本发明专利技术涉及表皮生长因子受体(EGFR)的表位及其用途。本发明专利技术提供的表位是高度保守的，并且位于与结合表皮生长因子(EGF)紧密相关的结构域中。因此，包含所述表位的疫苗组合物或包含所述表位之抗体的组合物可有效地阻断由EGF与EGRF结合所引起的信号转导，并因此可以高度有价值地用于治疗多种疾病例如癌症。与本发明专利技术的表位结合的抗体可有效地抑制多种EGFR配体与EGFR的结合，所述EGFR配体例如不仅包括EGF，还包括TGF-a、AR、BTC、EPR和HB-EGF，并因此不仅可用于治疗通过与EGF结合引起的EGFR活化导致的多种疾病，还可用于治疗通过与其他EGFR配体结合引起的EGFR活化导致的多种疾病。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及表皮生长因子受体（下文中称为EGFR）上的表位及其用途。根据 本专利技术一个示例性实施方案提供的表位是高度保守的，并且位于与结合表皮生长因子（下 文中称为EGF）紧密相关的结构域中。因此，包含所述表位的疫苗组合物、针对所述表位 的抗体或者包含所述抗体的组合物可有效阻断由EGFR与EGF结合所引起的信号转导，并因 此在治疗多种疾病例如癌症中可以是高度有价值的并且可用于治疗这些疾病。此外，与所 述表位结合的抗体可有效抑制多种EGFR配体与EGFR的结合，所述EGFR配体例如不仅包括 EGF，还包括转化生长因子-a(TGF-a)、双调蛋白（AR)、P动物纤维素（betacellulin，BTC)、 表皮调节素（epiregulin，EPR)和肝素结合的EGF样生长因子（heparin-binding EGF-like growth factor，HB-EGF)，因此可用于治疗由EGFR活化引起的多种疾病。 此外，本专利技术涉及产生所述表位的特异性抗体的方法。
技术介绍
治疗癌症的免疫治疗方法具有这样的优点，S卩，与手术、放疗或化疗相比，提高了 对患者中的目标疾病的特异性，从而增强了抗癌效果并降低了副作用。肿瘤特异性单克隆 抗体已经用作治疗剂，其通过靶向根据多种类型的癌特异性过表达的某些蛋白质来获得抗 癌效果，在肿瘤治疗过程中是非常有用的。 表皮生长因子受体（EGFR)是分子量为170kDa的I型膜蛋白，并已知在多种类型 的肿瘤中过表达。对EGFR的研究已经持续了很长一段时间，并且当前已经成功进行了细 胞结构域（Garrett TP等，Cell，2002，110:763-773)和细胞内激酶结构域（Stamos J等， J. Biol. Chem.，2002, 277 :46265-46272)的晶体学（crystallographic)研究。这些研究显 示了受体及其配体行为的重要信息。EGFR是细胞表面相关分子，其通过在此结合EGF配体 和转化生长因子-a(TGF-a)来被活化。与配体结合后，受体二聚化以使细胞内的酪氨酸激 酶结构域磷酸化。结果，后续的信号级联反应被激活从而诱导正常细胞的生长和增殖以及 肿瘤细胞的生长。特别地，因为肿瘤细胞的功能主要依赖于EGFR，所以所述受体由于抑制 EGFR调控功能的可能性程度而被视为治疗的常用标靶。 例如在某些类型的癌症中观察到EGFR的过表达，例如肺癌、乳腺癌、结肠癌、胃 癌、脑癌、膀胱癌、头颈癌、卵巢癌和前列腺癌。当使用针对EGFR的抗体抑制EGFR与EGF的 结合时，癌细胞的生长可以受到抑制从而治疗癌症，这已经通过使用针对EGFR的单克隆抗 体在实验上证明。 同时，虽然已经进行了尝试来阐述EGFR结合EGF的各个结构域的位置 (S. Yokoyama等，Cell，2002,110 :775-787)，但是必须进一步研究，在使用这样的EGFR结构 域作为表位的情况下，抗体是否抑制由EGF引起的EGFR信号转导通路的激活。 近年来，在临床领域用于治疗转移性结直肠癌的西妥昔单抗（Cetuximab) (C225 抗体，产品名：Erbitux ;ImClone，US)是通过使小鼠抗体的可变区与人抗体IgGl恒定区结 合而得到的嵌合抗体（具有约30%的小鼠氨基酸序列），并因此在体外抑制由EGF引起的 肿瘤细胞生长以及EGFR磷酸化，并且在裸鼠中抑制人肿瘤形成。此外，发现所述抗体与某 些化疗药剂对根除异种移植小鼠模型中的人肿瘤有协同作用。然而，西妥昔单抗存在这样 的问题，即，其在患者（约10% )中导致免疫应答，并且仅能用作与化疗药剂的联合治疗，因 为其在用于独立治疗时不具有令人满意的治疗效果。 帕木单抗（panitumumab)(产品名：Vectibix ;Amgen Inc. US)是另一种用于治疗 性转移结直肠癌的抗体，其是体外抑制由EGF引起的肿瘤细胞生长和EGFR磷酸化并且抑制 裸鼠中人肿瘤之形成的完全人抗体。此外，发现所述抗体与某些化疗药剂对根除异种移植 小鼠模型中的人肿瘤有协同作用。帕木单抗与西妥昔单抗不同在于其是完全人抗体，具有 10倍于西妥昔单抗的抗原结合能力，降低了如西妥昔单抗作为IgG2型抗体诱导免疫应答 的概率，并且由于IgG2的限制而仅表现出对由EGFR与EGF结合引起的信号转导的抑制效 果，尽管增强了结合能力以降低副作用和提高效力。因此，据报道，帕木单抗具有与西妥昔 单抗相似的总体临床效果，因为其没有相关领域已知的西妥昔单抗的信号转导抑制效果与 抗体依赖性细胞毒作用（ADCC，Antibody_Dependent Cell Cytotoxicity)活性之中的ADCC 活性。 此外，由Merck Serono和Takeda Pharmaceuticals联合开发的马妥珠单抗 (matuzumab, mAb425)迄今为止在独立治疗中不具有令人满意的疗效。 总之，所有常规的靶向EGFR的抗体治疗剂都未被准许作为处方用于治疗K-ras突 变体结直肠癌。2009年报道的数据证实，其中两个抗体显示出治疗效果的患者的百分比总 计约21%，并且所述抗体在其余79%的患者中未示出治疗效果。抗体未示出治疗效果的患 者组的43% (即，约患者总数的约30% )具有K-ras突变体，这将该组归为K-ras突变体 结直肠癌。常规的抗体治疗剂西妥昔单抗和帕尼单抗仅在约1. 5%的K-ras突变体中示出 治疗效果。 因此，对具有能够通过更有效地抑制EGFR与EGF结合来克服常规EGFR抗体之问 题和限制的区别和优越性的新抗EGFR抗体的需求正在持续增加。
技术实现思路
因此，本专利技术的一个目的是提供氨基酸序列RGDSFTH(SEQ ID N0:2)，或包含该序 列的EGFR上的表位，以及特别是具有氨基酸序列RGDSFTHTP(SEQ ID N0:3)的表位。 本专利技术的另一个目的是提供产生所述表位、包含所述表位的用于一种或更多种癌 症疫苗之组合物的方法、使用所述表位产生具有与所述表位特异性结合之能力的抗体的方 法，以及包含通过该方法产生之抗体的用于预防和/或治疗癌症的组合物或治疗剂。 本专利技术的另一个目的是提供所述表位或编码所述表位的多核苷酸序列，以及用于 诊断癌症的包含所述多核苷酸序列的组合物和试剂盒。 【附图说明】 图1是以3D方式示出EGFR与GC1118抗体之结合特征的图。 图2是以3D方式示出EGFR与EGF之结合特征的图。 图3是以3D方式示出当GC1118抗体与EGFR重叠时，GC1118抗体与和EGF结合 的EGFR的结合特征的图。 图4是以3D方式示出EGFR与西妥昔单抗和马妥珠单抗的结合特征的图。 图5是示出合成EGFR变体基因之流程以及转化酵母细胞之流程的图。 图6是示出通过由DNA碱基序列确定的氨基酸序列来鉴定各个EGFR突变体被正 确合成的图。 图7是示出各个EGFR变体的表达比率的图 图8是示出抗体针对各个EGFR突变体的结合能力的图：(A)GC1118,以及（B)西妥 昔单抗（对照）。 图9是示出EGFR配体与GC本文档来自技高网...
【技术保护点】
表皮生长因子受体(EGFR)的表位，其具有氨基酸序列RGDSFTH(SEQ ID NO：2)。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2012.03.27 US 61/616,0731. 表皮生长因子受体（EGFR)的表位，其具有氨基酸序列RGDSFTH(SEQ ID N0:2)。2. 根据权利要求1所述的表位，其具有氨基酸序列RGDSFTHTP(SEQ ID N0:3)。3. 复合物，其中权利要求1或2所述的表位与载体结合。4. 根据权利要求3所述的复合物，其中所述载体是选自以下的至少一种：肽、血清白蛋 白、免疫球蛋白、血蓝蛋白和多糖。5. 多核苷酸，其编码权利要求1或2所述的表位。6. 重组载体，其包含权利要求5所述的多核苷酸。7. 根据权利要求6所述的重组载体，其包含诱导所述表位在微生物细胞或病毒表面上 表达的启动子或编码信号蛋白的核苷酸序列。8. 重组微生物或病毒，其被权利要求6或7所述的重组载体转化。9. 根据权利要求8所述的重组微生物或病毒，其选自重组大肠杆菌、重组酵母和重组 噬菌体。10. 制备具有SEQ ID NO :2的氨基酸序列、包含SEQ ID NO :2之氨基酸序列的氨基酸 序列或SEQ ID NO :3的氨基酸序列的表位的方法，其包括培养权利要求6至9中任一项所 述的重组载体、重组微生物或病毒。11. 用于治疗癌症的疫苗组合物，其包含权利要求1至5中任一项所述的表位、包含所 述表位的复合物或编码所述表位的多核苷酸。12. 根据权利要求11所述的疫苗组合物，其还包含在注射进身体后提高抗体形成的可 药用佐剂。13. 根据权利要求12所述的疫苗组合物，其中所述佐剂是选自以下的至少一种：铝盐 (A1 (0H) 3、ALP04)、角鲨烯、山梨聚糖、聚山梨酯80、CpG、脂质体、胆固醇、MPL (单磷酰脂质A) 和GLA (批喃葡萄糖基脂质A)。14. 根据权利要求11所述的疫苗组合物，其中所述多核苷酸包含于可药用载体中。15. 根据权利要求14所述的疫苗组合物，其中所述可药用载体是病毒或非病毒载体。16. 产生与具有SEQ ID NO :2或SEQ ID NO :3之氨基酸序列的表位特异性结合的抗体 或其片段的方法，所述方法使用具有SEQ ID NO :2的氨基酸序列、包含SEQ ID NO :2之氨基 酸序列的氨基酸序列或SEQ ID NO : 3的氨基酸序列的表位；包含所述表...
【专利技术属性】
技术研发人员：金世镐，洪广元，张基奂，金敏洙，李美祯，元钟和，许旻奎，曹炫寿，俞知镐，
申请(专利权)人：株式会社绿十字，财团法人牧岩生命工学研究所，
类型：发明
国别省市：韩国;KR
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