一种利用活跃链霉菌发酵生产那西肽的方法技术

技术编号:11119571 阅读:79 留言:0更新日期:2015-03-07 01:03
本发明专利技术公开一种利用活跃链霉菌发酵生产那西肽的方法,包括在斜面培养基上进行孢子培养、在种子罐培养基上进行菌种培养和在发酵罐培养基上进行发酵三个步骤,并对各步骤培养或发酵参数进行了优化。与现有技术相比,本发明专利技术优化了活跃链霉菌的活化,通过不同阶段培养活跃链霉菌,提高其生物活性。那西肽收率提高60%以上。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于微生物发酵领域,涉及。
技术介绍
那西肽是一种带有5个座哇环的多肽类抗生素,其分子式为C51H43N13012S6,分子量为1222,那西肽为黄绿色物质,呈粉末状或细针状结晶,熔点为310?320°C (伴随分解)。那西肽可溶于氯仿、毗陡、二甲基酸胺、二甲基亚矾,微溶于甲醇,乙醇、乙酸乙酯和苯,不溶于水。那西肽以其相对安全性及良好的应用效果符合当前人们对饲料添加剂的要求,是一种比较理想的饲用抗生素换代品。目前,欧盟和日本已批准并广泛使用。 那西肽是用微生物培养方法生产的,那西肽产生菌主要有活跃链霉菌(streptomyes actuosus)、抗生素链霉菌(S.antib1tics)和青灰色链霉菌(S.glaucogriseus),其中以活跃链霉菌为最好。 但是,现有的微生物发酵方法生产那西肽,生产成本高、产率低。
技术实现思路
鉴于此,本专利技术目的在于提供一种产率高的利用活跃链霉菌发酵生产那西肽的方法。 为解决以上技术问题,本专利技术提供的技术方案是,提供,包括以下步骤: I)使用无菌接种针挖取适量砂土接种至斜面培养基上培养数天,向培养成熟的孢子斜面加入无菌水,使用无菌接种针轻轻刮下孢子;培养温度为28°C,湿度40-60% ; 2)向种子罐培养基上接种步骤I)制备得到的孢子繁殖菌体,接种量22亿,通气比0.9,罐压0.04Mp,溶氧控制在30%,当菌浓达到30%进行移种,移种周期25h,移种pH值为6.8 ;培养温度30。。, 3)向发酵罐培养基上接种步骤2)繁殖的菌体,接种量10%,通气比0.8,罐压0.04Mp,全程流加氨水来调节pH值并补充氮源,通过调节搅拌转速和通气比来控制溶氧,放罐周期为180-220h,发酵结束,即得到那西肽混悬液。 进一步地,所述斜面培养基的组分为:可溶性淀粉2.lg/100mL,K2HPO40.08g/100mL, MgSO40.06g/100mL, FeSO40.003g/100mL, NaCl0.03g/100mL,KNO30.02g/100mL,琼脂 2.0g/100mL。 进一步地,所述发酵罐培养基的组分为:可溶性淀粉6.0g/100mL,黄豆饼粉 3.5g/100mL, (NH4) 2S041.0g/100mL, CaCO3L 0g/100mL, K2HPO40.08g/100mL,NaCl0.10g/100mL,豆油 0.8g/100mL,消沫剂 0.05g/100mL。 进一步地,所述种子罐培养基的组分为:葡萄糖2g/100mL,黄豆饼粉2.5g/100mL,(NH4)2SO40.2g/100mL, MgSO40.03g/100mL,碳酸钙 CaCO30.4g/100mL, K2HPO40.02g/100mL,豆油 0.3g/100mL,消沫剂 0.02g/100mL。 与现有技术相比,上述技术方案中的一个技术方案具有如下优点: 1、本专利技术优化了活跃链霉菌的活化,通过不同阶段培养活跃链霉菌,提高其生物活性。 2、本专利技术针对不同阶段,配置了更加专一的培养基,为活跃链霉菌的生长提供更加合理的碳源、氮源、以及金属离子,充分保障菌体的正常生产和代谢。 3、本专利技术方法那西肽收率提高60%以上。 【具体实施方式】 实施例1 本实施例所用活跃链霉菌来源为市购。 按照以下配方制作培养基:斜面培养基、种子罐培养基和发酵罐培养基。 斜面培养基:可溶性淀粉2.1g/1OOmL, K2HPO40.08g/100mL, MgSO40.06g/100mL,FeSO40.003g/100mL, NaCl0.03g/100mL, KNO30.02g/100mL,琼脂 2.0g/lOOmL ; 种子罐培养基:葡萄糖2g/100mL,黄豆饼粉 2.5g/100mL, (NH4)2SO40.2g/100mL,MgSO40.03g/100mL,碳酸钙 CaCO30.4g/100mL, K2HPO40.02g/100mL,豆油 0.3g/100mL,消沫剂0.02g/100mL ; 发酵罐培养基:可溶性淀粉6.0g/100mL,黄豆饼粉3.5g/100mL,(NH4)2SO4L 0g/100mL, CaCO3L 0g/100mL, K2HPO40.08g/100mL, NaCl0.lOg/lOOmL,豆油0.8g/100mL,消沫剂 0.05g/100mL。 使用无菌接种针挖取适量砂土接种至斜面培养基上培养8天,向培养成熟的孢子斜面加入无菌水,使用无菌接种针轻轻刮下孢子;培养温度为28°C,湿度40-60%。 向种子罐培养基上接种步骤I)制备得到的孢子繁殖菌体,接种量22亿,通气比0.9,罐压0.04Mp,溶氧控制在30 %,当菌浓达到30 %进行移种,移种周期25h,移种pH值为6.8 ;培养温度30。。。 向发酵罐培养基上接种步骤2)繁殖的菌体,接种量10 %,通气比0.8,罐压0.04Mp,全程流加氨水来调节pH值并补充氮源,通过调节搅拌转速和通气比来控制溶氧,放罐周期为180-220h,发酵结束,即得到那西肽混悬液。检测那西肽效价为2600U/mL,相比与现有技术1620U/mL提高60.5 %。本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种利用活跃链霉菌发酵生产那西肽的方法,其特征在于,包括以下步骤:1)使用无菌接种针挖取砂土接种至斜面培养基上培养,向培养成熟的孢子斜面加入无菌水,使用无菌接种针刮下孢子;培养温度为28℃,湿度40‑60%;2)向种子罐培养基上接种步骤1)制备得到的孢子繁殖菌体,接种量22亿,通气比0.9,罐压0.04Mp,溶氧控制在30%,当菌浓达到30%进行移种,移种周期25h,移种pH值为6.8;培养温度30℃,3)向发酵罐培养基上接种步骤2)繁殖的菌体,接种量10%,通气比0.8,罐压0.04Mp,全程流加氨水来调节pH值并补充氮源,通过调节搅拌转速和通气比来控制溶氧,放罐周期为180‑220h,发酵结束,得到那西肽混悬液。

【技术特征摘要】
1.一种利用活跃链霉菌发酵生产那西肽的方法,其特征在于,包括以下步骤: . 1)使用无菌接种针挖取砂土接种至斜面培养基上培养,向培养成熟的孢子斜面加入无菌水,使用无菌接种针刮下孢子;培养温度为28°C,湿度40-60% ; .2)向种子罐培养基上接种步骤I)制备得到的孢子繁殖菌体,接种量22亿,通气比.0.9,罐压0.04Mp,溶氧控制在30%,当菌浓达到30%进行移种,移种周期25h,移种pH值为.6.8 ;培养温度30。。, . 3)向发酵罐培养基上接种步骤2)繁殖的菌体,接种量10%,通气比0.8,罐压0.04Mp,全程流加氨水来调节pH值并补充氮源,通过调节搅拌转速和通气比来控制溶氧,放罐周期为180-220h,发酵结束,得到那西肽混悬液。2.根据权利要求1所述的利用活跃链霉菌发酵生产那西肽的方法,其特征在于,所述斜面培养基的组分为:可溶性淀粉 2.1g/1OOmL, K2HPO40.08g/100mL, MgSO40.06g/100mL,...

【专利技术属性】
技术研发人员:金京勋
申请(专利权)人:苏州嘉禧萝生物科技有限公司
类型:发明
国别省市:江苏;32

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