一种竹节参提取物及其应用制造技术

本发明专利技术提供了一种竹节参提取物，所述的竹节参提取物为竹节参皂苷IVa、竹节参皂苷V、竹节参皂苷IV和竹节参皂苷Pjs-2的混合物,以及药学可接受的辅料或载体。其中竹节参皂苷IVa、竹节参皂苷V、竹节参皂苷IV和竹节参皂苷Pjs-2的浓度比为20-28：85-95：30-40：30-45。将该竹节参提取物在制备治疗肠粘膜损伤的药物上的应用，其中，肠粘膜损伤为非甾体抗炎药所引起的肠粘膜损伤。结果表明，竹节参皂苷IVa和/或竹节参总皂苷对非甾体抗炎药引起的肠粘膜损伤具有治疗作用。

【技术实现步骤摘要】
一种竹节参提取物及其应用
本专利技术提供一种竹节参提取物及其应用，具体为竹节参总皂苷，包括竹节参皂苷IVa、竹节参皂苷V、竹节参皂苷IV和竹节参皂苷Pjs-2的混合物。
技术介绍
非甾体抗炎药(NSAIDs)是一类临床上广泛使用的抗炎药物，如心脑血管疾病预防及风湿性疾病、疼痛、运动损伤的治疗。近年来临床上推出的缓释剂和肠溶剂如双氯芬酸钠肠溶片，减少胃部损伤的毒副作用，但却把损伤转移到了远端的小肠；而随着胶囊内镜的发展，NSAID导致的肠道损伤的诊出率明显上升，被长期忽略的NSAID肠道损伤也越来越受到人们的关注，然而对这一威胁人类健康的并发症，目前在其防治上并没有统一合理的方法。因此，积极寻求防治NSAID所导致的并发症已十分迫切。
技术实现思路
本专利技术提供一种竹节参提取物，具体为一种竹节参总皂苷，所述的竹节参总皂苷包括竹节参皂苷IVa、竹节参皂苷V、竹节参皂苷IV和竹节参皂苷Pjs-2的混合物，其中竹节参皂苷IVa的浓度为90.6mg.g-1、竹节参皂苷V的浓度为24.9mg.g-1、竹节参皂苷IV的浓度为38.7mg.g-1和竹节参皂苷Pjs-2的浓度为39.6mg.g-1。一种竹节参提取物的药物组合物，其特征在于，其中包含所述的竹节参总皂苷(所述的竹节参总皂苷包括竹节参皂苷IVa、竹节参皂苷V、竹节参皂苷IV和竹节参皂苷Pjs-2的混合物)，以及药学可接受的辅料或载体。上述竹节参提取物在制备治疗肠粘膜损伤的药物上的应用。所述的肠粘膜损伤为非甾体抗炎药所引起的肠粘膜损伤。经与对照组相比，模型组小肠粘膜通透性显著升高，小肠粘膜损伤评分增高，光镜可见小肠粘膜绒毛发生变性、坏死、脱落，大量炎细胞浸润。而竹节参皂苷IVa和/或竹节参总皂苷给药组小肠粘膜损伤及通透性改变明显变小，竹节参皂苷IVa和/或竹节参总皂苷对非甾体抗炎药引起的肠粘膜损伤具有治疗作用。附图说明图1伊文思蓝染色检测竹节参总皂苷对NASIDs模型小肠黏膜损伤的保护作用。图2HE染色观察竹节参总皂苷对小肠黏膜组织的保护活性，其中，a正常组；b模型组；c竹节参总皂苷100mg组；d竹节参总皂苷300mg组；(HE10×10)。图3竹节参总皂苷对GRP78表达的影响。A正常组，B模型组，C低剂量组，D高剂量组。图4竹节参总皂苷对TNFa表达的影响。A正常组，B模型组，C低剂量组，D高剂量组。实施例1所述的竹节参提取物为竹节参皂苷IVa、竹节参皂苷V、竹节参皂苷IV和竹节参皂苷Pjs-2的混合物，其中竹节参皂苷IVa的浓度为90.6mg.g-1、竹节参皂苷V的浓度为24.9mg.g-1、竹节参皂苷IV的浓度为38.7mg.g-1和竹节参皂苷Pjs-2的浓度为39.6mg.g-1。实验动物湖北省动物实验中心提供：健康雄性BABL/c小鼠60只，体重18-24g左右，自然光照周期、于恒温、恒湿条件下标准配方的普通饲料喂养，自由进食进水。仪器和试剂倒置荧光显微镜：日本NikonECLIPSETE2000-S；全波长酶标仪：ThermoElectron公司；凝胶成像系统(GelLogic-200)：美国Kodak公司；高性能梯度PCR仪：德国WhatmanBiometra公司；多功能荧光酶标仪：瑞士Tecan集团公司；ECL化学发光系统：上海欧翔科学仪器有限公司。双氯芬酸：石药集团欧意药业有限公司，临用前用1％羧甲基纤维素配制0.5mg/ml；竹节参总皂苷：成都迪康科技制药公司，临用前用生理盐水溶解0.5mg/ml、1mg/mll、2mg/ml；FD4：美国Sigma公司产品，临用前用PBS溶解配制成20mg/ml溶液；伊文氏蓝：临用前用生理盐水溶解配制成7.5mg/ml溶液。对48只BABL/c小鼠行随机组，标记为：模型组、正常组、竹节参总皂苷100mg/kg、300mg/kg组，连续灌胃六天。于第四天给予双氯芬酸5mg/kg(10mg/ml)灌胃。于第七天对小鼠进行手术取材，行肉眼观察及相关的实验研究。小鼠小肠组织的伊文思蓝染色：小鼠术前禁食(12h)不禁水。劲椎脱臼处死，处死前30min尾静脉注射伊文思蓝，剖腹，分离小肠，PBS液冲洗内容物。沿肠系膜对侧切开小肠，粘膜面朝上平铺固定于玻璃板上，滤纸吸干多余水分，数码相机拍摄。FITC-D检测小肠粘膜通透性：给小鼠10％水合氯醛行腹腔注射(0.2ml/只)，以四肢瘫软，呼吸心跳正常为标准，剖腹，距回盲部2cm处选4-5cm小肠，保持肠系膜血管血液供应正常，两端结扎，肠腔注入0.2ml异硫氰酸荧光素标记葡聚糖(FITC-D)，并予以保温，20min后活体取肝脏，称重、匀浆器冰上研磨，按1g/5ml加入1×PBS液，2000rpm/min、30min离心。取上清液于多功能荧光酶标仪(激发波长480nm和发射波长530nm)测量吸光度值，按标准曲线计算FITC-D含量，用统计学方法对实验数据进行分析。小鼠小肠组织病理学检测：每只小鼠取约2-3cm小肠组织，10％中性甲醛溶液固定，常规石蜡包埋，4um切片，HE染色，倒置荧光显微镜观察组织学改变，组织学评分采用Chiu肠粘膜损伤评分标准[参见表1]。表1.Chiu评分标准统计学分析用spass18.0软件对实验数据行非参数检验和方差分析，结果用平均值与标准差关系表示，(p<0.05)。伊文思蓝染色检测竹节参总皂苷对NASIDs小肠黏膜损伤的保护作用伊文思蓝能够从血管中漏出到组织损伤处致伤损处局部蓝染，图1显示：阴性对照组小鼠小肠黏膜形态正常、粘膜表面干净；模型组小肠组织可见多个散在分布、大小不等的溃疡，多沿肠系膜缘侧分布，溃疡之间有多处水肿，但未见肠道穿孔。竹节参总皂苷给药组，由低浓度至高浓度，肠道粘膜逐渐趋于正常、溃疡数明显减少甚至无明显肉可视变化。竹节参总皂苷对NASIDs模型小肠黏膜通透性的影响实验以FITC-D作为检测探针用于肠粘膜通透性检测。FITC-D是大分子荧光物质，当肠粘膜屏障受损时，它通过损伤部位进入血管而被吸收，因此，通过分光测量该物质的荧光值可反应肠粘膜通透性变化。按标准曲线可测得：模型组肝脏组织中FD4含量显著高于正常组，而竹节参总皂苷预处理组；FITC-D含量随着给药浓度增加，呈下降趋势；结果提示竹节参总皂苷可以改善NSAIDs所致小肠粘膜通透性的增加。(表2)经spass软件进行非参数检验和方差分析得出各组之间差异存在统计学意义(p<0.05)。表2竹节参总皂苷对NSAIDs损伤小肠粘膜的影响a与模型组比较p<0.05组织病理学观察竹节参总皂苷对NSAIDs小肠黏膜组织的保护活性正常对照组小肠黏膜形态结构正常；模型组黏膜绒毛断裂、萎缩，甚至出现脱落或相互融合，大量炎细胞浸润，粘膜下层结构紊乱，形成蜂窝织炎，按Chiu评分标准明显偏高；预防给药组，随着给药浓度增加，粘膜层炎性细胞浸润有所改善，黏膜结构清晰度增加，腺体数目明显改变，膜下层肿胀，结构紊乱明显改善，与模型组对比Chiu评分明显下降。石蜡切片在光镜下观察(图2)：模型组局部粘膜层全层坏死，绒毛坏死脱落，固有层受损，腺体结构消失，粘膜肌层不完整，损伤甚至达粘膜下层，残留绒毛水肿，大量中性粒细胞等炎性细胞浸润；正常组粘膜形态结构无明显改变；给药组，由低浓度至本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种竹节参提取物，其特征在于，所述的竹节参提取物为竹节参皂苷IVa、竹节参皂苷V、竹节参皂苷IV和竹节参皂苷Pjs‑2的混合物，其中竹节参皂苷IVa、竹节参皂苷V、竹节参皂苷IV和竹节参皂苷Pjs‑2的浓度比为20‑28：85‑95：30‑40：30‑45。

【技术特征摘要】
1.一种竹节参提取物在制备治疗肠粘膜损伤的药物上的应用，所述的竹节参提取物为竹节参皂苷IVa、竹节参皂苷V、竹节参皂苷IV和竹节参皂苷Pjs-2的混合物，其中竹节参皂苷IVa的浓度为90.6mg...

【专利技术属性】
技术研发人员：袁丁，张长城，刘朝奇，王婷，周志勇，顿耀艳，赵海霞，
申请(专利权)人：三峡大学，
类型：发明
国别省市：湖北;42