一种定量检测样品中小分子化合物的测试条及方法技术

本发明专利技术提供了一种定量检测样品中小分子化合物的测试条及方法，采用其结合垫上包含荧光乳胶微粒以及小分子化合物抗体的测试条，通过时间分辨荧光免疫层析方法进行检测，和标准曲线进行比较，从而确定小分子化合物是否存在或检测其含量。本发明专利技术可以定量检测样品小分子化合物，可大幅度消除非特异性的结合，使检测信号的信噪比显著提高，具有快速、高灵敏度、高特异性等优点。

【技术实现步骤摘要】
-种定量检测样品中小分子化合物的测试条及方法
本专利技术涉及检测领域。具体地，本专利技术涉及一种检测样品中小分子化合物的测试 条及方法。
技术介绍
免疫层析检测技术（immunoc虹omatographic test)又称为免疫测流检测 (lateral flow immunoassay, LFIA)，是80年代兴起的一项快速检测技术。经过多年的发 展，此项技术已经广泛应用于临床诊断，毒品检测和食品安全等领域。 检测大多数小分子化合物，通常采用竞争抑制法来检测。在免疫层析方法中，将小 分子物质的完全抗原固定于硝酸纤维膜上的检测区（固相抗原），待检样品溶液中的小分 子物质（游离抗原）与固相抗原竞争结合胶体金或彩色乳胶微球标记的抗小分子物质的单 克隆抗体（标记抗体）。如果待检样品中含有的小分子物质，将抑制标记抗体与固定抗原 的结合，抑制在硝酸纤维素膜的检测区形成色带。测定后检测区如果形成色带，则结果为阴 性，待测样品不含待测小分子物质；反之，不形成色带，则结果为阳性，检测样品含有待测小 分子物质。 由于胶体金或彩色乳胶微球标记检测是通过肉眼来判别结果，目前W胶体金或彩 色微球标记的检测方法只能作为一种定性或半定量的检测。长期W来，人们尝试使用阅读 仪器来对免疫层析检测条进行定量，但是，由于胶体金或彩色乳胶微粒是W颜色的深浅作 为检测的信号，定量检测的准确度和灵敏度都难W达到要求，也有一些W磁性微粒或普通 的英光微球作为标记，通过检测磁性或英光的强弱来实现定量，取得了较好的效果。但是仍 然存在一些问题。主要是免疫层析检测的材料中硝酸纤维膜等均会在激发光作用下发出不 同程度的英光，同时检测样本如血液、尿样及唾液等均含有蛋白、核酸、糖类均具有英光效 应，因此而导致检测的背景较高，影响检测结果的准确性。 因此，本领域需要开发快速、准确、高效、简便地定量检测小分子化合物化合物的 方法。
技术实现思路
本专利技术的目的就是提供一种定量检测样本中小分子化合物的方法，快速、高效、简 便、准确。 在本专利技术的第一方面，提供一种测试条，包括样品垫、结合垫、反应膜、吸收垫、和 背衬，所述反应膜上设置检测区和质控区，所述结合垫上包含抗体复合物，所述抗体复合物 包含英光乳胶微粒W及小分子化合物抗体，所述小分子化合物抗体偶联于所述英光乳胶微 粒。 在另一优选例中，所述小分子化合物的分子量为1-lOOOODa。 在另一优选例中，所述小分子化合物为毒品和精神类药品，包括但不限于；海洛 因、吗啡、安非他明、甲基安非他明、MDMA、氯胺丽、可卡因、杜冷下、芬太尼、曲马多、大麻类、 下丙诺啡、美沙丽、可待因、咖啡因、麻黄碱、伪麻黄碱、安定、立哇仑、BZO、己比妥、立环类抗 忧郁药物。 在另一优选例中，所述小分子化合物为食品中的有害物质，包括但不限于；盐酸克 仑特罗、莱克多己胺、沙下胺醇、H聚氯胺、孔雀石绿、苏丹红、黄曲霉素B1、黄曲霉素Ml、有 机磯、除虫剂、除草剂，各种激素如孕丽、雌H醇、睾丸丽等。 在另一优选例中，所述小分子化合物为食品中残留的抗生素，包括但不限于；青霉 素、氨予青霉素、阿莫西林、头抱、庆大霉素、四环素、賴胺类抗生素、巧喃类抗生素。 在另一优选例中，所述英光乳胶微粒为铜系金属和/或铜系金属馨合物包被的乳 胶微粒。 在另一优选例中，所述结合垫上还包含兔IgG或鼠IgG。 在另一优选例中，所述质控区包含羊抗兔IgG或羊抗鼠IgG。 在另一优选例中，所述检测区包含小分子化合物与载体蛋白的偶联物。 在另一优选例中，所述载体蛋白为人血清白蛋白、牛血清白蛋白、卵清蛋白。 本专利技术的第二方面，提供一种检测试剂盒，包括： (a)测试条，所述测试条包括样品垫、结合垫、检测区、反应膜、质控区、吸收垫、和 背衬； (b)抗体复合物，所述抗体复合物包含英光乳胶微粒W及小分子化合物抗体，所述 小分子化合物抗体偶联于所述英光乳胶微粒；和 (C)容器。 本专利技术的第H方面，提供第一方面所述的测试条的用途，用于制备检测饮用水、饮 料、全血、血浆、血清、尿液、汗液、巧液或唾液中小分子化合物的试剂盒。 本专利技术的第四方面，提供一种检测小分子化合物的方法，包括步骤： (1)将待测物样品加至第一方面所述的测试片的样品垫； (2)采用时间分辨英光免疫层析方法测量所述测试片的检测区的英光强度及质控 区的英光强度，从而确定小分子化合物是否存在，或从而换算为小分子化合物的含量。 在另一优选例中，在步骤（2)中，将测试区的英光强度与质控区的英光强度的比 值，和标准曲线进行比较，从而确定小分子化合物的含量。 在另一优选例中，所述检测小分子化合物为定性、半定量、或定量检测小分子化合 物。 本专利技术的第五方面，提供一种定量检测待测物的英光测量装置，包括： (a)第一方面所述的测试片；和 化）用于检测英光强度的检测器。 应理解，在本专利技术范围内中，本专利技术的上述各技术特征和在下文（如实施例）中具 体描述的各技术特征之间都可W互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。限于篇幅，在 此不再一一累述。 【附图说明】 图1显示了本专利技术的一种免疫层析试纸条（板）的结构示意图， 其中，各标识如下；1为样品垫，2为结合垫，3为检测区，4为反应膜，5为质控区 (对照区)，6为吸收垫，7为背衬。 图2显示了本专利技术采用免疫层析试纸条进行检测的原理示意图。 图3为样品浓度与T/C值关系图，其中，X轴为样品浓度，Y轴为T/C值，即T线英 光值/C线英光值。 【具体实施方式】 [00巧]本专利技术人经过广泛而深入的研究，意外发现选用英光乳胶微粒标记小分子化合物 的抗体，结合时间分辨英光免疫层析技术，能够即时快速定量检测特定小分子化合物。与现 有的胶体金W及普通的英光的P0CT(Point of Care Test,床边诊断或即时检测）方法相 比，本专利技术方法的可W消除样本中的英光物质、激发光和膜本身对检测的干扰，使检测的灵 敏度和/或特异性均有显著提高。 术语 免疫层析技术 免疫层析技术（immunoc虹omatography)是20世纪80年代末90年代初建立的一 种快速检测技术。由于免疫层析技术不须进行结合标记物与自由标记物的分离，因而操作 简单、快速，非常适合现场检测之用。 时间分辨英光免疫分析 时间分辨英光免疫分析（time resolved fluoro immunoassay, TRFIA)是 20 世纪 80年代初在传统英光免疫分析的基础上创立的一种新型非放射性标记免疫分析技术，是目 前最灵敏的微量分析技术。 测试条上检测区域的检测信号的获取，将测试条上的检测信号传递过来的光信 号，通过光学聚光装置、分光装置，和光学光路整形等，得到615皿± 10皿左右的英光光斑， 将此英光光斑传递到光学传感器光电倍增管，获得测试条上检测区域的检测光信号。通过 控制信号读取时间为10微砂到400微砂，得到一个扣除英光本底的检测信号。通过光电信 号转换，将光信号转换为电信号传送给计算控制部件处理，最终完成检测。 与传统的英光素标记不同，本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种测试条，包括样品垫、结合垫、反应膜、吸收垫、和背衬，其特征在于，所述反应膜上设置检测区和质控区，所述结合垫上包含抗体复合物，所述抗体复合物包含荧光乳胶微粒以及小分子化合物抗体，所述小分子化合物抗体偶联于所述荧光乳胶微粒。

【技术特征摘要】
1. 一种测试条，包括样品垫、结合垫、反应膜、吸收垫、和背衬，其特征在于，所述反应膜 上设置检测区和质控区，所述结合垫上包含抗体复合物，所述抗体复合物包含荧光乳胶微 粒以及小分子化合物抗体，所述小分子化合物抗体偶联于所述荧光乳胶微粒。2. 如权利要求1所述的测试条，其特征在于，所述小分子化合物的分子量为 l-10000Da。3. 如权利要求1所述的测试条，其特征在于，所述荧光乳胶微粒为镧系金属和/或镧系 金属螯合物包被的乳胶微粒。4. 如权利要求1所述的测试条，其特征在于，所述质控区包含羊抗兔IgG或羊抗鼠 IgG。5. 如权利要求1所述的测试条，其特征在于，所述检测区包含小分子化合物与载体蛋 白的偶联物。6. -种检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括： (a) 测试条，所述测试条包括样品垫、结合垫、检测区、反应膜、质控区、吸收垫、和背 衬； (b) 抗体复合物，所述抗体复合物包含荧光乳胶微粒...

【专利技术属性】
技术研发人员：胡小龙，丁国荣，
申请(专利权)人：上海八通生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：上海;31