本发明专利技术公开了一种同时测定地龙注射剂中五种氨基酸含量的PR-HPLC测定方法，该方法色谱条件：C18或C8反相色谱柱，柱温：37℃，检测波长248nm，流速0.8ml/min梯度洗脱，流动相A为5.0mmol/L七氟丁酸的0.7%三氟乙酸水溶液，流动相B为60%乙腈水溶液，洗脱液流速为0min100%A，0.5min98.5%A,10min90%A,15min67%A,20min20%A,25min0%A；对照品溶液及供试品溶液的配制；精密量取对照品溶液与供试品溶液各10μl注入反相液相色谱仪，进行反相液相色谱测定分析。该测定方法操作简单快速，无需衍生剂，且稳定性强、重现性好，能更好地对地龙注射液的有效成分及质量进行控制的反相高效液相色谱测定方法。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及仪器分析
，具体涉及一种同时测定地龙注射剂中五种氨基酸含量的PR-HPLC测定方法。
技术介绍
地龙注射液，平喘止咳。用于支气管哮喘所致的咳嗽、喘息。 早期对于地龙注射液含量测定由3部分组成，分别为氮测定法测总氮量、滴定法测氨基氮及薄层色谱法测缬氨酸含量，但该测定方法专属性不强、且重现性不高，无法对地龙注射液的有效成分及质量进行控制。 黄璐敏在《中国药师》2010年第13卷第11期的“HPLC法测定地龙注射液中主要氨基酸的含量”公开了一种建立测定地龙注射液中主要氨基酸含量的方法，该方法以6-氨基喹啉-N-羟基琥珀酰亚胺基甲酸酯（AQC）为衍生剂，与地龙注射液中的游离氨基酸柱前定量颜色，用HPLC法测定衍生物含量。虽然丙氨酸、缬氨酸、盐酸赖氨酸、异亮氨酸、亮氨酸在各自浓度范围内线性关系良好，平均回收率102.6~104.9%，RSD 0.3~0.9%，但其需要使用到衍生剂进行衍生测定，操作复杂。
技术实现思路
为了克服上述现有技术的不足，本专利技术提供了一种操作简单快速，无需衍生剂，且其稳定性强、重现性好，能更好地对地龙注射液的有效成分及质量进行控制的反相高效液相色谱测定方法。 本专利技术提供了一种同时测定地龙注射剂中五种氨基酸含量的PR-HPLC（反相高效液相色谱法）测定方法，包含如下步骤： S1、色谱条件：C18或C8反相色谱柱，柱温：37℃，检测波长248nm，流速0.8ml/min梯度洗脱，流动相A为5.0mmol/L七氟丁酸的0.7%三氟乙酸水溶液，流动相B为60%乙腈水溶液，洗脱液流速为0min 100%A，0.5min 98.5%A, 10min 90%A,15min 67%A, 20min 20%A, 25min 0%A；S2、对照品溶液的配制：精密称取丙氨酸对照品90.79mg、缬氨酸对照品39.94mg、盐酸赖氨酸对照品32.53mg、异亮氨酸对照品30.87mg、亮氨酸对照品60.28mg，另取酪氨酸1.3g，加入0.1mol/L盐酸溶液溶解，用水定容于容量瓶，得对照品溶液；S3、供试品溶液的配制：取地龙注射液五支，混匀，用水定容于容量瓶，得供试品溶液；S4、测定：精密量取对照品溶液与供试品溶液各10μl注入反相液相色谱仪，进行反相液相色谱测定分析。优选地，步骤S2具体包括：精密称取105℃干燥3h的丙氨酸对照品90.79mg、缬氨酸对照品39.94mg、盐酸赖氨酸对照品32.53mg、异亮氨酸对照品30.87mg、亮氨酸对照品60.28mg，另取酪氨酸1.3g，置于同一100ml量瓶中加少量0.1mol/L盐酸溶液溶解，加水稀释至刻度，且再精密量取5ml，置100ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液。 更优选地，步骤S3具体包括：取地龙注射液五支，混匀，精密量取5ml，置100ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得供试品溶液。 与现有技术相比，本专利技术的有益效果如下： （1）操作分析步骤简单快速，无需采用衍生剂进行衍生，减少试剂的使用，有利于环保节约；（2）专属性强，地龙注射液广地龙阴性制剂色谱在相应氨基酸对照品色谱相应位置上无干扰；（3）回收率高，加入氨基酸母液，丙氨酸、缬氨酸、盐酸赖氨酸、异亮氨酸、亮氨酸的平均回收率分别为106.7%，105.0%，108.7%，104.6%，105.4%；（4）重复性高、精密度好，对同一批号地龙注射液制备6份供试品溶液测定，其RSD均小于1.5%，对同一批号地龙注射液连续5次测定，其RSD均小于0.7%。具体实施方式下面结合本专利技术实施例，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其它实施例，都属于本专利技术保护的范围。 仪器与试药 仪器：Waters e2695高效液相色谱仪，Waters 2489UV/Visible检测器，Empowe 3工作站；瑞士METTLER AE-240电子天平。色谱柱：Waters Symmetry C18或C8反相色谱柱，5μm，4.6×150mm（优选C18反相色谱柱：No：WAT045905，No：WAT054448）试药：地龙注射液（博罗先锋药业有限公司生产批号060501等20批）；地龙注射液广地龙阴性制剂（自制）；丙氨酸、缬氨酸、盐酸赖氨酸、异亮氨酸、亮氨酸对照品（中国药品生物制品检定所，624-200104）；乙腈为色谱纯，水为超纯水，其它试剂均为分析纯。实施例1 地龙注射液氨基酸含量测定 测定地龙注射液中五种氨基酸的含量，五种氨基酸分别为丙氨酸、缬氨酸、盐酸赖氨酸、异亮氨酸、亮氨酸。测定步骤为： S1、色谱条件：C18反相色谱柱，柱温：37℃，检测波长248nm，流速0.8ml/min梯度洗脱，流动相A为5.0mmol/L七氟丁酸的0.7%三氟乙酸水溶液，流动相B为60%乙腈水溶液，洗脱液流速为0min 100%A，0.5min 98.5%A, 10min 90%A,15min 67%A, 20min 20%A, 25min 0%A；S2、对照品溶液的配制：精密称取105℃干燥3h的丙氨酸对照品90.79mg、缬氨酸对照品39.94mg、盐酸赖氨酸对照品32.53mg、异亮氨酸对照品30.87mg、亮氨酸对照品60.28mg，另取酪氨酸1.3g，置于同一100ml量瓶中加少量0.1mol/L盐酸溶液溶解，加水稀释至刻度，且再精密量取5ml，置100ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液；S3、供试品溶液的配制：取地龙注射液五支，混匀，精密量取5ml，置100ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得供试品溶液；S4、测定：精密量取对照品溶液与供试品溶液各10μl注入反相液相色谱仪，进行反相液相色谱测定分析。取批号060501等20批进行地龙注射液中五种氨基酸含量的测定，测定结果见表1。 表1 地龙注射液的五种氨基酸含量测定结果 结果：20批地龙注射液中丙氨酸的平均含量为1.5415mg，缬氨酸的平均含量为0.991mg，盐酸赖氨酸的平均含量为0.551mg，异亮氨酸的平均含量为0.7615mg，亮氨酸的平均含量为1.6345mg。实施例2 线性关系考察 取上述对照品溶液，分别精密量取1.0、2.0、4.0、5.0、6.0、8.0、 10.0μl注入高效液相色谱仪，记录色谱图，测定其峰面积积分值，以对照品浓度为横坐标，相应峰面积积分值为纵坐标，并以峰面积积分值Y对对照品浓度（进样量）X进行线性回归计算，其中丙氨酸回归方程为y=2921.3x-16.4，r=0.99978（n=7）、缬氨酸回归方程y=2598x+1.94，r=0.99998（n=7）、盐酸赖氨酸回归方程y=2743.6x+0.87，r=0.99997（本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种同时测定地龙注射剂中五种氨基酸含量的PR‑HPLC测定方法，其特征在于，包含如下步骤：S1、色谱条件：C18或C8反相色谱柱，柱温：37℃，检测波长248nm，流速0.8ml/min梯度洗脱，流动相A为5.0mmol/L七氟丁酸的0.7%三氟乙酸水溶液，流动相B为60%乙腈水溶液，洗脱液流速为0min 100%A，0.5min 98.5%A, 10min 90%A,15min 67%A, 20min 20%A, 25min 0%A；S2、对照品溶液的配制：精密称取丙氨酸对照品90.79mg、缬氨酸对照品39.94mg、盐酸赖氨酸对照品32.53mg、异亮氨酸对照品30.87mg、亮氨酸对照品60.28mg，另取酪氨酸1.3g，加入0.1mol/L盐酸溶液溶解，用水定容于容量瓶，得对照品溶液；S3、供试品溶液的配制：取地龙注射液五支，混匀，用水定容于容量瓶，得供试品溶液；S4、测定：精密量取对照品溶液与供试品溶液各10μl注入反相液相色谱仪，进行反相液相色谱测定分析。
【技术特征摘要】
1.一种同时测定地龙注射剂中五种氨基酸含量的PR-HPLC测定方法，其特征在于，包含如下步骤：
S1、色谱条件：C18或C8反相色谱柱，柱温：37℃，检测波长248nm，流速0.8ml/min梯度洗脱，流动相A为5.0mmol/L七氟丁酸的0.7%三氟乙酸水溶液，流动相B为60%乙腈水溶液，洗脱液流速为0min 100%A，0.5min 98.5%A, 10min 90%A,15min 67%A, 20min 20%A, 25min 0%A；
S2、对照品溶液的配制：精密称取丙氨酸对照品90.79mg、缬氨酸对照品39.94mg、盐酸赖氨酸对照品32.53mg、异亮氨酸对照品30.87mg、亮氨酸对照品60.28mg，另取酪氨酸1.3g，加入0.1mol/L盐酸溶液溶解，用水定容于容量瓶，得对照品溶液；
S3、供试品溶液的配制：取地龙注射液五支，混匀，用水定容于容量瓶，得供...
【专利技术属性】
技术研发人员：任宏，李冠儒，谢作君，
申请(专利权)人：广东新峰药业股份有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44
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