一种适用于含绿色荧光蛋白茧丝的脱胶方法技术

本发明专利技术公开了一种适用于含绿色荧光蛋白茧丝的脱胶方法，包括如下步骤：将茧丝烘至恒重，在浴比为1：50的预处理液中浸泡，然后在碱性蛋白酶浓度为0.5～3g·L-1、温度为40～60℃条件下脱胶30～120分钟，水洗、烘干，得脱胶茧丝，其中预处理液为pH＝10的含1g/L纯碱和0.5g/L渗透剂JFC的溶液，该方法适用于含绿色荧光蛋白茧丝的脱胶，脱胶率高，并且能够最大限定保持茧丝的荧光特性，该方法脱胶后对茧丝的力学性能损失较小，手感柔软，丝光好，可满足转基因绿色茧蚕丝脱胶的要求。

【技术实现步骤摘要】
-种适用于含绿色巧光蛋白虽丝的脱胶方法
本专利技术属于化学领域，具体涉及一种适用于含绿色英光蛋白虽丝的脱胶方法。
技术介绍
纺织印染行业一直被认为是一个大的污染源，其中染整业的染化药品是重要的 贡献者。该些染化药品除对操作工人的健康有影响，还会给消费者带来长期危害，甚至某 些染料还有致癌性。近年来，蚕丝染色主要采用酸性染料和活性染料。就染色效果来说，酸 性染料色彩鲜艳，但染色牢度差；活性染料虽然染色牢度好，但染料的利用率不高，染色的 重现性差，改色困难；又由于蚕丝丝素在碱性过高时易损伤，因此蚕丝的染色存在很多局限 性。 随着piggyBac介导的转基因技术在家蚕中的建立和广泛应用，各种转基因家蚕 丝腺表达系统如Fib-H，Fib-L，P25和Seri相继被建立起来的用于外源基因在转基因家蚕 丝腺中的精确与高量表达，该些表达系统不仅可W用来大规模生产具有高附加值的重组外 源蛋白。同时也能利用其在蚕丝中表达具有不同生物学功能的蛋白，进而遗传改良蚕丝的 机械，赋予蚕丝新生物学功能和用途，具有非常广阔的应用前景。化ao等将绿色英光蛋白 GFP至于家蚕的丝素基因启动子的控制之下实现在蚕丝丝素层中的表达，育成含有天然绿 色英光蛋白成分的新型蚕虽。GFP是一种能够自身催化形成生色团并在蓝光或紫外光激发 下发出绿色英光的蛋白，其具有英光稳定、易于检测、生物安全性好等优点。随着转基因技 术的进一步发展，会有更多天然彩色虽诞生，为蚕丝带来一场颜色革命。 但是，新型彩色虽的诞生同时也带来了新的问题；丝胶的存在会影响蚕丝的手感、 色泽W及后续的印染加工，因此蚕丝必须进行精练。该些新型彩色虽要想工业化，也必须进 行缕丝、精练等一系列的加工。蚕丝的精练主要是脱去丝胶的过程，其原理是将丝胶在酸、 碱、酶、高温高压等条件下通过膨化而溶解，强酸强碱、高温高压等条件都极易使蛋白质变 性，因此脱胶的过程即伴随着蛋白的变性过程。而绿色虽丝中的英光蛋白由于本质上仍具 有蛋白质的特性，不耐高温，对酸碱的敏感度仍有待确定（一旦产生变性，则英光消失）。生 丝固胶软化的生产方法一文中采用低温固胶的技术将蚕丝中的丝胶固着，此种固胶工艺温 和，可保持绿色虽丝的色彩，但该种方式处理的虽丝手感较差，其使用也受到限制。 因此，急需寻找一种不影响英光蛋白活性，脱胶率高的脱胶方法。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术的目的在于提供一种适用于含绿色英光蛋白虽丝的脱胶方法， 脱胶率高，并能最大限定保持虽丝的英光特性，该方法脱胶后对虽丝的力学性能损失较小， 手感柔软，丝光好。 为实现上述专利技术目的，本专利技术提供如下技术方案： -种适用于含绿色英光蛋白虽丝的脱胶方法，包括如下步骤；将虽丝烘干至恒重， 在浴比为1 ;50的预处理液中浸泡，然后在碱性蛋白酶浓度为0. 5?3g ? [1、温度为40? 6(TC条件下脱胶30?120分钟，水洗、烘干至恒重，得脱胶虽丝，所述预处理液为抑=10 的含Ig/L纯碱和0. 5g/L渗透剂JFC的溶液。 优选的，所述浸泡的条件是在温度为5(TC条件下浸泡0. 5小时。 优选的，所述脱胶中，碱性蛋白酶浓度为3g/L。 优选的，所述脱胶的温度为5(TC。 优选的，所述脱胶的时间为120分钟。 优选的，所述水洗的条件是依次用温度为8(TC、5(TC和18?25C的水洗5分钟。 更优选的，所述烘干的温度为105?iicrc。 本专利技术的有益效果在于；本专利技术公开通过采用皂碱法、木瓜蛋白酶、碱性蛋白酶分 别对绿色虽丝进行脱胶，在保持丝素中的绿色英光蛋白活性的前提下，最大程度的脱除丝 胶。通过比较H种脱胶方法的正交实验结果可知，H种方法在适当的条件下均可完全脱胶， 但碱性蛋白酶完全脱胶的条件明显更加温和，并且显微镜下的照片显示，在达到最大脱胶 率时，皂碱法和木瓜蛋白酶脱胶后的绿色虽丝英光消失，而碱性蛋白酶脱胶后的绿色虽丝 仍保持较强的英光特性。对脱胶虽丝的力学性能检测显示，采用此法脱胶获得的虽丝力学 性能损失较小，手感柔软、丝光好，可W满足含绿色英光蛋白虽丝脱胶的要求。 【附图说明】 为了使本专利技术的目的、技术方案和有益效果更加清楚，本专利技术提供如下附图： 图1为绿色英光虽丝英光观察（A-B ;绿色英光虽丝的白光图和英光图；C-D ;正常 虽丝的白光图和英光图）。 图2为皂碱法脱胶绿色虽丝对绿色英光特性的影响。 图3为木瓜蛋白酶脱胶绿色虽丝对绿色英特性的影响。 图4为碱性蛋白酶脱胶绿色英光虽丝英光特性的影响（A :白光图；B ;绿色英光 图）。 图5为沈M观察结果W及虽丝在断裂时的应力数和行变数拟合分析结果（A ;SEM 观察结果；B ;应力数和行变数拟合分析结果）。 【具体实施方式】 下面将结合附图，对本专利技术的优选实施例进行详细的描述。实施例中未注明具体 条件的实验方法，通常按照常规条件或按照制造厂商所建议的条件。 W下实施例使用的材料、主要试剂及仪器如下： 材料；含绿色英光蛋白虽丝（简称绿色虽丝）由西南大学家蚕基因组生物学 国家重点实验室提供，其制备方法参见化ao A，化ao T，化ang Y，et al.New and hi曲ly efficient expression systems for expressing selectively foreign protein in the silk glands of transgenic silkworm. Transgenic Res. 2010 ; 19:29-44。分别取绿色虽 丝和正常虽丝，切片后置于英光显微镜下观察，结果如图1所示。结果显示本专利技术实施例中 使用的绿色虽丝在丝素层散发出强烈的绿色英光信号。 [00巧]试剂；工业皂片购自重庆重陵日化厂；木瓜蛋白酶、碱性蛋白酶和中性蛋白酶购 自南宁鹿博生物工程有限公司，渗透剂JFC，无水碳酸轴，冰己酸均为分析纯。 仪器；H孔电热恒温水槽购自上海齐欣科学仪器有限公司，热机械分析仪DMA Q800购自美国TA Instruments公司。 实施例1、绿色虽丝英光观察及含胶率测定 [002引取6g绿色虽丝，放入恒温烘箱内，W 105?11(TC烘至恒重，即为试验前干重W。， 再将试样在下列条件下进行处理： 纯碱 1 g 磯酸H钥 2g 软水量 lOOOg 温度 loor 时间 比 试样经上述条件处理后，用软水充分洗涂，再于105?iicrc烘至恒重，即为试验 后干重Wi，然后按下述公式计算含胶率，精确至0. 01 %。 [003。含胶率=(Wg-Wi)/WgX100% 重复H个平行试验，取H次平均值作为含胶率的最终结果。计算得到含胶率为 26. 86%。将此含胶率作为脱胶效果的评判标准，脱胶率越接近含胶率，说明脱胶越充分。 实施例2、皂碱法脱胶绿色虽丝的方法 取绿色虽丝样品在105?11(TC烘箱中烘至恒重，并记录绿色虽丝干重，记为m。， 在浴比为1:50的皂碱溶液中浸泡0. 5小时，其中皂碱溶液含浓度为3?7g ?。的工业皂 和浓度为1?5g ?。的纯碱，然后在温度为60?95C条件下脱胶20?本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种适用于含绿色荧光蛋白茧丝的脱胶方法，其特征在于，包括如下步骤：将茧丝烘干至恒重，在浴比为1:50的预处理液中浸泡，然后在碱性蛋白酶浓度为0.5～3g·L‑1、温度为40～60℃条件下脱胶30～120分钟，水洗、烘干至恒重，得脱胶茧丝，所述预处理液是pH＝10的含1g/L纯碱和0.5g/L渗透剂JFC的溶液。

【技术特征摘要】
1. 一种适用于含绿色荧光蛋白茧丝的脱胶方法，其特征在于，包括如下步骤：将茧丝 烘干至恒重，在浴比为1:50的预处理液中浸泡，然后在碱性蛋白酶浓度为0. 5?3g ? L' 温度为40?60°C条件下脱胶30?120分钟，水洗、烘干至恒重，得脱胶茧丝，所述预处理液 是pH = 10的含lg/L纯碱和0. 5g/L渗透剂JFC的溶液。2. 根据权利要求1所述的脱胶方法，其特征在于：所述浸泡的条件是在温度为50°C条 件下浸泡0.5小时。3....

【专利技术属性】
技术研发人员：席星航，杨佩，王峰，赵萍，夏庆友，
申请(专利权)人：西南大学，
类型：发明
国别省市：重庆;85