术研发人员：J·本兹，U·布林克曼，S·登勒，S·德兹阿德克，G·乔治斯，M·格罗特，A·哈斯，E·霍夫曼，
申请(专利权)人：弗·哈夫曼拉罗切有限公司，
类型：发明
国别省市：瑞士;CH