本发明专利技术涉及用于通过光度测定法测定可以显示干扰的样品的特定分析物的量的方法，其中所述特定分析物从所述分析物与分析物特异性测定试剂相互作用后反应混合物的光信号变化来定量。对于待测定的样品的特定分析物，对于多个波长生成多条校准曲线，将测量结果储存在仪器平台的数据管理系统中。同时进行干扰测试以测定特定分析物，用于定量待测定样品中存在的干扰物质的量。将各干扰物质的量与预定截止值进行比较。在完整反应时间在多个波长测量反应混合物中待测定的样品的特定分析物的光信号，且根据干扰物质选择校准曲线。最终，通过与所选波长的所选校准曲线比较来定量待测定的样品的特定分析物的量。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于在自动分析仪上光度测定流体样品中的分析物的多应 用方法 专利
本专利技术涉及用于通过光度测定法测定可以显示干扰的样品的特定分析物的量的 方法，其中所述特定分析物从所述分析物与分析物特异性测定试剂相互作用后反应混合物 的光信号变化来定量。对于待测定样品的特定分析物，对于多个波长生成多条校准曲线，将 测量结果储存在仪器平台的数据管理系统中。同时进行干扰测试以测定特定分析物，用于 定量待测定样品中存在的干扰物质的量。将各干扰物质的量与预定截止值进行比较。在完 整反应时间在多个波长测量反应混合物中待测定样品的特定分析物的光信号，且根据干扰 物质选择校准曲线。最终，通过与所选波长的所选校准曲线比较来定量待测定样品的特定 分析物的量。 用于光度测定流体中的分析物的诊断测定法，包括池度（turbidimetric)、比池 (nephelometric)和比色（colorimetric)测定法，是常见且众所周知的。由于其容易的一 步程序和其短周转时间，此类测定法是用于在自动分析仪中应用的理想候选。如今，高度自 动化的分光光度分析仪用于临床诊断中以便以时间和成本有效的方式进行光度测定法。分 析仪上的工作流程的特征在于简单的程序，而没有任何分离或洗涤步骤，通常涉及以下方 案：a)将含有未知量分析物的样品（血清或血浆）和分析物特异性测定试剂分配至反应杯 中，b)在杯中，使样品和试剂在规定温度孵育特定时间段，c)光度计测量与所述样品中分 析物的量相关的所述杯中测定溶液的光信号。 对于临床化学分析仪例如Roche Diagnostics cobas? c提供基于池度、比池或比 色测定法的广泛测试菜单。在cobas? c仪器上检测这些测定法基于具有卤钨灯作为照射 源、用于生成单色光的光栅和光电二极管阵列（产生340和800 nm之间的12个波长的12 个二极管）作为检测器的光度计。 经常将关键样品提交用于在临床实验室进行常规生化测试，其显示对应用的测定 法的干扰，因此导致改变和错误的结果。当用使用光学方法如比色和浊度方法的实验室测 试进行工作时，样品基质中显色或散射光的物质通常引起干扰。此类干扰物质的实例是血 红蛋白（溶血）、胆红素（黄疸）和脂质（脂血），其在通常用于分光光度测试的波长吸收 或散射光。 溶血是一个重要的干扰因素，这通常归因于不同因素对红细胞的体外破坏，诸如 分离血清或血浆前血液的长期储存、通过迅速迫使血液经过小针头的剪切力、混合时的过 度搅拌或血清的离心和分离的物理作用。体内溶血发生频率较低，但它对实验室测试具有 相同的效果。溶血干扰检测程序的机制是由释放的血红蛋白的颜色干扰，尽管还有从受损 的红细胞泄漏分析物和红细胞组分与分析物之间的化学相互作用也是可能的原因。作为结 果，由于血红蛋白干扰，在临床试验中可以获得错误地更高或错误地更低的分析物浓度。其 他血细胞如白细胞和血小板的组分也可以污染样品。例如，细胞衰变可以导致白血病患者 的血液变化；血小板在凝血过程中的衰变导致血清中较高浓度的细胞内血小板成分。 溶血可以进一步由生物化学、免疫学、物理和化学机制引起。输血过程中，补体依 赖性溶血可以由与主要血型抗原反应的抗体引起。物理溶血由低渗对红细胞的破坏，例如 用低渗溶液稀释血液，以及降低（真空）或增加的压力引起。机械溶血可以发生在血液在体 内流过医疗设备例如导管、心脏瓣膜过程中和由在体外离心不足以及升高的温度而发生。 污染物质也可以引起体外溶血。最后，洗涤剂和其他污染物质可以引起溶血。分离血细胞 后，溶血通过血清或血浆的红色来检测。在超过300 mg/L (18.8 mmol/L)的细胞外血红蛋 白浓度，溶血可通过血清或血浆的红色检测。具有治疗性血红蛋白衍生物的样品总是强烈 显红色的。一些分析系统通过比较样品在两种波长的吸收测量溶血的程度。用作血液替代 品的血红蛋白衍生氧载体的吸收光谱与天然血红蛋白没有显著不同。 胆红素是由血红蛋白的酶促降解产生的黄色的色素。关于胆红素干扰的研究大多 数基于其中将游离胆红素或水溶性二牛磺酸胆红素（di-taurobilirubin)添加至血清的 实验。在特定条件下，胆红素分子在其干扰影响中在定性和定量上不同。当以增加的浓度 存在于血液中时，缀合胆红素出现在尿中。在具有蛋白尿的患者中，结合至白蛋白的胆红素 也可以出现在尿中。脑内出血后，未缀合（游离）胆红素引起脑脊液的黄变。在血脑屏障 的通透性增加时，结合至白蛋白的胆红素可以出现在CSF中。胆红素在340 nm至500 nm 之间的波长具有高吸光度。因此，使用这些波长的分光光度测试因为由胆红素引起的持续 高的背景吸光度而显示出限制。胆红素干扰导致的结果的明显增加或减少是测定和分析物 浓度依赖的。 脂血样品是由于增加的脂质含量而具有混浊或乳状外观的血液、血清或血浆的样 品。无法避免脂血样品，因为脂质浓度增加经常继发于其他疾病状态诸如：糖尿病、乙醇使 用、慢性肾衰竭和胰腺炎。脂血的存在可以通过不同的机制干扰许多临床化学测试，最常见 的机制是脂质（主要是乳糜微粒和极低密度脂蛋白VLDL)对光的散射。作为结果，根据应 用的波长和脂质含量，可以改变测定的分析物浓度。 总之，样品中血红蛋白、胆红素和脂质以及其他干扰物质的存在可以引起目的在 于定量特定分析物的光度测定法的测量结果的正或负的干扰。根据干扰的幅度，结果可以 导致错误的解释和不适当的干预。 为了克服溶血、黄疸和脂血引起的干扰的缺点，几种方法是文献中已知的。脂血、 黄疸和溶血干扰可以通过预分析过程中预处理样品以去除干扰物质而降低，例如在脂血样 品的情况下通过高速离心。然而，此类措施增加了工作量，且降低了成本和时间效率；此类 措施也易于在样品操作中产生误差。 另一种策略是使用其他对干扰不敏感的临床测试。这可能是挑战性的，因为替代 测试可能需要实验室中没有的另一个仪器平台；也可能市场上没有任何替代测试。 通过使用设置空白程序校正脂血、溶血和黄疸引起的干扰是克服限制的替代方 案。这涉及添加测定试剂之前，一旦合适地稀释，测量样品吸光度。从最终吸光度减去测量 的吸光度。一种实现这种设置空白程序的策略是利用2种不同的试剂（空白和测定试剂） 和2个杯。这种方法改进了结果，但它具有一个缺点，使测试通量减少一半。另一种方法涉 及将试剂依次添加至杯中：在设定时间后获取第一读数；此后添加测定试剂并孵育；最后 获取第二读数。然而，用该程序通常仅实现很小改进。此外，建立的测定方案可能不与第一 读数所需的样品的新初始稀释步骤相容。 双色分析也允许校正分析结果，且经常应用于自动化实验室测试中。第二U则） 波长用于测量干扰物质。待测定的分析物在该第二波长不吸收。然后从分析物的测量值减 去该测量值。这假设干扰物质的吸光度在两种波长是相同的，这种情况是很少的。因此，双 色原则在降低干扰中只产生轻微的改进。此外，可能通过化学消除干扰物质来处理干扰，例 如用胆红素氧化酶消除胆红素，或用抗坏血酸氧化酶消除维生素C。 此外，多通道分析仪是全自动化的计算机控制系统，其经设计用于分析常规化学 测定法、免疫测定法和治疗药物，例如，Roche Cobas 6000使用分光光度法来进行动力学、 终点和非线性反应。到一定程度，本文档来自技高网...
【技术保护点】
用于通过光度测定法测定可以显示干扰的样品的特定分析物的量的方法，其中所述特定分析物从所述分析物与分析物特异性测定试剂相互作用后反应混合物的光信号中的变化来定量，所述方法包括以下步骤：a) 对于待测定样品的特定分析物，对于多个波长生成多条校准曲线，且将测量结果储存在仪器平台的数据管理系统中，b) 同时进行干扰测试以测定特定分析物，用于定量待测定样品中存在的干扰物质的量，且将每种干扰物质的量与预定截止值进行比较，c) 在多个波长测量所述反应混合物中待测定样品的特定分析物的光信号，d) 根据所述干扰物质选择步骤a的相应校准曲线，和e) 通过与所选波长的所选校准曲线的比较来定量待测定样品的特定分析物的量。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2012.04.26 EP 12002952.5;2012.12.07 EP 12196036.3;1. 用于通过光度测定法测定可以显示干扰的样品的特定分析物的量的方法，其中所述 特定分析物从所述分析物与分析物特异性测定试剂相互作用后反应混合物的光信号中的 变化来定量，所述方法包括以下步骤： a) 对于待测定样品的特定分析物，对于多个波长生成多条校准曲线，且将测量结果储 存在仪器平台的数据管理系统中， b) 同时进行干扰测试以测定特定分析物，用于定量待测定样品中存在的干扰物质的 量，且将每种干扰物质的量与预定截止值进行比较， c) 在多个波长测量所述反应混合物中待测定样品的特定分析物的光信号， d) 根据所述干扰物质选择步骤a的相应校准曲线，和 e) 通过与所选波长的所选校准曲线的比较来定量待测定样品的特定分析物的量。2. 根据前述权利要求的方法，其中将包含反应时间、校准点、校准模式和测定类型的特 定测量条件额外应用于测量方案。3. 根据前述权利要求的方法，其中显示干扰的样品可以在相应的仪器平台上使用可 商购的分光光度实验室测试来定量，而无需应用预分析样品处理和/或改变测定制剂和程 序。4. 根据前述权利要求之一的方法，其中在波长1记录的校准曲线1用于未显示干扰的 样品。5. 根据前述权利要求之一的方法，其中使用在波长2记录的校准曲线2,其经优化用于 显示溶血干扰的样品。6. 根据前述权利要求之一的方法，其中使用在波长3记录的校准曲线3,其经优化用于 显示黄疸...
【专利技术属性】
技术研发人员：G库尔茨，E洛佩斯卡勒，
申请(专利权)人：霍夫曼拉罗奇有限公司，
类型：发明
国别省市：瑞士;CH
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