高纯度替考拉宁精粉的纯化方法技术

本发明专利技术提供了一种高纯度替考拉宁精粉的纯化方法，将替考拉宁发酵液碱性条件下离心除去发酵液中固体，滤液调至中性经大孔吸附树脂吸附洗脱后，得到65％以上的替考拉宁洗脱液，再经凝胶层析过滤，得到80％的替考拉宁洗脱液；最后将洗脱液浓缩，加入丙酮使其沉淀，离心得乳白色替考拉宁粗品；将粗品用适量水溶解，加样至装有反相硅胶的层析柱，使用乙腈与水的混合液进行梯度洗脱，得到高纯度的替考拉宁洗脱液，加入活性炭脱色，过滤，冷却沉淀除去剩余杂质，清液加丙酮使其完全沉淀，沉淀所得的湿品经红外干燥得到替考拉宁纯品。本发明专利技术工艺简单，质量可靠，替考拉宁精粉纯度高，单组分的含量可控，适于工业化规模生产高纯度的替考拉宁。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术具体涉及一种。
技术介绍
替考拉宁（teicoplanin)系替考游动放线菌（Actinoplanes teichomyceticus) 发酵产生的一种多组份糖肽类抗生素，主要含5个化学结构相似的化合物 (A2-1，A2-2, A2-3, A2-4和A2-5)，如图1所示，5个组份的差异仅在于酰基侧链的不同，其中 A2-2为主要组份，占各组份相对含量的35% -55%，此外含少量的侧链降解产物A3-1。 替考拉宁的结构式：

【技术保护点】
一种高纯度替考拉宁精粉的纯化方法，其特征在于：包括以下步骤：(1)将替考拉宁发酵液离心除去发酵液中的固体，得到含替考拉宁的滤液；(2)将所述滤液进行大孔吸附树脂柱层析，先采用纯水以10L/h的流速洗脱，再用体积比10:90，15:85，20:80，25:75，70:30的丙酮‑水溶剂系统以12L/h的流速进行梯度洗脱，收集以70％丙酮水溶液为洗脱剂的洗脱液，并浓缩，得到浓缩物；(3)将所述浓缩物经过凝胶层析柱过滤，先用体积比10:90或15:85的甲醇‑水洗脱；再用体积比35:65或40:60的甲醇‑0.5％NaHCO3水溶液进行洗脱；收集以35:65或40:60的甲醇‑0.5％NaHCO3水溶液为洗脱剂的洗脱液，浓缩以获得浓缩液；(4)往浓缩液中加入丙酮沉淀30min，得替考拉宁粗品；用水溶解替考拉宁粗品，并加样至反相硅胶层析柱进行层析，先用15％乙腈水溶液洗脱2h，再用30％乙腈水溶液洗脱1.5h，最后用46％乙腈水溶液洗脱，分段收集，通过HPLC检测各段洗脱液中替考拉宁各组分的纯度，将满足纯度要求的洗脱液合并；(5)往洗脱液中加入1.5～2.5％(w/v)的活性炭脱色20min，过滤，冷却沉淀除去杂质，加入6倍于上清液体积的丙酮于上清液中沉淀，低温结晶得晶体，晶体经红外干燥，得到替考拉宁纯品。...

【技术特征摘要】
1. 一种高纯度替考拉宁精粉的纯化方法，其特征在于：包括以下步骤： (1) 将替考拉宁发酵液离心除去发酵液中的固体，得到含替考拉宁的滤液； (2) 将所述滤液进行大孔吸附树脂柱层析，先采用纯水以10L/h的流速洗脱，再用体积 比10:90,15:85, 20:80, 25:75, 70:30的丙酮-水溶剂系统以12L/h的流速进行梯度洗脱， 收集以70%丙酮水溶液为洗脱剂的洗脱液，并浓缩，得到浓缩物； (3) 将所述浓缩物经过凝胶层析柱过滤，先用体积比10:90或15:85的甲醇-水洗脱； 再用体积比35:65或40:60的甲醇-0. 5 % NaHCO3水溶液进行洗脱；收集以35:65或40:60 的甲醇-0. 5% NaHCO3水溶液为洗脱剂的洗脱液，浓缩以获得浓缩液； (4) 往浓缩液中加入丙酮沉淀30min，得替考拉宁粗品；用水溶解替考拉宁粗品，并加 样至反相硅胶层析柱进行层析，先用15 %乙腈水溶液洗脱2h，再用30 %乙腈水溶液洗脱 I. 5h，最后用46 %乙腈水溶液洗脱，分段收集，通过HPLC检测各段洗脱液中替考拉宁各组 分的纯度，将满足纯度要求的洗脱液合并； (5) 往洗脱液中加入1. 5?2. 5 % (w/v)的活性炭脱色20min，过滤，冷却沉淀除去杂 质，加入6倍于上清液体积的丙酮于上清液中沉淀，低温结晶得晶体，晶体经红外干燥，得 到替考拉宁纯品。2. 如权利要求1所述的高纯度替考拉宁精粉的纯化方法，其特征在于：所述（1)的具 体操作方法如下： 将替考拉宁发酵液调PH至11. 0,室温保持15min，再回调至PH7. 5,然后4500rpm离心 IOmin,...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈丽，连云阳，罗婷，江宁宇，彭飞，王传喜，
申请(专利权)人：福建省微生物研究所，
类型：发明
国别省市：福建;35