一种检测空气中浮游细菌的方法技术

本发明专利技术公开了一种检测空气中浮游细菌的方法。该方法包括如下步骤：1)将盛有无菌生理盐水的无菌平皿放入浮游细菌采样器中，从若干采样点采集空气；2)测定采集液的细菌含量；3)吸取所述采集液采用ATP荧光检测仪测定荧光值；4)根据步骤2)和3)结果，获得所述细菌含量的对数值与所述荧光值的对数值之间的标准曲线方程；5)参照步骤1)和3)测定待测空气的荧光值，代入所述标准曲线方程，从而获得所述待测空气中浮游细菌的含量。本发明专利技术首次将常规的撞击式空气采集法与ATP生物发光法相结合，可通过ATP荧光值快速确定空气中的细菌含量，极大节省了微生物培养的时间，提高了检测浮游细菌的效率，减少食品加工过程中外源微生物污染的发生。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于微生物检测领域，涉及一种检测空气中浮游细菌的方法。
技术介绍
在食品生产加工的过程中，空气中的浮游细菌是食品微生物污染的主要来源之一。对浮游细菌的数量进行监测和控制，对保证食品安全卫生具有重要意义。根据《GB/T18204-2000公共场所空气微生物检测方法细菌总数测定》，目前普遍的采集空气中微生物的方法主要为撞击法和自然沉降法，空气样品采集完毕后均需要对采集到的浮游细菌恒温培养48h，然后再进行平板菌落计数，该方法具有明显的滞后性，食品生产企业无法依据此方法对原材料存储场所、食品生产加工过程车间、成品及半成品储存场所中空气洁净度进行实时监控，这也给食品生产过程带来卫生安全隐患，因此，食品生产加工行业亟需一种空气中浮游细菌的快速检测技术，提高食品生产全过程相关环境中空气浮游细菌污染的监控效率。
技术实现思路
本专利技术的一个目的是提供一种检测空气中浮游细菌的方法。本专利技术所提供的检测空气中浮游细菌的方法，具体可包括如下步骤：(1)将盛有无菌生理盐水的无菌平皿放入浮游细菌采样器中，从若干采样点(10个以上)采集空气；(2)采集完毕后，分别测定每个采样点的平皿中采集液的细菌含量(CFU/mL)；(3)吸取所述采集液放入ATP荧光检测仪样品杯中，加入复合荧光试剂，用移液枪反复抽吸4次，混匀后将所述样品杯置于ATP荧光检测仪中测定荧光值(RLU)；(4)根据步骤(2)和步骤(3)的测定结果，获得所述采集液的细菌含量的对数值与所述荧光值的对数值之间的标准曲线方程；(5)将盛有无菌生理盐水的无菌平皿放入所述浮游细菌采样器中，采集待测的空气；吸取平皿中的待测采集液放入所述ATP荧光检测仪样品杯中，加入所述复合荧光试剂，将所述样品杯置于ATP荧光检测仪中测定荧光值，记为待测荧光值；(6)将步骤(5)获得的所述待测荧光值的对数代入步骤(4)的所述标准曲线方程，计算得到所述待测采集液中的细菌含量，进而获得所述待测的空气中浮游细菌的含量。在所述方法中，所述复合荧光试剂主要由细菌裂解剂和荧光素酶组成。在本专利技术的一个实施例中，所述复合荧光试剂具体为中质赛福(北京)科技仪器有限公司生产的产品编号为ZF0011的复合荧光试剂。在本专利技术中，所述采集液或所述待测采集液的用量具体为100μL，所述复合荧光试剂的用量具体为25μL。在所述方法的步骤(1)和步骤(5)中，所述无菌生理盐水的用量为20mL。所述无菌平皿为无菌的微生物培养皿。在所述方法的步骤(1)和步骤(5)中，所述空气的采集量均参考《GB/T 16293-2010医药工业洁净室(区)浮游菌的测试方法》，空气采集量根据具体的洁净度要求而定：若所述空气的洁净度为100级，则所述空气的采集量为1000L；若所述空气的洁净度为10000级，则所述空气的采集量为500L；若所述空气的100000级与100000级以上，则所述空气的采集量为100L。在所述方法的步骤(2)中，所述测定每个采样点的平皿中采集液的细菌含量，是按照国标GB4789.2-2010进行测定的。在所述方法的步骤(6)中，当根据所述标准曲线方程计算得到所述待测采集液中的细菌含量后，是根据采集到的所述待测的空气的体积计算得到所述待测空气中浮游细菌的含量的。在本专利技术中，所述浮游细菌采样器的型号是FKC-1型，可从中质赛福(北京)科技仪器有限公司购买。在本专利技术中，步骤(4)所获得的所述标准曲线方程具体为Y＝0.9189X+1.4651，其中，Y为采集液中的细菌含量(CFU/mL)的对数值，X为荧光值(RLU)的对数值；线性相关系数R2为0.8762。在实际操作中，步骤(1)中的所述若干采样点与步骤(5)中采集所述待测的空气时的采样点位于同一建筑或同一厂区内。本专利技术的另一个目的是提供一种用于检测空气中浮游细菌的套装。本专利技术所提供的用于检测空气中浮游细菌的套装，含有浮游细菌采样器、ATP荧光检测仪以及记载有如上所述方法的说明书。所述套装在定量检测待测空气中浮游细菌含量中的应用也属于本专利技术的保护范围。本专利技术首次将常规的撞击式空气采集法与ATP生物发光法相结合，在数学模型建立后，可通过ATP荧光值快速确定空气中的细菌总数，极大节省了微生物培养的时间，提高了检测浮游细菌的效率，能及时对食品生产相关环境的空气浮游细菌进行检测和评估，指导食品企业对环境的清洁及消毒工作，将空气中微生物的卫生状况及时准确地反馈到食品企业及监管部门，减少食品加工过程中外源微生物污染的发生。同时，本专利技术不涉及有毒有害试剂，安全卫生，绿色环保。附图说明图1为采集液中细菌含量(CFU/mL)的对数值与荧光值(RLU)的对数值之间的标准曲线。具体实施方式下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。仪器及耗材：ATP荧光检测仪(中质赛福(北京)科技仪器有限公司，SF0012型)；ATP荧光检测仪专用一次性样品杯；浮游细菌采样器(中质赛福(北京)科技仪器有限公司产品，FKC-1型)；无菌微生物培养皿；平板计数琼脂培养基(PCA)；复合荧光试剂(中质赛福(北京)科技仪器有限公司，产品编号为ZF0011)，该复合荧光试剂的主要成分为细菌裂解剂和荧光素酶。实施例1、实验室内空气中细菌含量的测定1、标准曲线的制定(1)将盛有20ml无菌生理盐水的无菌平皿放入浮游细菌采样器中，从选定的55个采样点分别采集空气，参照《GB/T 16293-2010医药工业洁净室(区)浮游菌的测试方法》每个采样点采集500L空气(采样点的空气洁净度为10000级)；(2)采集完毕后，，按照国标GB4789.2-2010分别测定每个采样点的平皿中采集液的细菌含量(CFU/mL)；(3)吸取100μL所述采集液放入ATP荧光检测仪样品杯中，加入25μL复合荧光试剂，用移液枪反复抽吸4次，混匀后将所述样品杯置于ATP荧光检测仪中测定荧光值(RLU)；(4)对步骤(2)和(3)的数据进行线性回归分析，以步骤(2)获得的所述采集液的细菌含量的对数值为纵坐标，以步骤(3)获得的所述荧光值的对数值为横坐标，制作标准曲线，得到标准曲线方程Y＝aX+b，其中Y代表采集液中细菌含量(CFU/mL)的对数值，X代表测得荧光值(RLU)的对数值。55个选定的采样点处的空气中浮游细菌采集液的ATP荧光值与本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种检测空气中浮游细菌的方法，包括如下步骤：(1)将盛有无菌生理盐水的无菌平皿放入浮游细菌采样器中，从若干采样点采集空气；(2)采集完毕后，利用现有技术分别测定每个采样点的平皿中采集液的细菌含量；(3)吸取所述采集液放入ATP荧光检测仪样品杯中，加入复合荧光试剂，将所述样品杯置于ATP荧光检测仪中测定荧光值；(4)根据步骤(2)和步骤(3)的测定结果，获得所述采集液的细菌含量的对数值与所述荧光值的对数值之间的标准曲线方程；(5)将盛有无菌生理盐水的无菌平皿放入所述浮游细菌采样器中，采集待测的空气；吸取平皿中的待测采集液放入所述ATP荧光检测仪样品杯中，加入所述复合荧光试剂，将所述样品杯置于ATP荧光检测仪中测定荧光值，记为待测荧光值；(6)将步骤(5)获得的所述待测荧光值的对数代入步骤(4)的所述标准曲线方程，计算得到所述待测采集液中的细菌含量，进而获得所述待测的空气中浮游细菌的含量。

【技术特征摘要】
1.一种检测空气中浮游细菌的方法，包括如下步骤：
(1)将盛有无菌生理盐水的无菌平皿放入浮游细菌采样器中，从若干采样点采
集空气；
(2)采集完毕后，利用现有技术分别测定每个采样点的平皿中采集液的细菌含
量；
(3)吸取所述采集液放入ATP荧光检测仪样品杯中，加入复合荧光试剂，将所
述样品杯置于ATP荧光检测仪中测定荧光值；
(4)根据步骤(2)和步骤(3)的测定结果，获得所述采集液的细菌含量的对
数值与所述荧光值的对数值之间的标准曲线方程；
(5)将盛有无菌生理盐水的无菌平皿放入所述浮游细菌采样器中，采集待测的
空气；吸取平皿中的待测采集液放入所述ATP荧光检测仪样品杯中，加入所述复合荧
光试剂，将所述样品杯置于ATP荧光检测仪中测定荧光值，记为待测荧光值；
(6)将步骤(5)获得的所述待测荧光值的对数代入步骤(4)的所述标准曲线
方程，计算得到所述待测采集液中的细菌含量，进而获得所述待测的空气中浮游细菌
的含量。
2.根据权利要求...

【专利技术属性】
技术研发人员：侯玉柱，柯润辉，宋全厚，尹建军，田雨，
申请(专利权)人：中国食品发酵工业研究院，
类型：发明
国别省市：北京;11