超临界二氧化碳萃取法提取高纯度细辛脂素的方法及用途技术

超临界二氧化碳萃取法提取高纯度细辛脂素的方法及用途。本发明专利技术属于天然药物领域，公开了一种提取高纯度细辛脂素的方法及用途。该方法是将细辛粗粉置于超临界CO2萃取装置中；萃取釜压力30～40Mpa，萃取釜温度45～70℃，分离釜Ⅰ和Ⅱ压力5～10Mpa、温度30～50℃，CO2流量35～60L/h，萃取时间60～240min，得细辛总挥发油；细辛总挥发油低温静置24～72h，减压抽滤，得细辛脂素粗品；细辛脂素粗品无水乙醇中重结晶2次，即得细辛脂素纯品。本发明专利技术首次发现细辛脂素具有较好的止咳活性，可以用于制备治疗各型咳嗽的药物。本发明专利技术首次公布了一种超临界CO2萃取法提纯细辛脂素的全新制备工艺，具有工艺简单、无溶剂残留、产品纯度高等优点。

【技术实现步骤摘要】
超临界二氧化碳萃取法提取高纯度细辛脂素的方法及用途
本专利技术属于天然药物
，更具体而言，涉及一种采用超临界二氧化碳萃取法从中药细辛中萃取挥发油，然后从挥发油提取高纯度细辛脂素的方法及其在制备治疗咳嗽药物中的用途。
技术介绍
咳嗽是困扰呼吸科门诊患者最常见的主诉。咳嗽是一种防御性反射活动，生理性咳嗽是一种有益的动作。然而，长期频繁或过于激烈的咳嗽则是一种病理性的反应，不仅会增加患者的痛苦，影响休息和睡眠，增加体力消耗，严重时还会促进疾病的发展，产生其它并发症。细辛作为一种传统中药，有上千年的使用历史。始载于《神农本草经》，列为上品。2010版《中国药典》规定细辛来源为马兜铃科植物北细辛AsarumHeterotropoidesFr.Schmidtvar.mandshuricum(Maxim.)Kitag.、汉城细辛AsarumsieboldiiMiq.var.seoulenseNakai或华细辛AsarumsieboldiiMiq.的干燥根与根茎。性温，味辛，归心、肺、肾经。具有解表散寒、祛风止痛、通窍、温肺化饮的功效，用于痰饮咳喘、风寒感冒、头痛、牙痛、鼻塞流涕、鼻鼽、鼻渊、风湿痹痛的治疗。已有文献报道细辛挥发油具有镇咳活性，并且认为主要药效成分为挥发油中的甲基丁香酚(周慧秋.甲基丁香酚药理作用研究.中医药学报.2000,(2):79-80)。细辛脂素被认为是细辛中含量较高的非挥发性成分(韩俊艳.中药细辛的研究进展.中国农学通报.2011,27(9):46-50)，主要存在于北细辛、汉城细辛和华细辛中，是2010版《中国药典》收载的细辛的质量控制成分。目前文献报道细辛脂素的制备方法均按1998年杨云主编的《中药化学成分提取分离手册》提取方法制备获得，此方法要经过乙醇热提取、水蒸汽蒸馏、乙醚萃取、乙醇重结晶等步骤，工艺复杂，同时，在提取过程中需加热处理，易致中药成分不稳定，此过程还需加入Pb(OAC)2、H2S、ET2O等有毒有机试剂，导致有机试剂残留问题，亦不适合工业化大生产。细辛脂素是一种木脂素类化合物，有关细辛脂素的研究报道较少，已有研究表明它具有免疫抑制效应，可用于抗移植排斥反应(张丽丽.细辛脂素抗心脏移植急性排斥反应的作用及对黏附分子表达的影响.中国中药杂志,2006,31(06):494-497.)。我们研究发现细辛脂素对柠檬酸诱导的豚鼠咳嗽模型具有较好的镇咳作用，目前尚未见有关细辛脂素镇咳活性的研究报道，更未见利用超临界CO2萃取法(SFE-CO2)从细辛挥发油中直接制备得到细辛脂素制备方法的报道。
技术实现思路
针对以上现有技术的不足，本专利技术的首要目的在于提供一种超临界二氧化碳萃取法提取高纯度细辛脂素(asarinin)的方法。本专利技术通过优化超临界CO2萃取条件获得细辛挥发油，再通过将细辛挥发油低温静置，减压抽滤，无水乙醇重结晶获得高纯度细辛脂素(白色针状晶体)。本专利技术的又一目的在于提供上述方法提取得到的高纯度细辛脂素在制备治疗各型咳嗽药物中的用途。本专利技术的药效结果表明，细辛脂素对柠檬酸诱导的豚鼠咳嗽模型具有较好的镇咳作用，是细辛治疗咳嗽的活性成分之一。本专利技术目的通过以下技术方案实现：一种超临界二氧化碳萃取法提取高纯度细辛脂素的方法，按照以下操作步骤：(1)将细辛的根与/或根茎洗净、晾干、粉碎，得细辛粗粉；(2)将细辛粗粉置于超临界CO2萃取装置的萃取釜中，密封；对萃取釜、分离釜分别进行加热，当萃取釜温度达到45～70℃时，分离釜Ⅰ和分离釜Ⅱ温度达到30～50℃，打开萃取釜阀门，当萃取釜内压力同贮罐压力相等时打开排气阀排净空气，通过高压泵对系统进行加压，当萃取釜压力达到30～40Mpa、分离釜Ⅰ和分离釜Ⅱ达到5～10Mpa时，控制CO2流量为35～60L/h，开始循环萃取；萃取60～240min得细辛总挥发油；(3)将细辛总挥发油在-20～4℃条件下低温静置24～72h，减压抽滤，得细辛脂素粗品；(4)取细辛脂素粗品加入细辛脂素粗品的1～5倍体积量的无水乙醇进行溶解，置于-20～4℃低温重结晶，待白色针状结晶析出，即得质量纯度大于98％的细辛脂素纯品。步骤(2)所述萃取釜温度设定在50℃；所述萃取釜压力达到35Mpa；所述分离釜Ⅰ和分离釜Ⅱ压力达到5Mpa，温度达到40℃；所述CO2流量控制在40L/h；所述萃取的时间为180min。步骤(1)所述细辛为北细辛、汉城细辛或华细辛，更加优选为北细辛。步骤(3)所述低温静置的温度为-5℃，时间为24h。步骤(4)所述无水乙醇的用量为细辛脂素粗品的1倍体积量。步骤(4)所述重结晶的次数为2次。上述方法提取得到的高纯度细辛脂素在制备治疗各型咳嗽药物中的用途，所述细辛脂素单独或与其他药物组合制备治疗各型咳嗽药物。所述细辛脂素与可用药物载体制成各种剂型。所述剂型为颗粒剂、片剂、胶囊剂、软胶囊剂、丸剂、滴丸剂、泡腾片、软膏剂、糖浆剂、注射剂、口服液、合剂、酊剂、缓释剂、控释剂或靶向制剂。药学上可接受的载体如：填充剂、粘合剂、润滑剂、崩解剂或润湿剂。填充剂包括乳糖、蔗糖、玉米淀粉、山梨醇；粘合剂包括糖浆、阿拉伯胶、明胶、山梨醇、羟丙基甲基纤维素或聚乙烯吡咯烷酮；润滑剂包括硬脂酸镁；崩解剂包括淀粉、聚乙烯吡咯烷酮、交聚维酮、微晶纤维素；润湿剂如十二烷基硫酸钠。所述的细辛脂素，是一种木脂素类化合物，分子式为C20H18O6，化学式为5,5'-[(1R,3aR,4S,6aR)-tetrahydro-1H,3H-furo[3,4-c]furan-1,4-diyl]bis-1,3-Benzodioxole，结构式如下：本专利技术可采用气相色谱法或气相色谱-质谱联用法或高效液相色谱法，测定细辛及细辛挥发油中细辛脂素的含量。所述气相色谱条件为DB-5MS石英毛细管柱(30m×0.25mm×0.25μm，i.d.)；分流比100:1，进样量：1μL；载气：高纯氦气；流速：1mL·min-1；溶剂延迟时间：3min，程序升温：柱温70℃(6min)，以10℃·min-1升至100℃(35min)，然后以10℃·min-1的速度升至230℃(20min)，进样口温度250℃。所述质谱条件为EI电子源，载气He；电子能量70eV，离子源温度230℃，传输线温度250℃，扫描范围40～450m/z，NIST2.0版谱库。所述液相色谱条件为AgilentZorbaxSB-C18色谱柱(4.6mm×250mm，5μm)；流动相A相为水，B相为乙腈，梯度洗脱，洗脱程序为：0～30min，45％～60％B，30～40min，60％～100％B；运行时间：40min，平衡时间：10min；体积流量：1.0mL·min-1；检测波长：285nm；柱温：30℃；进样量：10μL。本专利技术具有止咳活性的细辛脂素纯品的有效剂量按照人的体重60kg来计算，为0.35～1.4g/人·天。本专利技术的原理是：药理实验证明，本专利技术制备的细辛脂素具有良好的治疗咳嗽的活性，可用于预防或治疗各型咳嗽。药效学试验结果表明，以豚鼠为咳嗽模型，柠檬酸激发后本专利技术制备的细辛脂素低、中、高剂量组与空白对照组相比可明显延长动物的咳嗽潜伏期，降低豚鼠的咳嗽次数；与细辛SFE-CO2挥发油相比，细辛脂素高剂量组具有更好的本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种超临界二氧化碳萃取法提取高纯度细辛脂素的方法，其特征在于按照以下操作步骤：(1)将细辛的根与/或根茎洗净、晾干、粉碎，得细辛粗粉；(2)将细辛粗粉置于超临界CO2萃取装置的萃取釜中，密封；对萃取釜、分离釜分别进行加热，当萃取釜温度达到45～70℃时，分离釜Ⅰ和分离釜Ⅱ温度达到30～50℃，打开萃取釜阀门，当萃取釜内压力同贮罐压力相等时打开排气阀排净空气，通过高压泵对系统进行加压，当萃取釜压力达到30～40Mpa、分离釜Ⅰ和分离釜Ⅱ达到5～10Mpa时，控制CO2流量为35～60L/h，开始循环萃取；萃取60～240min得细辛总挥发油；(3)将细辛总挥发油在‑20～4℃条件下低温静置24～72h，减压抽滤，得细辛脂素粗品；(4)取细辛脂素粗品加入细辛脂素粗品的1～5倍体积量的无水乙醇进行溶解，置于‑20～4℃低温重结晶，待白色针状结晶析出，即得质量纯度大于98％的细辛脂素纯品。

【技术特征摘要】
1.一种超临界二氧化碳萃取法提取高纯度细辛脂素的方法，其特征在于按照以下操作步骤：(1)将细辛的根与/或根茎洗净、晾干、粉碎，得细辛粗粉；(2)将细辛粗粉置于超临界CO2萃取装置的萃取釜中，密封；对萃取釜、分离釜分别进行加热，当萃取釜温度达到45～70℃时，分离釜Ⅰ和分离釜Ⅱ温度达到30～50℃，打开萃取釜阀门，当萃取釜内压力同贮罐压力相等时打开排气阀排净空气，通过高压泵对系统进行加压，当萃取釜压力达到30～40Mpa、分离釜Ⅰ和分离釜Ⅱ达到5～10Mpa时，控制CO2流量为35～60L/h，开始循环萃取；萃取60～240min得细辛总挥发油；(3)将细辛总挥发油在-20～4℃条件下低温静置24～72h，减压抽滤，得细辛脂素粗品；(4)取细辛脂素粗品加入细辛脂素粗品的1～5倍体积量的无水乙醇进行溶解，置于-20～4℃低温重结晶，待白色针状结晶析出，即得质量纯度大于98％的细辛脂素纯品。2.根据权利要求1所述的一种超临界二氧化碳萃取法提取高纯度细辛脂素的方法，其特征在于：步骤(2)所述萃取釜温度设定在50℃；所述萃取釜压力达到35Mpa；所述分离釜Ⅰ和分离釜Ⅱ压力达到5Mpa，温度达到40℃；所述CO2流量控制在40L/h；所述萃取的时间为180min...

【专利技术属性】
技术研发人员：赖克方，刘晓东，钟伯年，钟山，聂怡初，
申请(专利权)人：广州医科大学附属第一医院，广州呼吸疾病研究所，
类型：发明
国别省市：广东;44