一种荆芥总黄酮的制备方法及其在抗肿瘤中的应用技术

一种荆芥总黄酮的制备方法，其特征在于：取荆芥干燥地上部分及其花穗，去除杂质，粉碎过10目筛，制成粗粉，烘干，加入5-40倍量的浓度为10-95%的乙醇溶液，加热回流提取1-3次，每次0.5-3小时，过滤，合并滤液，回收乙醇至无醇味，减压浓缩至室温下测相对密度为0.8-1.3，真空干燥，即得荆芥总黄酮提取物粗品。进一步纯化能获得高纯度抗癌药物精品。本发明专利技术方法只需一定浓度的乙醇溶液加热回流提取，使用大孔吸附树脂柱纯化，产品稳定性和均一性良好，可为应用到大规模工业生产提供有利基础，可望开发为以荆芥总黄酮纯化物为原料的具有广泛临床使用价值和商业开发价值的抗癌新药。

【技术实现步骤摘要】
一种荆芥总黄酮的制备方法及其在抗肿瘤中的应用
本专利技术属于医药领域，具体而言是涉及从中药荆芥中经过提取、富集，获得荆芥总黄酮的制备方法及其抗癌中的应用。
技术介绍
肿瘤是严重威胁人类健康的一类常见疾病，是人类健康的三大杀手之一，寻找有效的抗癌药物和方法，是世界医学面临的重要课题。中药是祖国医学用来防治疾病的有力武器，与化学合成药物相比，中药除了具有取材方便、价格低廉和毒副作用小等优点外，更重要的是，在减轻临床症状，提高生存质量，防止复发转移，延长生存期，预防肿瘤，提高患者免疫力，增强放、化疗敏感性，减轻放、化疗不良反应等很多方面发挥着重要作用。同时，随着社会的进步，生产力的发展，现代人越来越把注意力从化合成药转向天然药，希望从天然药物中开发出更为安全有效的新药以替代前者，从而减少药源疾病的发生。因此，发展中草药不仅传承了中华民族千百年的精华，也具有广大的市场前景及经济效益。荆芥(穗)为唇形科植物荆芥SchizonepetatenuifoliaBriq.的干燥地上部分(干燥花穗)。全国大部分地区出产，价格低廉，应用广泛。中医认为，荆芥(穗)味辛，微苦，性微湿，归肺、肝经，具有解表散风，透疹，消疮等功效，用于感冒，头痛，麻疹，风疹，疮疡初起。现代临床研究表明荆芥(穗)不仅具有解热镇痛、抗炎抗菌的功效，还有镇静抗惊厥、增强免疫功能、抗肿瘤等作用。荆芥(穗)中含有多种有效成分，包括挥发油、黄酮、单萜、三萜酸、有机酸等。目前，针对荆芥(穗)抗肿瘤作用的研究以挥发油报道居多，而以黄酮类作为有效部位进行的研究则未见报道。本实验经前期药效学实验证明，黄酮为荆芥(穗)抗肿瘤的有效物质组分，具有较高的开发价值，故对其进行进一步的提取纯化工艺考察，优选最佳工艺条件，以期为荆芥(穗)总黄酮组分的进一步药理药效研究奠定基础。根据近年来的文献报道，现有工艺技术制备荆芥(穗)总黄酮存在纯度不高、工艺稳定性差等问题，这必然影响阐明荆芥(穗)总黄酮的成分组成及药效活性的检测，也不利于大规模工业生产及临床应用，因此有必要对荆芥(穗)总黄酮的纯化方法进行研究。本实验通过优选荆芥(穗)总黄酮最佳提取工艺，再对其纯化工艺进行研究，纯化方法可使总黄酮富集物纯度达到90％以上，较为理想。这不仅有利于提高荆芥总黄酮纯度及其工艺的稳定性，也有利于阐明药效物质组分及其临床作用机理，并可应用到新药的开发中。根据文献调研，目前对荆芥(穗)黄酮的研究主要以其抗流感病毒作用居多，而其抗肿瘤作用研究尚未见报道。本专利技术通过意外抗肿瘤试验证明了总黄酮亦有明显的抗肿瘤作用，为以后投入抗肿瘤新药的开发奠定基础。
技术实现思路
本专利技术目的是提供一种荆芥总黄酮的制备方法，及其作为抗癌物质的应用。采用的技术方案是：荆芥为唇形科植物中药材，(SchizonepetatenuifoliaBriq.)。本专利技术是采用荆芥的干燥地上部分及干燥花穗作为原料，提取荆芥的有效成分的提取纯化物，有效成分为总黄酮类，具有抗肿瘤功效。具体是：一种荆芥总黄酮的制备方法，其特征在于：1、取荆芥干燥地上部分及其花穗，去除杂质，粉碎过10目筛，制成粗粉，烘干，加入5-40倍量的浓度为10-95％的乙醇溶液，加热回流提取1-3次，每次0.5-3小时，过滤，合并滤液，回收乙醇至无醇味，减压浓缩至室温下测相对密度为0.8-1.3，真空干燥，即得荆芥总黄酮提取物粗品。2、对荆芥总黄酮提取物粗品加水稀释，稀释成0.1-0.4g生药量/ml的药液，上HPD-400大孔树脂柱，药材/湿树脂比上柱量为0.5-1.5g/ml，先用水冲洗1-5BV柱体积除杂，再用浓度为30-90％的乙醇溶液洗脱1-20BV柱体积，浓缩，得浓缩液，再用水稀释成0.1-0.4g生药/ml的药液，以药液/湿树脂为0.5-1.5g/ml上柱，用1-5BV水洗除杂，再用1-20BV，浓缩为30-90％的乙醇洗脱，回收乙醇至无醇味，即得荆芥总黄酮提取物精品，荆芥总黄酮纯度>90％。本专利技术的荆芥总黄酮提取物能制备多种剂型，并可添加药学上可接受的辅剂及载体应用于临床抗癌新药的研发。经临床实验证明本专利技术的荆芥黄酮提取物具有良好的抗癌效果。本专利技术通过药理药效实验证明，荆芥(穗)总黄酮纯化物随着纯度的上升，抗肿瘤疗效越来越显著，证明荆芥(穗)总黄酮纯化物可作为一种有效的抗癌药物。本专利技术的制备工艺方法简单、药物有效成分提取率高、疗效显著、准确可靠、能更全面地保障中药的疗效和质量，并且与原始直接使用药材水煎液相比，在相同的疗效下，此制备方法所获得的纯化物具有服用剂量小的优点。本专利技术的专利技术人根据临床的需要将荆芥(穗)总黄酮富集物制备为各个剂型而可添加药学上可接受的辅剂及载体供临床选择应用。具体实施方案：实施例一一种荆芥总黄酮的制备方法，包括下述工艺步骤：取荆芥(穗)药材干燥至恒重，粉碎过10目筛，精密称取5.0g，采用常规提取条件，按下述方法进行提取试验，各方法平行两份。乙醇超声提取法加75％乙醇100mL于样品中，室温超声提取1h，滤过，滤渣加100mL75％乙醇再超声提取1h，滤过，合并滤液，浓缩，真空干燥至恒定质量。乙醇回流提取法加75％乙醇100mL于样品中，回流提取1h，滤过，滤渣加100mL75％乙醇再回流提取1h，滤过，合并滤液，浓缩，真空干燥至恒定质量。水回流提取法加100mL水于样品中，回流提取1h，滤过，滤渣加100mL水再回流提取1h，滤过，合并滤液，浓缩，真空干燥至恒定质量。测定结果结果见表1。表1荆芥(穗)黄酮不同提取方法的综合评价结果表明，醇回流提取法提取时，荆芥(穗)中提取总黄酮含量较高，因此确立荆芥(穗)黄酮的最佳提取方法为醇回流提取法。实施例二正交实验设计选取溶剂用量、提取时间、提取次数及乙醇体积分数4个因素，每个因素选择3个水平，因素水平见表2。取荆芥(穗)药材干燥至恒重，粉碎过10目筛，称取粗粉5.0g置250mL圆底烧瓶中，按正交表安排，加入适量相应体积分数乙醇溶液，水浴回流提取，回收乙醇得提取物。按L9(34)正交表安排试验，以总黄酮含量为指标考察各因素对提取效果的影响，试验安排及结果见表3，方差分析见表4。表2荆芥(穗)总黄酮回流提取工艺优选正交试验因素水平表3荆芥(穗)总黄酮提取工艺优选正交试验安排表4总黄酮提取率方差分析注：F0.05(2，2)＝19；p*<0.05结果表明，以总黄酮为指标，直观分析表明影响荆芥黄酮提取效果的因素顺序为B>D>A>C。以极差最小的因素C为误差项，进行方差分析，因素B有显著影响，其他因素则无显著性影响。结合生产周期及成本考虑，确定最佳提取工艺为A2B2C1D3，即溶剂用量为15倍量，乙醇体积分数为75％乙醇，回流提取1h，提取3次。实施例三一、优化工艺的验证试验按照优化提取工艺，即75％乙醇20倍用量，提取3次，每次1h，进行3次验证试验。提取物总黄酮的平均含量为8.93％，RSD％为1.02％，说明该工艺稳定。二、纯化工艺优化实施例四上柱溶液的制备称取荆芥(穗)粗粉5.0g，精密称定，按上述最佳提取工艺进行提取，加20倍量75％乙醇，回流提取3次，每次1h，合并3次提取液，回收乙醇至无醇味，加水稀释成0.1g(生本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种荆芥总黄酮的制备方法，其特征在于：（1）、取荆芥干燥地上部分及其花穗，去除杂质，粉碎过10目筛，制成粗粉，烘干，加入5‑40倍量的浓度为10‑95%的乙醇溶液，加热回流提取1‑3次，每次0.5‑3小时，过滤，合并滤液，回收乙醇至无醇味，减压浓缩至室温下测相对密度为0.8‑1.3，真空干燥，即得荆芥总黄酮提取物粗品。

【技术特征摘要】
1.一种荆芥总黄酮的制备方法，其特征在于：（1）、取荆芥干燥地上部分及其花穗，去除杂质，粉碎过10目筛，制成粗粉，烘干，加入5-40倍量的浓度为10-95%的乙醇溶液，加热回流提取1-3次，每次0.5-3小时，过滤，合并滤液，回收乙醇至无醇味，减压浓缩至室温下测相对密度为0.8-1.3，真空干燥，即得荆芥总黄酮提取物粗品；（2）将步骤1所制得的荆芥总黄酮提取物粗品加水稀释，稀释成0.1-0.4g生药量/ml的药液，上HPD-400大孔树脂柱，药材/湿树脂比上柱量为0.5-1.5g/ml，先用水冲洗1-5BV柱体积除杂，再用浓度为30-90%的乙醇溶液洗脱1-20BV柱体积，浓缩，得浓缩液，再用水稀释成0.1-0.4...

【专利技术属性】
技术研发人员：孟宪生，包永睿，王帅，马聪，
申请(专利权)人：辽宁中医药大学，
类型：发明
国别省市：辽宁;21