一种毛枝柳组培快繁的方法技术

本发明专利技术属于植物组培领域，公开了一种毛枝柳组培快繁的方法。主要步骤包括：春季采取毛枝柳当年生茎段为外植体，依次进行1)外植体在升汞中消毒，2)转接到诱导培养基DKW+NAA0.1mg/L+6-BA1.0mg/L中培养，3)后换入增殖培养基DKW+NAA0.1mg/L+6-BA0.5mg/L中培养，4)换入生根培养基2/3DKW+IBA0.2mg/L中培养，5)炼苗移栽，得到毛枝柳组培苗。本发明专利技术提供的一种毛枝柳组培快繁方法，可以在最短时间内达到繁殖系数的最大化，有利于经济木本植物的快速育苗，缩短苗期和生长周期，达到繁殖速度快、节约生产成本并适用于规模育苗的目的。使用的植物材料极少，生长快，周期短，重复性强，可周年试验或生产。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于属于农业生物
，涉及的是一种毛枝柳的组培快繁方法。
技术介绍
毛枝柳(Salix dasyclados)为灌木或小乔木，高5?8m。叶片大，呈卵圆形，属春季观芽的银芽柳类型。产自我国东北三省和西北部等省份。花序先叶开放，较大。雄花序较长，长达2.5?4cm,粗约1.8cm ;花药黄色,雌花序较长，粗圆柱形，长4?5.5cm,粗1.2cm。花期4月，果期5月。冬季一年生枝条红色。 毛枝柳花序于春季展叶前开放，如同枯枝生花，是很好的春季观花树种；喜耐水湿，可作为河岸的绿化树种；枝条柔韧性好，可做编织用材。随着能源利用技术的发展，毛枝柳以其优良的表现，成为世界公认的能源树种。 毛枝柳为瑞典重要的一种发电用的能源林树种。柳树幼年生长量明显高于杨树等其它常见能源树种，适合于做超短期轮伐矮林作业系统树种，给生物质发电提供生产原材料。短的轮伐期容易保证生产原材料供应的频率，从而提高生物质发电设备的利用率。其栽植密度为每公顷1.5?2万株，轮伐期为3?5年，可达到最高产量。有研究普遍认为，柳树能源林造林，为了机械采伐的方便可采用双行栽植，株距为0.75m，行距为0.9m，双行间距为1.5m。 目前文献中尚无关于毛枝柳的组培快繁的报道。该方法为毛枝柳的快速繁殖提供了一种新的方法，为毛枝柳作为能源林和观赏柳的产业化提供了一种繁殖的新方法。
技术实现思路
为了改变目前毛枝柳繁殖、栽培不良的状况，本专利技术的目的在于加快毛枝柳的栽培和开发力度，提高毛枝柳的繁殖效率，加快毛枝柳种苗的规模化繁育，有利于毛枝柳作为能源木本植物和观赏银芽柳系列的生产和开发。本专利技术方法特别适用于春季生产初期采集嫩枝进行诱导丛生芽。 本专利技术提供，包括如下步骤: 采集毛枝柳当年生嫩茎，依次进行1)外植体消毒、2)丛生芽诱导培养、3)丛生芽增殖培养、4)丛生芽生根培养、5)炼苗移栽，得到毛枝柳组培苗。 所述采集毛枝柳当年生嫩枝，是在春天采集毛枝柳芽萌发形成的未封顶的枝条，要求枝条木质化程度低，要求每个茎段都长有1?2个腋芽。 所述1)外植体消毒，是流水冲洗嫩茎2?3h，在超净台上用75%酒精处理30?40s,无菌水漂洗3?4次，再用0.3%升萊(二氯化萊，Mercury chloride)中消毒7min,之后无菌水漂洗3?4次，并用无菌滤纸吸去多余水分。 所述2)丛生芽诱导培养:将毛枝柳当年生嫩枝去掉叶片，剪成3cm茎段，每个茎段留1?2个芽，接种在诱导培养基上，萌发新的丛生芽，培养42d后，叶片展开； 所述的诱导培养基是以DKW为基本培养基，含有1.0mg/L(终浓度，下同)的 6_BA(6_ 节基氛基嘿呤，benzylaminmopurine) >0.lmg/L 的 NAA(蔡乙酸，1-Naphthaleneacetic acid)、5g/L 琼脂、20g/L 葡萄糖的培养基，即 DKW+NAA0.1mg/L+6-BA1.0mg/L+ 葡萄糖 20g/L+ 琼脂粉 5g/L。 所述萌发新的丛生芽，时间为接种到丛生芽诱导培养基上18d后。 所述叶片展开，时间为接种到丛生芽诱导培养基上42d后。 所述2)丛生芽增殖继代:将丛生芽接入丛生芽增殖继代培养基上，置于温度25± 1°C的培养室内，每30?40d继代转瓶一次，继代3次生成生长健壮的组培苗； 所述的丛生芽增殖继代培养基是以DKW为基本培养基，含有2.0mg/L的6-BA、0.lmg/L的NAA、4.5g/L的琼脂、20g/L葡萄糖的培养基，即2/3DKW+IBA0.2mg/L+葡萄糖20g/L+ 琼脂粉 5g/L。 所述3)壮苗生根:将继代后大量形成的丛生芽，转入生根培养基进行生根诱导，促进生根，38d后长成带根的幼苗； 所述长成带根的幼苗，时间为接种到生根培养基上38天后。 所述生根培养基是以2/3DKW为基本培养基，含有0.2mg/L的IBA、4.5g/L琼脂、20g/L葡萄糖的培养基，即2/3DKW+IBA 0.2mg/L。 所述4)炼苗移栽:将带根的毛枝柳幼苗进行炼苗，移栽入基质，即培养成毛枝柳组培苗。 所述基质为草炭土:珍珠岩按体积比3: I混合所得的基质。 所述丛生芽诱导培养基、丛生芽增殖培养基、生根培养基的pH值优选为5.80。 所述的培养，培养条件为每天光照1h?12h，温度为25°C ±2°C、光照12h/d、光照强度2000?3000Ix。 本专利技术的创新之处是公开了毛枝柳生芽诱导、增殖、生根的配方及其组培快繁的种苗规模化繁育的一种方法。目前国内外未见同类报道。 本专利技术有利于加快作为优良能源柳和观赏柳的毛枝柳的繁殖，加快其种苗基数，有益于后期能源柳建设和观赏柳的园林普及和生产。 【附图说明】 图1:本专利技术所述毛枝柳组培及炼苗情况 其中:a:丛生芽诱导，b:丛生芽增殖，c:毛枝柳生根，d:毛枝柳出瓶炼苗后定植的组培苗 【具体实施方式】 一种毛枝柳组培快繁方法，该方法包括以下步骤:(下面实施例用于对本专利技术的进一步说明，但不用来限制本专利技术的范围。) 实施例1:以本专利技术的方法筛选毛枝柳诱导培养基 I)选取外植体:选取当年生生长健壮无病虫害的毛枝柳枝条嫩茎为外植体，剪成3cm茎段，每个茎段留I?2个芽,用洗涤剂清洗lOmin，然后用用自来水冲洗3h，最后晾干材料表面水分备用； 2)嫩茎诱导培养:将处理好的毛枝柳茎段，在超净工作台上用质量浓度为75%酒精浸泡30s，再用质量浓度为0.3%升汞消毒7min，最后用无菌水冲洗3次，再将嫩茎置于无菌滤纸上吸干表面多余水分，接种在茎段诱导培养基上，将接种的外植体置于温度22土 1 °C、光照12h/d、光照强度1500?20001x的培养室内，培养20d后芽萌发，待第42d叶片展开，将芽取下，转接到丛生芽增殖培养基上，置于培养室内，40d后愈伤组织上分化丛生芽(通过40d培养诱导单芽平均诱导丛生芽增殖系数达到2.6)，毛枝柳组培苗开始形成。 实施例2:以本专利技术的方法进行毛枝柳丛生芽增殖继代 将丛生芽接入丛生芽增殖继代培养基上，置于温度25±2°C、光照12h/d、光照强度2000?30001x的培养室内，每30?40d继代一次，继代3次生成生长健壮的组培苗(在继代第3次时其丛生芽增殖系数平均达到5.3)； 3)壮苗生根:将生长健壮的试管苗采用2/3DKW培养基进行生根培养，30d后长成带根的毛枝柳幼苗； 4)炼苗移栽:将带根的毛枝柳幼苗进行炼苗移栽，即培养成毛枝柳组培苗。 该专利技术方法诱导丛生芽分化达到快速增殖，进而诱导丛生芽生根，本专利技术可以使繁殖效率可达到9.0，生根率达到97%，炼苗成活率95 %。每株毛枝柳在规模化的育苗条件下，一年能繁育几十万株苗木，大大提高毛枝柳的苗木繁育效率。 以上所述实施举例仅是本专利技术之优选实施方式，是对本专利技术的进一步说明，但不用来限制本专利技术的范围。同时指出，对于本专业领域的普通技术人员来说，在不脱离该专利技术技术原理的前提下，还可做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视作本专利技术的保护范围。本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种毛枝柳组培快繁方法，包括如下几个步骤：采毛枝柳嫩茎为外植体，依次进行1)嫩茎消毒、2)嫩茎诱导培养、3)丛生芽增殖培养、4)丛生芽生根培养、5)炼苗移栽，组培苗出瓶上盆。

【技术特征摘要】
1.一种毛枝柳组培快繁方法，包括如下几个步骤: 采毛枝柳嫩茎为外植体，依次进行1)嫩茎消毒、2)嫩茎诱导培养、3)丛生芽增殖培养、4)丛生芽生根培养、5)炼苗移栽，组培苗出瓶上盆。2.根据权利要求1所述毛枝柳的组培快繁方法，其特征在于:所述1)嫩茎消毒，为剪取毛枝柳植株的当年生嫩茎，流水冲洗2?3匕在超净台上用75%酒精处理30?408，无菌水漂洗3?4次，再用0.3%升萊(二氯化萊，161-0111-7 0^101-1(16)中消毒7111111，之后无菌水漂洗3?4次，并用无菌滤纸吸去多余水分。3.根据权利要求1所述毛枝柳组培快繁方法，其特征在于:所述2)丛生芽诱导的方法是:在无菌条件下将获得的嫩茎接种于诱导培养基上，在25±21，光照14?16匕邱值为5.8?6.0，光强3000匕条件下培养，接种20(1后新芽开始萌发，20?30山获得丛生芽:42(1后叶片展开。4.根据权利要求3所述的毛枝柳茎段组培快繁的方法，其特征在于，所述丛生芽诱导培养基是以0X1培养基为基本培养基，含有的6-8八(6-苄基氨基嘌呤，1111^/1 白勺 X八八(蔡乙酸，161168061: 10 801(1) 琼月旨、208/1葡萄糖的培养基。5.根据权利要求1所述毛枝柳组培快繁方法，其特征在于...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙振元，李振坚，季萍倩，韩蕾，钱永强，刘俊祥，
申请(专利权)人：中国林业科学研究院林业研究所，
类型：发明
国别省市：北京;11