甲肝疫苗接种效果快速评价试剂盒制造技术

本实用新型专利技术属于生物检测领域，具体涉及一种甲肝疫苗接种效果快速评价试剂盒。所述试剂盒包括盒体、装有样品稀释液的容器和检测试纸，所述检测试纸是由底板（1）和相互紧密搭接粘贴在底板上的样品垫（6）、抗原垫（5）、标记物结合垫（4）、包被膜（3）和吸收垫（2）组成，根据WHO推荐的甲肝抗体最低保护滴度水平，将试剂盒的最低检测线设定为20mIU/ml，用于检测血清/血浆/全血中的抗甲型肝炎病毒IgG抗体。本实用新型专利技术所述的试剂盒成本低廉，制备工艺简单，检测血清抗体的结果与ELISA试剂盒的结果无显著差异适，可以用于甲肝疫苗接种后免疫效果的快速评价。

【技术实现步骤摘要】

本技术属于生物检测领域，具体涉及一种甲肝疫苗接种效果快速评价试剂盒。
技术介绍
甲型病毒性肝炎是由甲型肝炎病毒(甲肝病毒，HAV)引起的急性肝脏炎症，主要表现为食欲减退、恶心呕吐、乏力、肝大及肝功异常，病初常有发热，临床经过常呈自限性，绝大多数患者在数周内可恢复正常。在许多发展中国家，80％以上的青少年急性病毒性肝炎为甲型肝炎病毒感染，在发达国家，甲型肝炎也是较为常见的急性病毒性肝炎。HAV属于微小核糖核酸病毒科嗜肝病毒属，人是HAV的唯一宿主，主要通过粪口途径在人与人之间传播，尤其是密切接触者间的传播更为明显，年幼的儿童及青少年具有较高的感染率而且通常为无症状感染者，因此是潜在的感染源。预防甲肝流行的有效措施主要是接种甲肝疫苗。我国的扩大国家免疫规划已将甲肝疫苗列入常规免疫程序，每年大约有数千万儿童接受免疫接种。这提示我们，有必要对甲肝疫苗的群体免疫效果进行评价。评价疫苗免疫效果最可靠的方法就是检测接种者体内血清中的特异抗体的含量。当前市场上检测风疹抗体的商品化试剂盒多采用酶联免疫法和化学发光法，这些方法虽然灵敏度高、结果准确、化学发光试剂还可以对抗体进行定量，但在实际操作上存在诸多不便，如步骤复杂、耗时较长，还需使用特定的仪器设备；试剂盒需4℃保存；对样品要求静脉采血等，不易在基层普及运用。免疫胶体金快速诊断技术是建立在酶联免疫吸附试验、乳胶凝集试验、单克隆抗体技术和免疫胶体金标记技术基础上，以胶体金为标记物，利用特异的抗原抗体反应放大反应信号,通过直接观察就可以判定结果的新技术。该技术具有简单、快速、准确和无污染等优点，在临床医学检测、动物医学检测、激素检测、食品安全检测、药物残留和毒品快速检测等诸多诊断领域迅速发展。目前，胶体金标记的快速检测抗体的检测试纸都是由样品垫、标记物结合垫、包被膜(其上划有检测线、质控线)和吸收垫组成，根据检测原理的不同大体分为两种：一种是将抗原标金，在标记物结合垫上包被胶体金标记的抗原，在包被膜上用待测抗体的抗体划膜得到检测T线；另一种是将抗原划膜，在标记物结合垫上包被胶体金标记的待测抗体的抗体，在包被膜上用抗原划膜得到检测T线。现有研究表明：因为抗体蛋白性质较为稳定，所以对抗体蛋白的胶体金标记较为稳定，因此上述第一种方法所述的抗原的胶体金标记则存在颇多问题，因为抗原多为病毒类，性质多样，有的大小甚至比胶体金颗粒还大，且稳定性较差，因此很难直接将抗原标记在胶体金颗粒上；即使勉强能将抗原标记上，也需要抗原达到极高的纯度，而对抗原病毒的纯化是一项难度较大、成本较高的工程；也有人寻找抗原的重组抗原来代替这些天然抗原，但是很多抗原很难寻到能替代的重组抗原，而且即使有，成本也是极高的，由此说明，上述第一种方法的局限性比较高。上述的第二种方法使用待测抗体的抗体进行金标记，这种方法可以避免抗原金标记的问题，但在包被膜上使用抗原划膜得到检测T线，需要抗原具有较高的浓度和纯度，这也增加了产品生产的成本和难度；另外将抗原划到膜上，由于抗原稳定性较差，抗原划膜后很难长时间保存，因此试纸条的有效期极短。这些都是限制抗体快速检测类试剂盒快速发展的原因。
技术实现思路
本技术针对现有技术的不足，目的在于提供一种甲肝疫苗接种效果快速评价试剂盒，用该试剂盒对接种者体内血清中的甲肝病毒IgG抗体进行胶体金法快速检测，可以实现对甲肝疫苗接种效果的快速评价。本技术所采用的技术方案为：甲肝疫苗接种效果快速评价试剂盒，包括盒体、装有样品稀释液的容器和检测试纸，所述装有样品稀释液的容器和检测试纸位于盒体内，其特征在于，所述检测试纸是由底板和相互紧密搭接粘贴在底板上的样品垫、抗原垫、标记物结合垫、包被膜和吸收垫组成，所述抗原垫上包被有甲肝抗原，所述标记物结合垫上包被有胶体金标记的鼠抗甲肝单克隆抗体，所述包被膜上固定有检测T线和质控C线，所述检测T线上包被有鼠抗人IgG抗体，所述质控C线上包被有羊抗鼠IgG抗体；所述检测试纸的最低检测线为20mIU/ml。按上述方案，所述抗原垫为玻璃纤维、无纺布或聚酯膜。按上述方案，所述底板为PVC底板，所述PVC底板的一面为双面胶。按上述方案，所述包被膜为硝酸纤维素膜。按上述方案，所述标记物结合垫和样品垫为玻璃纤维，所述吸收垫为吸水纸。按上述方案，所述样品稀释液为含磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、氯化钠和叠氮钠的混合水溶液。按上述方案，所述抗原垫的制备方法为：使用抗原保护液将甲肝抗原进行稀释后均匀铺在玻璃纤维、无纺布或聚酯膜上，置于37℃，相对湿度低于40％的环境中，干燥4小时，制成抗原垫；所述抗原保护液的配方为：Na2HPO45.72g，NaH2PO40.624g，柠檬酸三钠8.5g，蔗糖10g，叠氮钠1g，水定容至1L；所述甲肝抗原为粗抗原，其中抗原的含量为40wt％～50wt％。本技术中，所述试剂盒中检测试纸的检测原理为：在样品垫加入血清或血浆或全血样品，再加入2～3滴样品稀释液，若样品中含有甲肝病毒IgG抗体，其将和抗原垫中的甲肝抗原形成甲肝抗原-甲肝病毒IgG抗体复合物，该复合物向前移动，复合物中的甲肝抗原再与标记物结合垫中的胶体金标记的鼠抗甲肝单克隆抗体结合，形成甲肝病毒IgG抗体-甲肝抗原-胶体金标记的鼠抗甲肝单克隆抗体免疫复合物，该复合物由于层析作用沿纸条向前移动，至检测T线，复合物中的甲肝病毒IgG抗体与检测T线上包被的鼠抗人IgG抗体反应形成鼠抗人IgG抗体-甲肝病毒IgG抗体-甲肝抗原-胶体金标记的鼠抗甲肝单克隆抗体免疫复合物，该复合物可聚集在检测区，当聚集的复合物达到一定的数量时，则形成一条肉眼可见的条带(T线)，判断结果为阳性；若样品中不含有或含很少量的甲肝病毒IgG抗体，则不能形成免疫复合物，即不能形成肉眼可见的条带，判断结果为阴性；C线作为试剂的质控标准，阳性和阴性检测样品均会产生条带。同时，依据世界卫生组织(WHO)推荐的血清中甲肝病毒的最低保护抗体滴度水平为20mIU/ml，即当接种者体内甲肝病毒抗体的浓度≥20mIU/ml，说明甲肝疫苗接种成功，当接种者体内甲肝病毒抗体的浓度＜20mIU/ml，说明甲肝疫苗接种不成功。本技术中，将试剂盒的灵敏度设置为20mIU/ml，甲肝病毒IgG抗体的检测结果为阳性即表明甲肝疫苗免疫成功，甲肝病毒IgG抗体的检测结果为阴性即表明甲肝疫苗免疫不成功。因此，本技术所述的试剂盒可以实现快速评价甲肝疫苗的接种效本文档来自技高网...

【技术保护点】
甲肝疫苗接种效果快速评价试剂盒，包括盒体、装有样品稀释液的容器和检测试纸，所述装有样品稀释液的容器和检测试纸位于盒体内，其特征在于，所述检测试纸是由底板和相互紧密搭接粘贴在底板上的样品垫、抗原垫、标记物结合垫、包被膜和吸收垫组成，所述抗原垫上包被有甲肝抗原，所述标记物结合垫上包被有胶体金标记的鼠抗甲肝单克隆抗体，所述包被膜上固定有检测T线和质控C线，所述检测T线上包被有鼠抗人IgG抗体，所述质控C线上包被有羊抗鼠IgG抗体；所述检测试纸的最低检测线为20mIU/ml。

【技术特征摘要】
1.甲肝疫苗接种效果快速评价试剂盒，包括盒体、装有样品稀释液的容器和检测试纸，所述装有样品稀释液的容器和检测试纸位于盒体内，其特征在于，所述检测试纸是由底板和相互紧密搭接粘贴在底板上的样品垫、抗原垫、标记物结合垫、包被膜和吸收垫组成，所述抗原垫上包被有甲肝抗原，所述标记物结合垫上包被有胶体金标记的鼠抗甲肝单克隆抗体，所述包被膜上固定有检测T线和质控C线，所述检测T线上包被有鼠抗人IgG抗体，所述质控C线上包被有羊抗鼠IgG抗体；...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴边，张薇，金玉翠，倪龙泉，龚华岳，王方杰，
申请(专利权)人：武汉生命科技股份有限公司，
类型：新型
国别省市：湖北;42