一种淋巴细胞免疫分型的方法和试剂盒技术

本发明专利技术属于免疫学技术领域，公开了一种淋巴细胞免疫分型的方法和试剂盒。本发明专利技术提供的淋巴细胞免疫分型的方法，包括：T淋巴细胞免疫分型和B淋巴细胞免疫分型；T淋巴细胞免疫分型包括：取不同的荧光标记的抗体，与待检测样品混合，孵育后，经流式细胞术检测，得检测数据，分析所述检测数据；B淋巴细胞免疫分型包括：取不同的荧光标记的抗体，与新的所述待检测样品混合，孵育后，经流式细胞术检测，得检测数据，分析所述检测数据。本发明专利技术的方法实现了对淋巴细胞进行更加全面的精细免疫分型，所需待测样品少，操作简单、所需时间短、准确性高、可广泛应用于淋巴细胞亚群免疫分型。

【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术属于免疫学
，公开了一种淋巴细胞免疫分型的方法和试剂盒。本专利技术提供的淋巴细胞免疫分型的方法，包括：T淋巴细胞免疫分型和B淋巴细胞免疫分型；T淋巴细胞免疫分型包括：取不同的荧光标记的抗体，与待检测样品混合，孵育后，经流式细胞术检测，得检测数据，分析所述检测数据；B淋巴细胞免疫分型包括：取不同的荧光标记的抗体，与新的所述待检测样品混合，孵育后，经流式细胞术检测，得检测数据，分析所述检测数据。本专利技术的方法实现了对淋巴细胞进行更加全面的精细免疫分型，所需待测样品少，操作简单、所需时间短、准确性高、可广泛应用于淋巴细胞亚群免疫分型。【专利说明】一种淋巴细胞免疫分型的方法和试剂盒
本专利技术属于免疫学
，特别涉及一种淋巴细胞免疫分型的方法和试剂盒。
技术介绍
淋巴细胞（lymphocyte)也称淋巴球，为白细胞中体积最小的一种，直径6-8微米； 在人体约占白细胞数目的20% -30%，圆形细胞核，细胞质很少；由淋巴器官产生，是机体 免疫应答功能的重要细胞成分，是一类具有免疫识别功能的细胞系。淋巴细胞是复杂的异 质性细胞群体，根据其表型和功能特征可分为不同类别，如T细胞、B细胞、NK细胞等，这些 细胞还可以进一步分为若干亚群。淋巴细胞及其亚群在免疫应答过程中相互协作、相互制 约，共同完成对抗原物质的识别、应答和清除，从而维持机体内环境稳定。 早期研究根据淋巴细胞按其发生迁移、表面分子和功能的不同，大体上将淋巴细 胞分为T细胞、B细胞和自然杀伤（NK)细胞。其中T细胞可分为细胞毒性T细胞（cytotoxic T lymphocyte，Tc)、辅助 T 细胞（helper T lymphocyte，Th)、记忆 T 细胞（memory T lymphocyte，Tm)和调节 / 抑制 T 细胞（regulatory/suppressor T lymphocyte) ;B 细胞 可进一步分为记忆B细胞（memory B cell)、楽细胞（plasma cell)、初始B细胞（nalfve B cell)等亚类。 随着科学研究的不断进步，科学家发现了更多的细胞表面标志，可以将各类淋巴 细胞进行更加精细的细胞亚群分类。例如，可以将T细胞进一步划分为：TCRa ￠ +双阴性T 细胞（double negative T lymphocyte，DNT)、Y ST细胞、辅助初始T细胞、辅助耗竭T细 胞、辅助中心记忆T细胞、辅助效应记忆T细胞、细胞毒性初始T细胞、细胞毒性耗竭T细胞、 细胞毒性中心记忆T细胞、细胞毒性效应记忆T细胞。 血液样品中淋巴细胞的种类与机体的免疫系统性能有着重要关系。通过对血液样 品中淋巴细胞进行免疫分型和定量分析，能够更加准确地评价机体的免疫功能，也能够更 好地研究某些疾病的发生、发展以及治疗效果评价。目前，常用于血液样品中的淋巴细胞 免疫分型和定量分析的方法主要有：免疫酶标法、普通淋巴细胞分类、较细淋巴细胞亚群检 测。免疫酶标法只是针对某一种或一类特定的抗原或抗体发生特异反应，检测面窄、操作复 杂、对待检测样品需求量大，费时费力。普通淋巴细胞分类，普遍应用于淋巴细胞检测，但只 能将淋巴细胞分为T细胞、Tc细胞、Th细胞、B细胞和NK细胞，不能进一步对细胞进行分 型。较细淋巴细胞亚群检测依赖于流式细胞术，采用多色流式的方法，对淋巴细胞进行较为 详细的分型，除传统的T细胞、Tc细胞、Th细胞、B细胞和NK细胞外，还检测Tm细胞及细胞 数量。但是，如果想进一步对细胞亚群进行免疫分型和定量分析的话，还需要借助于其他的 细胞免疫分型方法，操作复杂，对待测样品的需求量大，并不适合实际应用。所以，还需要对 淋巴细胞免疫分型和定量分析的方法进行研究，以求尽可能利用简单的方法将淋巴细胞进 行较精细地免疫分型和定量分析。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术的专利技术目的在于提供一种淋巴细胞免疫分型的方法和试剂盒。 该淋巴细胞免疫分型的方法能够对淋巴细胞进行更为全面的精细免疫分型和定量分析，效 率高，且节约了待测样品的用量，更合适淋巴细胞的免疫分型和定量分析。 为了实现本专利技术的专利技术目的，本专利技术采用如下的技术方案： 本专利技术提供了一种用于淋巴细胞免疫分型的方法，包括T淋巴细胞免疫分型和B 淋巴细胞免疫分型； 该T淋巴细胞免疫分型包括： 取不同的荧光标记的抗体，与待检测样品混合，孵育后，经流式细胞术检测，得检 测数据，分析所述检测数据； 该B淋巴细胞免疫分型包括： 取不同的荧光标记的抗体，与新的所述待检测样品混合，孵育后，经流式细胞术检 测，得检测数据，分析所述检测数据； 该T淋巴细胞免疫分型时，所用的抗体包括： 抗TCR a P的抗体、抗TCR Y S的抗体、抗⑶3的抗体、抗⑶4的抗体、抗⑶8的抗 体、抗⑶27的抗体和抗⑶45RA抗体； 该B淋巴细胞免疫分型时，所用的抗体包括： 抗⑶19的抗体、抗IgD的抗体、抗⑶38的抗体、抗⑶24的抗体和抗⑶27的抗体； 该T淋巴细胞免疫分型时，所述分析的方法包括： 细胞表面标志⑶3+TCR a @ +⑶4XD丨代表TCR a @ +双阴性T细胞； 细胞表面标志⑶3+TCR Y S +代表Y S T细胞； 细胞表面标志⑶3+⑶4+⑶45RA+CD27+代表辅助初始T细胞； 细胞表面标志⑶3+⑶4+⑶45RA+CD27_代表辅助耗竭T细胞； 细胞表面标志⑶3+⑶4+⑶45RAXD27+代表辅助中心记忆T细胞； 细胞表面标志⑶3+⑶4+⑶45RAXD27_代表辅助效应记忆T细胞； 细胞表面标志⑶3+⑶8+⑶45RA+CD27+代表细胞毒性初始T细胞； 细胞表面标志⑶3+⑶8+⑶45RA+CD27_代表细胞毒性耗竭T细胞； 细胞表面标志⑶8+⑶45RATD27+代表细胞毒性中心记忆T细胞； 细胞表面标志⑶3+⑶8+⑶45RAXD27_代表细胞毒性效应记忆T细胞； 该B淋巴细胞免疫分型时，所述分析的方法包括： 细胞表面标志⑶19+D27+代表记忆B细胞； 细胞表面标志⑶19+D27_IgD+代表初始B细胞； 细胞表面标志⑶19+⑶24++CD38++代表过渡B细胞； 细胞表面标志⑶19+⑶24TD38++代表浆母细胞。 在本专利技术中，流式细胞术中所用到的抗体可以为与待测样品同源的抗体或也可以 为与待测样品非同源的抗体，只要该抗体能够与待测样品中细胞表面标志物产生抗原-抗 体特异性结合反应即可。 在本专利技术中，" + "代表阳性，即表示该抗原在细胞表面有表达； "++"代表强阳性，即表示该抗原在细胞表面高表达； 代表阴性，即表示该抗原在细胞表面不表达。 淋巴细胞的表面标志是指存在于淋巴细胞表面的膜分子，它们是淋巴细胞识别 抗原、与其他免疫细胞相互作用以及接受信号刺激并产生应答的物质基础，也是鉴别和分 离淋巴细胞的重要依据。在淋巴细胞的分化发育过程中，淋巴样干细胞进一步分化成各 个细胞亚群，赋予了各个细胞亚群特定的表面标志。有些表面标志是淋巴细胞共有的，有 些表面标志是某一类或某几类淋巴细胞特有的，本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于淋巴细胞免疫分型的方法，其特征在于，包括T淋巴细胞免疫分型和B淋巴细胞免疫分型；所述T淋巴细胞免疫分型包括：取不同的荧光标记的抗体，与待检测样品混合，孵育后，经流式细胞术检测，得检测数据，分析所述检测数据；所述B淋巴细胞免疫分型包括：取不同的荧光标记的抗体，与新的所述待检测样品混合，孵育后，经流式细胞术检测，得检测数据，分析所述检测数据；所述T淋巴细胞免疫分型时，所用的抗体包括：抗TCRαβ的抗体、抗TCRγδ的抗体、抗CD3的抗体、抗CD4的抗体、抗CD8的抗体、抗CD27的抗体和抗CD45RA抗体；所述B淋巴细胞免疫分型时，所用的抗体包括：抗CD19的抗体、抗IgD的抗体、抗CD38的抗体、抗CD24的抗体和抗CD27的抗体；所述T淋巴细胞免疫分型时，所述分析的方法包括：细胞表面标志CD3+TCRαβ+CD4‑CD8‑代表TCRαβ+双阴性T细胞；细胞表面标志CD3+TCRγδ+代表γδT细胞；细胞表面标志CD3+CD4+CD45RA+CD27+代表辅助初始T细胞；细胞表面标志CD3+CD4+CD45RA+CD27‑代表辅助耗竭T细胞；细胞表面标志CD3+CD4+CD45RA‑CD27+代表辅助中心记忆T细胞；细胞表面标志CD3+CD4+CD45RA‑CD27‑代表辅助效应记忆T细胞；细胞表面标志CD3+CD8+CD45RA+CD27+代表细胞毒性初始T细胞；细胞表面标志CD3+CD8+CD45RA+CD27‑代表细胞毒性耗竭T细胞；细胞表面标志CD8+CD45RA‑CD27+代表细胞毒性中心记忆T细胞；细胞表面标志CD3+CD8+CD45RA‑CD27‑代表细胞毒性效应记忆T细胞；所述B淋巴细胞免疫分型时，所述分析的方法包括：细胞表面标志CD19+D27+代表记忆B细胞；细胞表面标志CD19+D27‑IgD+代表初始B细胞；细胞表面标志CD19+CD24++CD38++代表过渡B细胞；细胞表面标志CD19+CD24‑CD38++代表浆母细胞。...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：赵晓东，周丽娜，
申请(专利权)人：重庆医科大学附属儿童医院，
类型：发明
国别省市：重庆;85