抗LGR5抗体和免疫缀合物制造技术

本发明专利技术提供抗LgR5抗体和免疫缀合物及其使用方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】专利
本专利技术涉及抗LgR5抗体和免疫缀合物以及其使用方法。背景含有富含亮氨酸的重复序列的G蛋白偶联受体5(LgR5)是一种存在于活跃循环的肠干细胞(ISC)表面上的七次跨膜蛋白。表达LgR5的ISC对Wnt调节敏感并且主要负责肠上皮的体内平衡再生。然而，消除小鼠的表达LgR5的细胞并不影响肠上皮的体内平衡，这表明其它细胞类型可补偿此细胞群体的丧失。Tian等,Nature 478:255-259(2011)。R-脊椎蛋白(R-spondin)增强由WNT3A达成的WNT信号传导，并且所有四种R-脊椎蛋白RSPO1、RSPO2、RSPO3和RSPO4都能够结合LgR5。Lau等,Nature 476:293-297(2011)。人LgR5是一种含907个氨基酸的蛋白质，其中预测在氨基端信号序列裂解后，有约540个氨基酸在细胞外间隙中。LgR5包含处于胞外域中的17个富含亮氨酸的不完全重复基序和位于富含亮氨酸的重复序列与第一跨膜域之间的富含半胱胺酸的区域。本领域存在本领域对靶向LgR5以诊断和治疗LgR5相关病状(如癌症)的药剂的需要。本专利技术满足该需要并且提供其它益处。概述本专利技术提供抗LgR5抗体和免疫缀合物以及其使用方法。在一些实施方案中，提供结合LgR5的分离的抗体。在一些实施方案中，所述抗体具有呈任何组合形式的至少一个或多个以下特征：(a)结合SEQ ID NO:67的氨基酸22-555内的表位和/或结合SEQ ID NO:67的氨基酸22-123内的表位和/或结合SEQ ID NO:67的氨基酸22-323内的表位和/或结合SEQ ID NO:67的氨基酸22-424内的表位和/或结合SEQ ID NO:67的氨基酸324-555内的表位和/或结合SEQ ID NO:67的氨基酸324-424内的表位；(b)结合LgR5的亲和力≤5nM或≤4nM或≤3nM或≤2nM或≤1nM，并且任选地≥0.0001nM或≥0.001nM或≥0.01nM；(c)不显著破坏R-脊椎蛋白(RSPO)与LgR5的结合；(d)不显著破坏β-连环蛋白(beta-catenin)信号传导；(e)不显著破坏RSPO对LgR5信号传导的活化；(f)活化半胱天冬酶3裂解；(g)识别人LgR5与啮齿动物LgR5两者；(h)识别人LgR5而不识别啮齿动物LgR5；(i)在其未缀合形式下不显著抑制肿瘤生长；和(j)不诱导干细胞分化。在一些实施方案中，分离的抗LgR5抗体结合SEQ ID NO:67的氨基酸22-323内的表位的亲和力≤5nM或≤4nM或≤3nM或≤2nM或≤1nM，并且任选地≥0.0001nM或≥0.001nM或≥0.01nM。在一些实施方案中，分离的抗LgR5抗体结合SEQ ID NO:67的氨基酸22-123内的表位的亲和力≤5nM或≤4nM或≤3nM或≤2nM或≤1nM，并且任选地≥0.0001nM或≥0.001nM或≥0.01nM。在一些实施方案中，分离的抗LgR5抗体结合SEQ ID NO:67的氨基酸324-424内的表位的亲和力≤5nM或≤4nM或≤3nM或≤2nM或≤1nM并且任选地≥0.0001nM或≥0.001nM或≥0.01nM。在任何分离的抗LgR5抗体的一些实施方案中，抗LgR5抗体不显著破坏R-脊椎蛋白(RSPO)与LgR5的结合。在任何分离的抗LgR5抗体的一些实施方案中，抗LgR5抗体不显著破坏wnt/β-连环蛋白信号传导。在任何分离的抗LgR5抗体的一些实施方案中，抗LgR5抗体不显著破坏RSPO对LgR5信号传导的活化。在任何分离的抗LgR5抗体的一些实施方案中，抗LgR5抗体活化半胱天冬酶3裂解。在任何分离的抗LgR5抗体的一些实施方案中，抗LgR5抗体识别人LgR5与啮齿动物LgR5两者。在任何分离的抗LgR5抗体的一些实施方案中，抗LgR5抗体识别人LgR5而不识别啮齿动物LgR5。在任何分离的抗LgR5抗体的一些实施方案中，抗LgR5抗体在其未缀合形式下不显著抑制肿瘤生长。在任何分离的抗LgR5抗体的一些实施方案中，抗LgR5抗体不诱导干细胞分化。在任何分离的抗LgR5抗体的一些实施方案中，抗LgR5抗体为单克隆抗体。在任何分离的抗LgR5抗体的一些实施方案中，抗LgR5抗体为人抗体、人源化抗体或嵌合抗体。在任何分离的抗LgR5抗体的一些实施方案中，抗LgR5抗体为IgG1、IgG2a或IgG2b抗体。在任何分离的抗LgR5抗体的一些实施方案中，抗LgR5抗体为结合LgR5的抗体片段。在任何分离的抗LgR5抗体的一些实施方案中，LgR5为具有SEQ ID NO:67的人LgR5。在一些实施方案中，结合LgR5的抗体结合SEQ ID NO:67的氨基酸22-323内的表位。在一些实施方案中，所述抗体结合LgR5的亲和力≤5nM。在一些实施方案中，所述抗体为单克隆抗体。在一些实施方案中，所述抗体为人抗体、人源化抗体或嵌合抗体。在一些实施方案中，所述抗体为IgG1、IgG2a或IgG2b抗体。在一些实施方案中，所述抗体为结合LgR5的抗体片段。在一些实施方案中，LgR5为具有SEQ ID NO:67的人LgR5。在一些实施方案中，所述抗体包含(a)包含氨基酸序列SEQ ID NO:32的HVR-H3，(b)包含氨基酸序列SEQ ID NO:29的HVR-L3，和(c)包含氨基酸序列SEQ ID NO:31的HVR-H2。在一些实施方案中，所述抗体包含(a)包含氨基酸序列SEQ ID NO:30的HVR-H1，(b)包含氨基酸序列SEQ ID NO:31的HVR-H2，和(c)包含氨基酸序列SEQ ID NO:32的HVR-H3。在一些实施方案中，所述抗体进一步包含重链框架FR3序列SEQ ID NO:41。在一些实施方案中，所述抗体进一步包含(a)包含氨基酸序列SEQ ID NO:27的HVR-L1，(b)包含氨基酸序列SEQ ID NO:28的HVR-L2，和(c)包含氨基酸序列SEQ ID NO:29的HVR-L3。在一些实施方案中，分离的抗体包含(a)包含氨基酸序列SEQ ID NO:27的HVR-L1，(b)包含氨基酸序列SEQ ID NO:28的HVR-L2，和(c)包含氨基酸序列SEQ ID NO:29的HVR-L3。在一些实施方案中，所述抗体进一步包含轻链框架FR3序列SEQ ID NO:35。在一些实施方案中，分离的抗体包含(a)与氨基酸序列本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种结合LgR5的分离的抗体，其中所述抗体结合SEQ ID NO:67的氨基酸22‑323内或SEQ ID NO:67的氨基酸22‑123内的表位并且所述抗体结合LgR5的亲和力≤5nM。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2012.03.30 US 61/618,232;2012.08.14 US 61/683,048;1.一种结合LgR5的分离的抗体，其中所述抗体结合SEQ ID NO:67的
氨基酸22-323内或SEQ ID NO:67的氨基酸22-123内的表位并且所述抗体
结合LgR5的亲和力≤5nM。
2.如权利要求1所述的抗体，其为单克隆抗体。
3.如权利要求1所述的抗体，其为人抗体、人源化抗体或嵌合抗体。
4.如权利要求1所述的抗体，其为结合LgR5的抗体片段。
5.如权利要求1所述的抗体，其中LgR5为具有SEQ ID NO:67的人
LgR5。
6.如权利要求1所述的抗体，其中所述抗体包含：
a)包含氨基酸序列SEQ ID NO:32的HVR-H3、包含氨基酸序列SEQ ID 
NO:29的HVR-L3和包含氨基酸序列SEQ ID NO:31的HVR-H2；或
b)包含氨基酸序列SEQ ID NO:62的HVR-H3、包含氨基酸序列SEQ ID 
NO:59的HVR-L3和包含氨基酸序列SEQ ID NO:61的HVR-H2。
7.如权利要求1所述的抗体，其中所述抗体包含：
a)包含氨基酸序列SEQ ID NO:30的HVR-H1、包含氨基酸序列SEQ ID 
NO:31的HVR-H2和包含氨基酸序列SEQ ID NO:32的HVR-H3；或
b)包含氨基酸序列SEQ ID NO:60的HVR-H1、包含氨基酸序列SEQ ID 
NO:61的HVR-H2和包含氨基酸序列SEQ ID NO:62的HVR-H3。
8.如权利要求7所述的抗体，其中所述抗体包含含有氨基酸序列SEQ 
ID NO:30的HVR-H1、含有氨基酸序列SEQ ID NO:31的HVR-H2、含有氨
基酸序列SEQ ID NO:32的HVR-H3和：
a)重链框架FR3序列SEQ ID NO:40；
b)重链框架FR3序列SEQ ID NO:41；
c)重链框架FR3序列SEQ ID NO:42；或
d)重链框架FR3序列SEQ ID NO:43。
9.如权利要求7或权利要求8所述的抗体，其中所述抗体包含：
a)包含氨基酸序列SEQ ID NO:32的HVR-H3、包含氨基酸序列SEQ ID 
NO:29的HVR-L3、包含氨基酸序列SEQ ID NO:31的HVR-H2、包含氨基
酸序列SEQ ID NO:27的HVR-L1、包含氨基酸序列SEQ ID NO:28的

\tHVR-L2和包含氨基酸序列SEQ ID NO:29的HVR-L3；或
b)包含氨基酸序列SEQ ID NO:62的HVR-H3、包含氨基酸序列SEQ ID 
NO:59的HVR-L3、包含氨基酸序列SEQ ID NO:61的HVR-H2、包含氨基
酸序列SEQ ID NO:57的HVR-L1、包含氨基酸序列SEQ ID NO:58的
HVR-L2和包含氨基酸序列SEQ ID NO:59的HVR-L3。
10.如权利要求1所述的抗体，其中所述抗体包含：
a)包含氨基酸序列SEQ ID NO:27的HVR-L1、包含氨基酸序列SEQ ID 
NO:28的HVR-L2和包含氨基酸序列SEQ ID NO:29的HVR-L3；或
b)包含氨基酸序列SEQ ID NO:57的HVR-L1、包含氨基酸序列SEQ ID 
NO:58的HVR-L2和包含氨基酸序列SEQ ID NO:59的HVR-L3。
11.如权利要求9或权利要求10所述的抗体，其中所述抗体包含含有
氨基酸序列SEQ ID NO:27的HVR-L1、含有氨基酸序列SEQ ID NO:28的
HVR-L2和含有氨基酸序列SEQ ID NO:29的HVR-L3，并且进一步包含轻
链框架FR3序列SEQ ID NO:35。
12.如前述权利要求中任一项所述的抗体，其中所述抗体包含：
a)与氨基酸序列SEQ ID NO:6具有至少95％序列同一性的VH序列；
b)与氨基酸序列SEQ ID NO:5具有至少95％序列同一性的VL序列；
c)如(a)中的VH序列和如(b)中的VL序列；
d)与氨基酸序列SEQ ID NO:8具有至少95％序列同一性的VH序列；
e)与氨基酸序列SEQ ID NO:7具有至少95％序列同一性的VL序列；
f)如(d)中的VH序列和如(e)中的VL序列；
g)与氨基酸序列SEQ ID NO:10具有至少95％序列同一性的VH序列；
h)与氨基酸序列SEQ ID NO:9具有至少95％序列同一性的VL序列；
i)如(g)中的VH序列和如(h)中的VL序列；
j)与氨基酸序列SEQ ID NO:12具有至少95％序列同一性的VH序列；
k)与氨基酸序列SEQ ID NO:11具有至少95％序列同一性的VL序列；
l)如(j)中的VH序列和如(k)中的VL序列；
m)与氨基酸序列SEQ ID NO:14具有至少95％序列同一性的VH序列；
n)与氨基酸序列SEQ ID NO:13具有至少95％序列同一性的VL序列；
o)如(m)中的VH序列和如(n)中的VL序列；
p)与氨基酸序列SEQ ID NO:16具有至少95％序列同一性的VH序列；
q)与氨基酸序列SEQ ID NO:15具有至少95％序列同一性的VL序列；
r)如(p)中的VH序列和如(q)中的VL序列；
s)与氨基酸序列SEQ ID NO:18具有至少95％序列同一性的VH序列；
t)与氨基酸序列SEQ ID NO:17具有至少95％序列同一性的VL序列；
u)如(s)中的VH序列和如(t)中的VL序列；
v)与氨基酸序列SEQ ID NO:20具有至少95％序列同一性的VH序列；
w)与氨基酸序列SEQ ID NO:19具有至少95％序列同一性的VL序列；
x)如(v)中的VH序列和如(w)中的VL序列；
y)与氨基酸序列SEQ ID NO:26具有至少95％序列同一性的VH序列；
z)与氨基酸序列SEQ ID NO:25具有至少95％序列同一性的VL序列；
或
aa)如(y)中的VH序列和如(z)中的VL序列。
13.如权利要求12所述的抗体，其包含选自SEQ ID NO:6、8、10、12、
14、16、18、20和26的VH序列。
14.如权利要求12或权利要求13所述的抗体，其包含选自SEQ ID NO:
5、7、9、11、13、15、17、19和25的VL序列。
15.一种抗体，其包含：
a)VH序列SEQ ID NO:6和VL序列SEQ ID NO:5；
b)VH序列SEQ ID NO:8和VL序列SEQ ID NO:7；
c)VH序列SEQ ID NO:10和VL序列SEQ ID NO:9；
d)VH序列SEQ ID NO:12和VL序列SEQ ID NO:11；
e)VH序列SEQ ID NO:14和VL序列SEQ ID NO:13；
f)VH序列SEQ ID NO:16和VL序列SEQ ID NO:15；
g)VH序列SEQ ID NO:18和VL序列SEQ ID NO:17；
h)VH序列SEQ ID NO:2...

【专利技术属性】
技术研发人员：JA宏戈，W茂，P波拉基斯，A波尔森，R维耶，Y吴，WC梁，
申请(专利权)人：基因泰克公司，
类型：发明
国别省市：美国;US