本发明专利技术公开了一种黄原胶及同类胶体微生物指标的检测方法，包括：制作平板计数琼脂(plate count agar，PCA)培养基，制作磷酸盐缓冲液，将待测样品加入到磷酸盐缓冲液中进行稀释，制备样品平板，将平板置于恒温培养箱内进行培养，对平板上的菌落进行计数，对菌落总数进行计算，对菌落总数进行表达与形成报告等步骤；本发明专利技术的检测方法解决了GB/T4789中黄原胶无法溶解的缺点，简单易行，且更适合于企业实验室的实际操作，在黄原胶胶体检测方面具有较大的价值与进步意义。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及，属于胶体微生物的检测方法领域。
技术介绍
目前，在食品安全越来越受到重视的大背景下，食品添加剂及添加剂内微生物的含量是食品行业里一个非常重要的检测对象，作为一种无毒的食品添加剂黄原胶及同类胶体来说，其在食品中扮演着乳化剂、稳定剂、增稠剂等非常重要的角色。但黄原胶及同类胶体在出厂时微生物指标应达到食品添加剂黄原胶国标-GB13886-2007的标准。黄原胶的微生物指标在国标中的检测方法是按照GB/T 4789中规定的方法检测的，此方法对于黄原胶这种增稠效果特别明显的增稠剂不适用，如果按照GB/T 4789中规定的方法，在实际操作中，因为黄原胶虽然易溶于水，但其有极其卓越的增稠性，百分之一的水溶液其粘度已达1500cp左右。而如果按照GB/T 4789的方法中规定的25g样品加入至225ml缓冲液中，根本无法溶解，后续的一系列操作也就无法进行。因此，常规方法中检测胶体微生物的做法对于黄原胶这一特列来说是行不通的，针对这种情况，本专利技术研究出了一种新的、针对工厂和检测机构都实用的检测方法。
技术实现思路
，其特征是所述检测方法如下: (I)制作平板计数琼脂(plate count agar, PCA)培养基:将成分为胰蛋白胨5.0g、酵母浸膏2.5g、葡萄糖1.0g、琼脂15.0g的培养基原料加入到100ml的蒸馏水中，煮沸溶解，调节pH至7.0±0.2，然后分装到锥形瓶，在121°C下高压灭菌25min，然后冷却到460C _48°C后放置于恒温干燥箱中保温； (2)制作磷酸盐缓冲液:称取34.0g磷酸二氢钾(KH2PO4)溶于500mL蒸馏水中，用lmol/L氢氧化钠溶液调节pH至7.2，用蒸馏水稀释至100mL后贮存于冰箱，为贮存液；取贮存液1.25mL，用蒸馏水稀释至100mL,分装10ml于250ml锥形瓶和9ml于玻璃试管中，121°C高压灭菌25min，为稀释液； (3)将待测样品加入到磷酸盐缓冲液中进行稀释:称取1.0Og黄原胶成品(或0.25g黄原胶半成品)，加入盛有10mL磷酸盐稀释液的已灭菌的250mL锥形瓶中，封口，静置浸泡1-4小时(如浸泡时间超过2小时必须放入2-5°C冰箱中)，置于摇床上震荡摇匀(成品约30min，半成品约30-60min)，制成1: 100 (半成品1: 400)的样品匀液； (4)制备样品平板:分别吸取2ml样品匀液加入到两个无菌平皿中，从恒温保温箱中取46-48°C的平板计数琼脂培养基15ml-20ml倾注到平皿中，并转动两平皿使其混合均匀。同时做两个空白平板进行对照； (5)将平板置于恒温培养箱内进行培养:琼脂凝固后，将平板翻转，置于36 °C ±1V恒温培养箱内培养48h 土 2h ； (6)对平板上的菌落进行计数:以菌落形成单位(colony-forming unites, CFU)进行表示两平板的菌落数NI和N2，菌落计数时采用两个平板的平均数； (7)对菌落总数进行计算:菌落总数的计算方法为TPC = (N1+N2)*稀释倍数/2 ；[0011 ] (8)对菌落总数进行表达与形成报告。 所述步骤(6)中，对菌落进行计数时，选取菌落数在30CFU-300CFU之间、无蔓延菌落生长的平板计数菌落总数，低于30CFU的平板记录具体菌落数，大于300CFU的记录为多不可计。 所述步骤(6)中，对菌落进行计数时，其中一个平板上有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数；若片状菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均匀，即可计算半个平板乘以2，代表一个平板菌落数。 所述步骤￠)中，对菌落进行计数时，当平板上出现菌落间无明显界限的链状生长时，则将每条单链作为一个菌落计数。 所述步骤(8)中，在对菌落总数进行表达与形成报告时，按照以下方法形成报告: a.菌落数在100以内时，按“四舍五入”原则修约，采用两位有效数字报告； b.大于或等于100时，第三位数字采用“四舍五入”原则修约后，取前两位数字，后面用O代替个位数； c.平板无菌落生长，则以小于I乘以稀释倍数计算； d.若所有平板上为蔓延菌落而无法计数，则报告菌落蔓延，进行复检； e.若空白对照上有菌落生长，则此次检测结果无效，进行复检； f.以CFU/g为单位报告。 【具体实施方式】 以下为本专利技术较佳的实施方式，并不因此而限定了本专利技术的保护范围。 ，其特征是所述检测方法如下； (I)制作平板计数琼脂(plate count agar, PCA)培养基:将成分为胰蛋白胨5.0g、酵母浸膏2.5g、葡萄糖1.0g、琼脂15.0g的培养基原料加入到1000ml的蒸馏水中，煮沸溶解，调节pH至7.0±0.2，然后分装到锥形瓶，在121°C下高压灭菌25min，然后冷却到460C _48°C后放置于恒温干燥箱中保温； (2)制作磷酸盐缓冲液:称取34.0g磷酸二氢钾(KH2PO4)溶于500mL蒸馏水中，用lmol/L氢氧化钠溶液调节pH至7.2，用蒸馏水稀释至100mL后贮存于冰箱，为贮存液；取贮存液1.25mL，用蒸馏水稀释至100mL,分装10ml于250ml锥形瓶和9ml于玻璃试管中，121°C高压灭菌25min，为稀释液； (3)将待测样品加入到磷酸盐缓冲液中进行稀释:称取1.0Og黄原胶成品(或0.25g黄原胶半成品)，加入盛有10mL磷酸盐稀释液的已灭菌的250mL锥形瓶中，封口，静置浸泡1-4小时(如浸泡时间超过2小时必须放入2-5°C冰箱中)，置于摇床上震荡摇匀(成品约30min，半成品约30-60min)，制成1: 100 (半成品1: 400)的样品匀液； (4)制备样品平板:分别吸取2ml样品匀液加入到两个无菌平皿中，从恒温保温箱中取46-48°C的平板计数琼脂培养基15ml-20ml倾注到平皿中，并转动两平皿使其混合均匀。同时做两个空白平板进行对照； (5)将平板置于恒温培养箱内进行培养:琼脂凝固后，将平板翻转，置于36 °C ±1V恒温培养箱内培养48h 土 2h ； (6)对平板上的菌落进行计数:以菌落形成单位(colony-forming unites, CFU)进行表示两平板的菌落数NI和N2，菌落计数时采用两个平板的平均数； (7)对菌落总数进行计算:菌落总数的计算方法为TPC = (N1+N2) *稀释倍数/2 ； (8)对菌落总数进行表达与形成报告。 所述步骤(6)中，对菌落进行计数时，选取菌落数在30CFU-300CFU之间、无蔓延菌落生长的平板计数菌落总数，低于30CFU的平板记录具体菌落数，大于300CFU的记录为多不可计。 所述步骤(6)中，对菌落进行计数时，其中一个平板上有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数；若片状菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均匀，即可计算半个平板乘以2，代表一个平板菌落数。 所述步骤￠)中，对菌落进行计数时，当平板上出现菌落间无明显界限的链状生长时，则将每条单链作为一个菌落计数。 所述步骤(8)中，在对菌落总数进行表达与形成报告时本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种黄原胶及同类胶体微生物指标的检测方法，其特征是所述检测方法如下：(1)制作平板计数琼脂(plate count agar，PCA)培养基：将成分为胰蛋白胨5.0g、酵母浸膏2.5g、葡萄糖1.0g、琼脂15.0g的培养基原料加入到1000ml的蒸馏水中，煮沸溶解，调节pH至7.0±0.2，然后分装到锥形瓶，在121℃下高压灭菌25min，然后冷却到46℃‑48℃后放置于恒温干燥箱中保温；(2)制作磷酸盐缓冲液：称取34.0g磷酸二氢钾(KH2PO4)溶于500mL蒸馏水中，用1mol/L氢氧化钠溶液调节pH至7.2，用蒸馏水稀释至1000mL后贮存于冰箱，为贮存液；取贮存液1.25mL，用蒸馏水稀释至1000mL，分装100ml于250ml锥形瓶和9ml于玻璃试管中，121℃高压灭菌25min，为稀释液；(3)将待测样品加入到磷酸盐缓冲液中进行稀释：称取1.00g黄原胶成品(或0.25g黄原胶半成品)，加入盛有100mL磷酸盐稀释液的已灭菌的250mL锥形瓶中，封口，静置浸泡1‑4小时(如浸泡时间超过2小时必须放入2‑5℃冰箱中)，置于摇床上震荡摇匀(成品约30min，半成品约30‑60min)，制成1∶100(半成品1∶400)的样品匀液；(4)制备样品平板：分别吸取2ml样品匀液加入到两个无菌平皿中，从恒温保温箱中取46‑48℃的平板计数琼脂培养基15ml‑20ml倾注到平皿中，并转动两平皿使其混合均匀。同时做两个空白平板进行对照；(5)将平板置于恒温培养箱内进行培养：琼脂凝固后，将平板翻转，置于36℃±1℃恒温培养箱内培养48h±2h；(6)对平板上的菌落进行计数：以菌落形成单位(colony‑forming unites，CFU)进行表示两平板的菌落数N1和N2，菌落计数时采用两个平板的平均数；(7)对菌落总数进行计算：菌落总数的计算方法为TPC＝(N1+N2)*稀释倍数/2；(8)对菌落总数进行表达与形成报告。...
【技术特征摘要】
1.一种黄原胶及同类胶体微生物指标的检测方法，其特征是所述检测方法如下: (1)制作平板计数琼脂(platecount agar, PCA)培养基:将成分为胰蛋白胨5.0g、酵母浸膏2.5g、葡萄糖l.0g、琼脂15.0g的培养基原料加入到100ml的蒸馏水中，煮沸溶解，调节PH至7.0±0.2，然后分装到锥形瓶，在121 °C下高压灭菌25min，然后冷却到460C _48°C后放置于恒温干燥箱中保温； (2)制作磷酸盐缓冲液:称取34.0g磷酸二氢钾(KH2PO4)溶于500mL蒸馏水中，用Imol/L氢氧化钠溶液调节pH至7.2，用蒸馏水稀释至100mL后贮存于冰箱，为贮存液；取贮存液1.25mL，用蒸馏水稀释至100mL,分装10ml于250ml锥形瓶和9ml于玻璃试管中，121 °C高压灭菌25min，为稀释液； (3)将待测样品加入到磷酸盐缓冲液中进行稀释:称取1.0Og黄原胶成品(或0.25g黄原胶半成品)，加入盛有10mL磷酸盐稀释液的已灭菌的250mL锥形瓶中，封口，静置浸泡1-4小时(如浸泡时间超过2小时必须放入2-5°C冰箱中)，置于摇床上震荡摇匀(成品约30min，半成品约30-60min)，制成1: 100 (半成品1: 400)的样品匀液； (4)制备样品平板:分别吸取2ml样品匀液加入到两个无菌平皿中，从恒温保温箱中取46-480C的平板计数琼脂培养基15ml-20ml倾注到平皿中，并转动两平皿使其混合均匀。同时做两个空白平板进行对照； (5)将平板置于恒温培养箱内进行培养:琼脂凝固后，将平板翻转，置于36°C土1°C恒温培养箱内培养48h 土 2h ； (6)对平板上的菌落进行计数:以菌落形成单位(colony-formin...
【专利技术属性】
技术研发人员：托建刚，董金儒，
申请(专利权)人：鄂尔多斯市中轩生化有限公司，
类型：发明
国别省市：内蒙古;15
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