一种具有免疫调节作用的多肽制造技术

本发明专利技术的目的在于提供一种具有免疫调节作用的多肽，即一种具有免疫调节作用的，从法氏囊中分离的十一肽，其氨基酸序列为SEQ ID NO:1。本发明专利技术从法氏囊提取物中，分离法氏囊十一肽结构简单，无毒副作用，免疫原性极弱。即可从法氏囊中分离提取，也可化学合成，成本低，可大量生产。对抗体产生具有诱导作用，同时可调节细胞因子的产生，淋巴细胞的增殖，促进细胞免疫反应。此外，还以剂量依赖性方式调节B细胞的分化。具有广泛的应用前景，如在免疫调节和治疗等方面等应用。

【技术实现步骤摘要】
一种具有免疫调节作用的多肽
本专利技术属于功能蛋白/多肽筛选
，具体涉及一种具有免疫调节作用的多 肽。
技术介绍
法氏囊（bursa of Fabricius，BF)是贴附于禽类泄殖腔背侧肛道区的一个不 太明显的囊状结构。法氏囊（Bursa of Fabricus, BF)最早于1621年由意大利解剖学家 Hieronymus Fabricius发现，由此而得名。最初，法布里修斯推测，空心结构的法氏囊很有 可能是作为贮存精液的容器。然而事实并非如此，数百年里，法氏囊的功能一直困扰着众多 科研人员。由于法氏囊随着性成熟而退化，其大小与精巢和肾上腺之间呈负相关关系，因而 有研究人员推测，BF -定是与生长和性发育有关的某种内分泌腺或淋巴腺。早在1956年， Glick等意外发现去除法氏囊能减少雏禽沙门氏菌0型抗原的抗体产生，却一度没有引起 众人的注意。多年后这项工作的重要意义才被正确的对待，并且主流免疫学家也对鸡的免 疫系统产生了极大的兴趣。人们最终达成共识法氏囊是抗体（介导）免疫所必需的器官， 而同样随着性发育不断退化的胸腺则是细胞（介导）免疫所必需的器官。现在，法氏囊被 确认为体液中枢免疫器官，它由一根导管连接并贴附于禽类肛道，是B淋巴细胞发育分化 和成熟的场所，分化完全的B淋巴细胞由BF转移至外周淋巴器官生活、繁衍，并主导着免疫 功能，因而是B淋巴细胞（囊来源淋巴细胞）和禽类抗体谱发生所必需的。 BF是B细胞诱导分化和成熟的场所。淋巴干细胞（B淋巴细胞前体）从骨髓到BF， 成熟的B细胞在此处诱导分化，参与免疫反应通过血液循环和淋巴循环转移到各个外周淋 巴器官。免疫球蛋白（Ig)基因重排是B细胞系发育过程中的早期事件，BF原基在胚胎期 第三天开始发育，胚胎发育到8-14日龄，由前囊干细胞形成BF原基。在进入BF滤泡前，干 细胞的免疫球蛋白L链和H链已发生重排。12日龄，BF中可以检测到IgM +细胞，出雏后绝 大部分（90%以上）囊细胞是IgM+细胞。胚胎后期，B细胞开始进入外周免疫组织，出雏后 6月龄BF退化，此时B细胞已全部进入外周免疫组织。Moriya等用睾酮处理10日龄的鸡 胚，检测胚胎期和雏鸡血清中J链和μ链水平，发现J链水平下降，而μ链在胚胎期和孵 出后水平无明显变化。Mansikka等在鸡胚发育60h手术切除BF，仍能产生免疫球蛋白形成 B细胞，然而却无法产生特异抗体反应，DNA序列分析表明只有少数B细胞前体分化为成熟 的免疫球蛋白形成B细胞。Jankovic等在胚胎发育52-64h切除BF原基后，不能消除体液 免疫，也不能阻止带有特异来源于BF的Bu淋巴细胞的分化。童立骐等报道北京鸭胚胎外 科切除BF抑制了脾脏的发育，外周淋巴细胞、器官发生的影响差别不显著当胚胎中晚期和 晚期的时候。刚孵出切除BF的不能为完全消除抗体的产生，能抑制特异性抗体的产生伴有 IgM和IgG的分泌。 1976年Baba等发现BF粗提物物可以让胚胎期去除BF的雏鸡BF复生，也能恢 复诱导产生免疫球蛋白特异性抗体。1977年Baba等又报道了法氏囊提取液可恢复丙酸睾 酮（TP)对法氏囊的发育抑制，促使鸡的抗体水平提高并使抗体由IgM向IgG转化。1976 年，Brand等发现雏鸡骨髓细胞被BF提取液诱导表达抗原，促进早期细胞表达抗原的因子， 而且囊提取液浓度与诱导细胞分化的能力成负相关。1982年，Eerol等报道了体外培养的 BF上皮细胞和其不含血清培养上清具备增强淋巴细胞分化的能力。此外，缪德年等分析 BF提取物采用薄层层析法，发现BF提取物中有囊素和另外不少于8种不同肽类或着氨基酸 成分。近年来，随着对法氏囊活性肽的不断研究，一些结构和功能明确的活性肽被不断地发 现。 法氏囊抗类固醇肤（Bursal anti-steroidogenic peptide，BASP)是另一个研究 众多的法氏囊活性肽。体液免疫系统可能反馈调节新生儿的丘脑-垂体-性腺轴。Byrd等 研究了来源于青春期前的鸡的法氏囊提取物的酸性溶液在体外对分离于最大的鸡卵巢排 卵前卵泡的颗粒细胞basal和LH-刺激的孕激素生物合成的影响。结果发现，3?5kDa的 粗提物显著抑制LH-刺激的孕激素分泌（P〈0. 05)。采用反向高效液相技术，部分纯化得到 了一个法氏囊活性组分，在体外具有抑制类固醇肽的能力。该组分抑制LH-刺激的孕激素 的生物合成，最大程度可抑制约79%。去掉该肽后，颗粒细胞具有LH-刺激的孕激素生物合 成的能力与对照细胞类似；而且法氏囊提取物明显抑制cAMP类似物刺激的孕激素的生物 合成。这些数据意味着来源于鸡法氏囊的抗类固醇多肽是一种单一的热不稳定的、N端封 闭的肽，具有颗粒细胞的生物活性（颗粒细胞不依赖促性腺激素受体）。 研究法氏囊活性肽已经取得一定的进展，但目前而言对法氏囊活性肽的认知还是 较为肤浅，关于它们的生物学特性及功能等方面还有很多待解决的方面，尤其是对已知的 法氏囊活性肽的应用几乎是空白，还需深一步的研究。法氏囊是目前世界上唯一一个公认 的中枢体液免疫器官。由于法氏囊重要的免疫调节活性以及法氏囊提取物具有广泛的生物 学活性。因此，研究法氏囊的活性物质拥有相当宽阔的领域和广泛的实际应用意义。在疾 病诊断和治疗中，胸腺活性物已经起到举足轻重的地位了，现已广泛应用于肝炎（乙肝、丙 肝等）、肿瘤（癌症）的临床治疗和免疫缺陷等的研究中。不过，随着对法氏囊活性肽的功 能及作用机理的深入研究和不断的临床和实际应用方面的试验，不久的将来，一些法氏囊 活性肽会同胸腺素一样广泛应用于临床医学和生产实践。因此法氏囊活性肽具有广泛的应 用前景，如免疫调节、免疫治疗等领域。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种具有免疫调节作用的多肽，即一种具有免疫调节作用 的，从法氏囊中分离的i^一肽，及其在提高动物的免疫能力，提高疫苗的免疫效果及调节B 细胞分化中的应用。 本专利技术首先提供一种多肽，包括有： 1)氨基酸序列为 DVAGKLPDNRT(SEQ ID NO :1)的多肽； 2)在1)中的氨基酸中取代、缺失或添加一个或几个氨基酸，由1)衍生的，且具有 1)中多肽功能的多肽。 上述的多肽用于制备提高动物免疫力的疫苗或辅助剂； 作为实施例的一种优选，上述的多肽用于制备抗体； 作为实施例的一种优选，上述的多肽还用于制备促进B细胞增殖和/或分化的制 品。 与现有技术相比，本专利技术具有的优点及意义如下： 1、从法氏囊中发现一种新的十一肽，分子量为1185. 547(m/z)，氨基酸序列为 DVAGKLPDNRT，该i^一肽是第一次从禽类的中枢体液免疫器官法氏囊中分离出来，从而说明 法氏囊中存在多种活性分子，且可能发挥不同的免疫调节作用。 2、在实验动物体内具有明显的免疫调节作用。利用上述的法氏囊十一肽，可验证 其对抗体的免疫调节作用。按照动物体重，每只使用4-100 μ g，与AIV疫苗混匀，注射免疫 动物。其特征在于：活性肽在4 μ g/只时，按疫苗推荐剂量用于动物，活性肽效果更好。法 氏囊十一肽不仅对体液免疫具有诱导效应（如调节抗体的产生和淋巴细胞本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种多肽，其特征在于，所述的多肽包含有：1)氨基酸序列为SEQ ID NO：1；2)在1)中的氨基酸中取代、缺失或添加一个或几个氨基酸，由1)衍生的，且具有1)中多肽功能的多肽。

【技术特征摘要】
1. 一种多肽，其特征在于，所述的多肽包含有： 1) 氣基酸序列为SEQ ID NO :1 ; 2) 在1)中的氨基酸中取代、缺失或添加一个或几个氨基酸，由1)衍生的，且具有1)中 多肽功能的多肽。2. 如权利要求1所述的多肽，其特征在于，所述多肽是从法氏囊中分离的。3. 权利要求1所述的多肽在制备提高动物免疫力的疫苗...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘晓东，单虎，陈溥言，王述柏，杨海燕，秦志华，张传美，
申请(专利权)人：青岛农业大学，
类型：发明
国别省市：山东;37