一种α1-抗胰蛋白酶免疫比浊法检测试剂盒制造技术

本发明专利技术公开了一种α1-抗胰蛋白酶免疫比浊法检测试剂盒，属于临床体外检测试剂技术领域。本发明专利技术试剂盒包括试剂R1、试剂R2、校准品。通过在试剂R1中加入一定量的二氧化硅包覆的磁性纳米颗粒，在试剂R2中加入一定量的牛血清白蛋白和Proclin-300，有效的提高了试剂盒的分析灵敏度和稳定性，其线性范围也较好，试剂的准确度高，有利于在市场中进一步的推广使用。

【技术实现步骤摘要】
-种a 1-抗胰蛋白酶免疫比浊法检测试剂盒
本专利技术涉及临床体外检测试剂
，特别涉及一种a 1-抗胰蛋白酶免疫比 浊法检测试剂盒。
技术介绍
a 1-抗胰蛋白酶(简称a I-AT或AAT)是一种糖蛋白。含糖10%?20%，主要由肝脏 合成。它是血清中最主要的蛋白酶抑制剂，对凝血酶、尿激酶等其他酶也有抑制作用；也是 一种急性时相反应蛋白，在炎症性疾患时，a 1-抗胰蛋白酶可透过毛细血管进入组织液，在 炎症局部往往浓度很高，对急性炎性疾病有一定限制作用。a 1-抗胰蛋白酶为呼吸系统的 非特异性可溶因子，与呼吸道抵抗力关系密切，它可抑制多种酶的活性，包括细菌的酶，以 及中性白细胞溶酶体分泌的蛋白酶、弹性蛋白酶、胶原酶、纤维蛋白溶酶和凝血酶。a 1-抗 胰蛋白酶的缺乏与慢性阻塞性肺病的形成关系密切，因为它的缺乏，不能及时控制感染和 炎症产生的多种蛋白酶，而造成肺组织破坏。 与a 1-抗胰蛋白酶缺乏直接相关的疾病主要是肺气肿和肝脏硬化。目前a 1-抗 胰蛋白酶主要用于因遗传性a 1-抗胰蛋白酶缺乏引起的肺气肿患者的终身替补治疗和肺 部炎症性疾病的防止，如慢性阻塞性肺气肿、肺囊性纤维化、急性肺损伤等。 a 1-抗胰蛋白酶的检测方法有血清胰蛋白酶抑制容量试验、单项免疫扩散法、免 疫比浊法。血清胰蛋白酶抑制容量试验操作过程复杂，易受血清中非抗胰蛋白酶的干扰，结 果不够稳定，不宜用于开发临床检测试剂盒。而单向免疫扩散法操作简单，灵敏度尚可，但 实验分析需要1-2天，并且沉淀环的直径很难精确测量，因此结果的特异性和精密度不高。 a 1-抗胰蛋白酶免疫比浊法检测试剂盒是一种无需预处理样本，技术和设备要求 不高，而精密度和特异性更高的分析方法。由于该方法不需要昂贵的设备，可以实现自动 化，且可测定大量标本，因此受到临床广泛推广。但是普通的a 1-抗胰蛋白酶检测试剂分 析灵敏度不高，准确性和稳定性也不好，不利于临床分析检测的推广应用。
技术实现思路
针对于常规的a 1-抗胰蛋白酶检测试剂盒存在的问题，本专利技术提供了一种 a 1-抗胰蛋白酶免疫比浊法检测试剂盒，稳定性和线性范围比常规的检测试剂盒要好，分 析灵敏度高，有利于试剂在临床上的推广应用。 本专利技术是通过以下技术方案实现的： 一种a 1-抗胰蛋白酶免疫比浊法检测试剂盒，其特征在于，它包含试剂RU试剂R2和 校准品，其中试剂Rl组成为：50mmol/L pH 7. 2的磷酸盐缓冲液、0. lmmol/L的氯化钠、40g/ L聚乙二醇400、0. 1%-2%二氧化硅包覆的磁性纳米颗粒；试剂R2组成为：6ml/L羊抗人 a 1-胰蛋白酶抗体、0. lmmol/L的氯化钠、20-40g/L牛血清白蛋白BSA。 所述二氧化娃包覆的磁性纳米颗粒为Fe304/Si0 2复合纳米粒子，粒径为20_50nm。 所述试剂Rl和试剂R2在使用时的比例为Rl :R2=200 :80。 本专利技术所使用的二氧化硅包覆的磁性纳米颗粒是采用以下方法制备的： 采用多元醇法制备Fe3O4纳米粒子。取一定的乙酰丙酮铁和三甘醇加入到回流加热反 应装置中，在磁力搅拌和Ar气保护的条件下，将装置缓慢加热至沸腾，并保持回流一段时 间。冷却后向反应溶液中加入乙酸乙酯使生成的四氧化三铁纳米粒子产生絮凝，磁性分离 黑色产物，清洗数次，分散到乙醇中，即得到稳定的Fe 3O4纳米粒子乙醇胶体溶液。之后将所 得Fe3O4纳米粒子采用Stober水解法制得SiO 2包覆的Fe3O4纳米粒子。所得Fe304/Si0 2复 合纳米粒子的粒径为20_50nm。 本专利技术所使用的校准品为宁波普瑞柏生物技术有限公司生产的a I-AT校准品。 本专利技术的试剂盒在具有双试剂功能的自动生化分析仪上进行，其具体使用方法如 下： 加入生理盐水、样本或校准品8 yl，之后再加入Rl试剂200 ill预孵育5min后读取吸 光度A1，之后再加入80iil的试剂R2反应5min后，读取吸光度A2,并计算AA。 本专利技术的有益效果： 本专利技术提供的分析灵敏度高的a 1-抗胰蛋白酶免疫比浊法检测试剂盒，通过在试剂 Rl中加入二氧化硅包覆的磁性纳米颗粒，使该磁性纳米颗粒在静电吸附的作用下与羊抗人 a 1-胰蛋白酶抗体结合，从而使抗体在磁性纳米颗粒上形成凝集，大大的提高了试剂的分 析灵敏度。同时在试剂R2中加入牛血清白蛋白，解决了抗体在稀溶液中不稳定这一难题， 在试验中它能使抗体稳定，且相对地中性，但不会影响抗体的性质，而Proclin-300是高效 的防腐剂，对各种细菌、霉菌、酵母及藻类有很强的抑制作用，从而解决了 BSA长时间保存 易发霉的缺点，因此BSA与ProcI in-300的共同作用有效地增强了试剂盒的稳定性，有利于 该试剂在市场中进一步的推广。 【附图说明】 图1实施例2准确度验证实验检测结果与对照组检测结果相关性； 图2实施例3准确度验证实验检测结果与对照组检测结果相关性； 图3实施例4准确度验证实验检测结果与对照组检测结果相关性。 【具体实施方式】 为了更好的理解本专利技术，下面结合具体实施例来进一步详细的说明。 实施例1 一种市面上常规的a 1-抗胰蛋白酶免疫比浊法检测试剂盒，它包括试剂R1、试剂R2、 校准品。 其中，试剂Rl组成为： pH 7. 2磷酸盐缓冲液 50 mmol/L 氯化钠 0. I mmol/L 聚乙二醇400 40g/L 试剂R2组成为： 羊抗人a 1-胰蛋白酶抗体 6ml/L 氯化钠 0. I mmol/L 本实施例描述的a 1-抗胰蛋白酶检测试剂盒，在使用时，其测定方法是采用具有双试 剂功能的东芝120自动分析仪，操作如下： 加入生理盐水、样本或校准品8 yl，之后再加入Rl试剂200 ill预孵育5min后读取吸 光度A1，之后再加入80iil的试剂R2反应5min后，读取吸光度A2,并计算AA。 本实施例所使用的校准品为宁波普瑞柏生物技术有限公司生产的a I-AT校准 品。 实施例2 一种a 1-抗胰蛋白酶免疫比浊法检测试剂盒，它包括试剂R1、试剂R2、校准品。 其中，试剂Rl组成为： pH 7. 2磷酸盐缓冲液 50 mmol/L 氯化钠 0. I mmol/L 聚乙二醇400 40g/L 二氧化硅包覆的磁性纳米颗粒 0. 1% 试剂R2组成为： 羊抗人a 1-胰蛋白酶抗体 6ml/L 氯化钠 0. I mmol/L 牛血清白蛋白（BSA) 20g/L Prod in-300 lml/L 具体测定方法同实施例1。 实施例3 一种a 1-抗胰蛋白酶免疫比浊法检测试剂盒，它包括试剂R1、试剂R2、校准品。 其中，试剂Rl组成为： pH 7. 2磷酸盐缓冲液 50 mmol/L 氯化钠 0. I mmol/L 聚乙二醇400 40g/L 二氧化硅包覆的磁性纳米颗粒 1% 试剂R2组成为： 羊抗人a 1-胰蛋白酶抗体 6ml/L 氯化钠 0. I mmol/L 牛血清白蛋白（BSA) 30g/L Prod in-300 lml/L 具体测定方法同实施例1。 实施例4 一种a 1-抗胰蛋白酶免疫比浊本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种α1‑抗胰蛋白酶免疫比浊法检测试剂盒，其特征在于，它包含试剂R1、试剂R2和校准品，其中试剂R1组成为：50mmol/L pH 7.2的磷酸盐缓冲液、0.1mmol/L的氯化钠、40g/L聚乙二醇400、 0.1%‑2% 二氧化硅包覆的磁性纳米颗粒；试剂R2组成为：6ml/L羊抗人α1‑胰蛋白酶抗体、0.1mmol/L的氯化钠、20‑40g/L 牛血清白蛋白BSA。

【技术特征摘要】
1. 一种a 1-抗胰蛋白酶免疫比浊法检测试剂盒，其特征在于，它包含试剂R1、试剂R2 和校准品，其中试剂R1组成为：50mmol/L pH 7. 2的磷酸盐缓冲液、0. lmmol/L的氯化钠、 40g/L聚乙二醇400、0. 1%-2%二氧化硅包覆的磁性纳米颗粒；试剂R2组成为：6ml/L羊抗 人a 1-胰蛋白酶抗体...

【专利技术属性】
技术研发人员：甘宜梧，董雯，谭柏清，李静，包兴艳，朱玉娥，肖慧，
申请(专利权)人：山东博科生物产业有限公司，
类型：发明
国别省市：山东;37