一种稳定性强的血液丙氨酸氨基转移酶检测试剂制造技术

本发明专利技术公开了一种稳定性强的丙氨酸氨基转移酶检测试剂，属于临床体外检测技术领域。本发明专利技术采用单一试剂方法检测血清丙氨酸氨基转移酶（ALT），以酶偶联的连续检测法为基础，解决了原有配方中单一试剂中不稳的问题，操作简单方便，有利于临床的应用和推广。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种稳定性强的血液丙氨酸氨基转移酶检测试剂，属于临床体外检测

技术介绍
丙氨酸氨基转移酶（ALT）是一种参与人体蛋白质新陈代谢的酶（相当于工业生产中的催化剂），起加快体内蛋白质氨基酸在体内转化的作用，它广泛存在于人体各种组织、器官、肌肉、骨骼中，以肝脏细胞的细胞浆中最多，血清中ALT的正常含量参考值是：男9-51U/L，女8-41U/L（各医院的测试方法不同，参考值不完全相同）。 当人体内各组织器官活动或病变时，就会把其中的ALT释放到血液中，使血清ALT含量增加。例如，肝脏发炎时，转氨酶就会从肝细胞释放到血液中，肝脏有病，血清转氨酶一定增高，当肝细胞千分之一有炎症时，血清转氨酶含量就会增高一倍以上，因此，血清转氨酶数量是肝脏病变程度的重要指标。ALT升高临床意义就在于对急性乙型肝炎、慢性肝炎、HBV携者、重型肝炎以及肝硬化、肝癌等一系列病毒性肝炎的诊断和分析，ALT的升高只表示肝脏可能受到了损害。除了肝炎，其他很多疾病都能引起谷丙转氨酶转氨酶升高。ALT检测方法众多，国内过去多使用比色法检测血液ALT，目前主要开展的为酶偶联的连续检测法。前者操作简单，不需要特殊的仪器和试剂，但结果不够准确，重复性差，效果不理想；后者结果准确，是公认的好方法，但是对仪器和试剂有一定的要求。现在市面上多采用的是双试剂的酶偶联的连续检测方法检测血清ALT，操作步骤较繁琐，而单试剂的酶偶联的连续检测方法操作简单方便，但试剂中酶和NADH不稳定，容易造成衰减，这为单试剂方法检测血清ALT带来很大困难。因此本专利技术针对此问题，特专利技术了一种稳定性强的单试剂血液丙氨酸氨基转移酶检测试剂。
技术实现思路
为了解决现有技术中存在的问题，本专利技术提供了一种稳定性强的血液丙氨酸氨基转移酶检测试剂。该试剂配方为单一试剂，操作简单方便，且试剂具有很好的检测稳定性。本专利技术所采用的技术方案是：一种稳定性强的血液丙氨酸氨基转移酶检测试剂，其特征在于，它为单一试剂配方，其组成包括以下组分：Tris缓冲液(pH=7.8 )                     40-60mmol/LL-丙氨酸                              400-600mmo1/L氯化钾                                 1g/L-10g/LEDTA.Na2                           5mmol/L-10 mmol/L海藻糖                                1g/L-10g/L牛血清白蛋白（BSA)                   1g/L-10g/L二硫苏糖醇                            0.1g/L-10g/LEMERGEN A-60                        0.1g/L-10g/LProclin-300                            0.5ml/L-1ml/Lα-酮戊二酸                             10-20mmo1/L 乳酸脱氢酶（LDH）                    1000-14000U/LNADH                                0.15-0.25mmo1/L 。作为本专利技术的一种优选，它的试剂组成为：Tris缓冲液(pH=7.8 )                     50mmol/LL-丙氨酸                               500mmo1/L氯化钾                                  8g/LEDTA.Na2                               10 mmol/L海藻糖                                   6g/L牛血清白蛋白（BSA)                      6g/L二硫苏糖醇                               6g/LEMERGEN A-60                           6g/LProclin-300                               1ml/Lα-酮戊二酸                               15mmo1/L 乳酸脱氢酶（LDH）                      1200U/LNADH                                  0.18mmo1/L。本专利技术试剂的配制方法为：先将Tris、L-丙氨酸、氯化钾、海藻糖、BSA、EDTA.Na2 、二硫苏糖醇、EMERGEN A-60 和Proclin-300按照配方量依次溶解到1L去离子水中，使用氢氧化钠调节溶液pH至7.8，然后依次加入配方量乳酸脱氢酶（LDH）和NADH溶解于上述溶液中制备完成。本专利技术的有益效果是：（1）本专利技术采用单一试剂方法检测血清丙氨酸氨基转移酶（ALT），操作简单方便，有利于临床的应用和推广；（2）本配方以酶偶联的连续检测法为基础，解决了原有配方中单一试剂中不稳的问题，本专利技术优先选择了Tris-EDTA.Na2缓冲体系，Tris-EDTA.Na2缓冲液能够有效的去除试剂中重金属离子对NADH的干扰，提高了NADH的稳定性；（3）本专利技术在试剂中还添加了二硫苏糖醇和氯化钾原材料同样能够较好的减缓NADH在试剂中的衰减，提高试剂的稳定性；（4）本专利技术中还添加了牛血清白蛋白和EMERGEN A-60两种物质作为保护剂，保护LDH的活性基团不被破坏，能够有效的提高LDH生化试剂的稳定性。附图说明图1是本专利技术实施例1-3与对照1、2组的37℃7天热稳定性低值质控试验结果图；图2是本专利技术实施例1-3与对照1、2组的37℃7天热稳定性高值质控试验结果图；图3是本专利技术实施例1-3与对照1、2组的15天开瓶稳定性低值质控试验结果图；图4是本专利技术实施例1-3与对照1、2组的15天开瓶稳定性高值质控试验结果图；图5是本专利技术实施例1-3与对照1、2组的37℃7天热稳定性试剂空白趋势图；图6是本专利技术实施例1-3与对照1、2组的15天开瓶稳定性试剂空白趋势图。具体实施方式下面结合具体实施例对本专利技术做进一步的详细说明。实施例1一种稳定性强的丙氨酸氨基转移酶检测试剂，其试剂组成为：Tris缓冲液(pH=7.8 )                     40mmol/LL-丙氨酸      本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种稳定性强的血液丙氨酸氨基转移酶检测试剂，其特征在于，它为单一试剂配方，其组成包括以下组分：Tris缓冲液(pH=7.8 )                     40‑60mmol/LL‑丙氨酸                                  400‑600mmo1/L氯化钾                                       1g/L‑10g/LEDTA.Na2                                5mmol/L‑10 mmol/L海藻糖                                       1g/L‑10g/L牛血清白蛋白（BSA)                   1g/L‑10g/L二硫苏糖醇                                0.1g/L‑10g/LEMERGEN A‑60                         0.1g/L‑10g/LProclin‑300                                0.5ml/L‑1ml/Lα‑酮戊二酸                                10‑20mmo1/L 乳酸脱氢酶（LDH）                    1000‑14000U/LNADH                                      0.15‑0.25mmo1/L 。...

【技术特征摘要】
1.一种稳定性强的血液丙氨酸氨基转移酶检测试剂，其特征在于，它为单一试剂配方，其组成包括以下组分：
Tris缓冲液(pH=7.8 )                     40-60mmol/L
L-丙氨酸                                  400-600mmo1/L
氯化钾                                       1g/L-10g/L
EDTA.Na2                                5mmol/L-10 mmol/L
海藻糖                                       1g/L-10g/L
牛血清白蛋白（BSA)                   1g/L-10g/L
二硫苏糖醇                                0.1g/L-10g/L
EMERGEN A-60                         0.1g/L-10g/L
Proclin-300                                0.5ml/L-1ml/L
α-酮戊二酸                                10-20mmo1/L 
乳酸脱氢酶（LDH）                    1000-14000U/L
NADH                                      ...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨君莉，罗维晓，甘宜梧，谭柏清，王绮，朱玉娥，肖慧，
申请(专利权)人：山东博科生物产业有限公司，
类型：发明
国别省市：山东;37